AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE EXTRATOS VEGETAIS SOBRE O CRESCIMENTO MICELIAL DE FITOPATÓGENOS

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1 AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE EXTRATOS VEGETAIS SOBRE O CRESCIMENTO MICELIAL DE FITOPATÓGENOS Talita Pereira de Souza Ferreira 1 ; Luiz Gustavo de Lima Guimarães 2 1 Aluna do Curso de Engenharia Biotecnológica e Bioprocessos; Campus de Gurupi; rod.talita@hotmail.com PIBIC/CNPq 2 Orientador, professor do Curso de Engenharia Biotecnológica e Bioprocessos; Campus de Gurupi; lgguimaraes@mail. uft.edu.br RESUMO A atividade fungitóxica dos extratos metanólicos de 10 plantas medicinais do Cerrado brasileiro sobre o crescimento micelial dos fungos fitopatogênicos Sclerotium rolfsii e Rizoctonia solani foi determinada no presente trabalho. O efeito antifúngico foi realizado pela adição das concentrações de 250, 500, 1000, 2500 e 5000 µg ml -1 dos extratos em meio de cultura BDA. A porcentagem de inibição dos micélios pode ser observada aferindo-se em diâmetros opostos culturas puras em triplicata dos dois fungos citados. Nos bioensaios, verificou-se o efeito significativo dos fatores planta, concentração e também da interação destes sobre as atividades antifúngicas dos extratos. Algumas plantas medicinais não apresentaram efeito relevante. O extrato de Lantana sp. sobre o crescimento micelial do S. rolfsii apresentou efeito inibitório em todas as concentrações, encontrando-se inibição de 97,00%. Ao extrato metanólico de Piper sp., a inibição da mais elevada concentração foi de 83,57% para o S. rolfsii e 74,76% para o R. solani, sendo observadas variações em todas as concentrações. Tais resultados evidenciam a potencialidade dos extratos metanólicos de Lantana sp. e de Piper sp. no controle dos fitopatógenos estudados, no entanto, faz se necessário a realização de estudos futuros para o fracionamento do extrato, para identificação da(s) molécula(s) que exercem tais atividades. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, num esquema fatorial de 10 x 2 x 5. Análise de regressão para avaliar porcentagens de inibição do crescimento micelial foi realizada, em relação à concentração, utilizando o programa SISVAR. Palavras-chave: Extrato metanólico; Sclerotium rolfsii; Rhizoctonia solani; Atividade fungitóxica INTRODUÇÃO O feijão comum (Phaseolus vulgaris) é um dos alimentos mais consumidos pela população. Sua importância social se deve ao fato de ser uma cultura que gera muitos empregos, uma vez que, uma grande mão de obra é demandada (FERREIRA et al., 2006). A produção brasileira aparece em 2º

2 lugar com 16,2% da produção mundial, sendo que a mesma foi de toneladas em O estado do Tocantins se destaca nacionalmente por ter colhido toneladas somente na safra de 2011 desta leguminosa (IBGE, 2012). Contudo, os riscos de perdas provocados por pragas e doenças diminuem a rentabilidade desta cultura para os produtores, causando uma menor exploração desta cultura (GONÇALVES-VIDIGAL et al., 2007; CUNHA et al., 2005). Dentre as mais importantes citase a podridão do colo causada pelo fungo Sclerotium rolfsii e a mela pelo fungo Rhizoctonia solani. Muitos estudos têm relatado as atividades fungitóxicas de diversos extratos vegetais, como Vogt et al. (2012), que estudando os efeitos do extrato da planta medicinal originária da Argentina Larrea divaricata concluiu que seu extrato sustentava o uso empírico no tratamento de algumas doenças vegetais inclusive com elevada taxa de atividade antifúngica, o que potencialmente a torna uma fonte natural no controle biológico. Fiori et al. (2000), relataram que os extratos das plantas Eucalyptus citriodora e Ageratum conyzoides inibiram o crescimento micelial do fungo fitopatogênico Didymella bryoniae enquanto que A. conyzoides e Achillea millefolium inibiram a germinação dos esporos deste mesmo fungo. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo estudar a atividade fungitóxica de extratos vegetais de dez plantas sobre a inibição do crescimento micelial de Sclerotium rolfsii e Rhizoctonia solani, de maneira a desenvolver meios alternativos e eficazes de controle da podridão do colo e da mela causadas por estes fitopatógenos na cultura do feijão comum. MATERIAL E MÉTODOS Coleta e extração dos Extratos Vegetais Foram coletadas dez espécies vegetais: Sucupira (Pterodon emarginatus), Mastruz (Chenopodium ambrosioides), Hortelã (Mentha piperita), Terramicina (Alternanthera dentata), Negramina (Siparuna guianensis Aublet), Pimenta (Piper sp.), Lantana (Lantana sp.) e três espécies vegetais ainda não identificadas, e que foram denominadas de planta oito, planta nove e planta dez. Foram encaminhadas para o Laboratório de Química do Campus de Gurupi UFT, onde foram secas à sombra em temperatura ambiente, cortadas e submetidas a extrações com metanol a frio, foram 30 g de planta para 1,5 litros de solvente por extração num período de 7 dias. Após, a mistura foi filtrada e evaporada sob pressão reduzida, para a obtenção dos extratos (COSTA et al., 2008). Isolamento dos Fungos Utilizados nos Bioensaios

3 Os fitopatógenos Sclerotium rolfsii e Rhizoctonia solani foram isolados de plantas de feijoeiro comum Phaseolus vulgaris com sintomas da doença (podridão do colo e podridão radicular) da seguinte forma: as folhas sintomáticas foram cortadas e lavadas em água corrente. Em seguida foram desinfestadas superficialmente pela imersão em etanol a 70 % por 30 segundos, solução de hipoclorito a 1 % por 40 segundos e três vezes em água desmineralizada. Após, foram transferidas com auxílio de uma pinça esterilizada para placas de Petri contendo 15 ml de meio de cultura BDA e 1 mg de Ampicilina. As placas de Petri foram supervisionadas diariamente e as colônias fúngicas repicadas em novas placas com o mesmo meio de cultura (VALADARES et al, 2008). Atividade Biológica e Delineamento Experimental Os isolados de culturas puras dos fitopatógenos S. rolfsii e R. solani com 7 dias de idade foram testados separadamente para avaliação da atividade fungitóxica. Ao meio de cultura BDA (Batata- Dextrose-Ágar), concentrações de 250, 500, 1000, 2500 e 5000 µg ml -1 de extrato metanólico das plantas foram adicionados em cada placa e também se utilizou uma testemunha absoluta para cada microrganismo. Discos de micélio-ágar de 5 mm de diâmetro das culturas puras, foram inoculados no centro da superfície da placa de Petri com os respectivos tratamentos. Foram incubadas em câmara BOD (25 ± 1 o C) e fotoperíodo de 12 horas. A avaliação foi estimada por medições dos diâmetros das colônias assim que as testemunhas cobrissem completamente a placa. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com três repetições num esquema fatorial de 10 x 2 x 5 para avaliação em combinações das dez espécies de plantas, dois fungos fitopatogênicos e cinco concentrações de extratos. Análise de regressão para avaliar a porcentagem de inibição do crescimento micelial foi realizada, em relação à concentração, utilizando o programa estatístico SISVAR. RESULTADOS E DISCUSSÃO Verificou-se efeito significativo dos fatores planta, concentração e também da interação desses fatores sobre as atividades antifúngicas apresentadas pelos extratos em cada ensaio. O efeito do extrato de Lantana sp. sobre o crescimento micelial de R. solani foi observado nas concentrações de 1000, 2500 e 5000 µg ml -1, sendo que na maior concentração houve inibição de 63,81%. Já com o fungo S. rolfsii, o extrato metanólico desta apresentou efeito inibitório em todas as concentrações, sendo encontrada uma inibição de 97,00% com a maior concentração. Da mesma forma, o extrato da planta nove reduziu significativamente o crescimento dos micélios dos dois fungos estudados. A inibição começou a ser verificada a partir da segunda concentração, no entanto com a maior concentração obteve-se 72,38% de inibição micelial sobre o S.

4 rolfsii e 54,76% sobre o R. solani. Ao extrato de Piper sp., a inibição da mais elevada concentração foi de 83,57% para o S. rolfsii e 74,76% para o R. solani, sendo que as inibições foram observadas a partir das menores concentrações. Análises de regressão da inibição micelial em relação às concentrações dos extratos metanólicos de Lantana sp. e da planta nove seguiram equações de 2ª ordem. Já perante as concentrações do extrato de Piper sp., obedeceram equações lineares. Os extratos das plantas de Alternanthera dentata, oito e dez, não inibiram os micélios do fitopatógeno S. rolfsii. Por outro lado, o fitopatógeno R. solani mostrou-se sensível a atividade fungitóxica dos extratos de todas as plantas. Porém alguns extratos mesmo na maior concentração apresentaram baixos percentuais de inibição do crescimento micelial do mesmo, como os extratos de Pterodon emarginatus, planta oito, Chenopodium ambrosioides, Siparuna guianensis Aublet, planta dez e Alternanthera dentata, que apresentaram as seguintes atividades: 23,81, 32,86, 24,05, 13,81, 46,90 e 20,00%, respectivamente. Em relação a variável concentração, de acordo com as análises de regressão, as inibições miceliais destes extratos seguiram equações de 2º grau, exceto para as inibições causadas pelas diferentes concentrações do extrato de Alternanthera dentata, que seguiram uma equação de 1º grau. Os extratos de Mentha piperita, Chenopodium ambrosioides, Siparuna guianensis Aublet e Pterodon emarginatus, sobre a inibição do crescimento micelial do fitopatógeno S. rolfsii, apresentaram as seguintes inibições perante a concentração mais elevada dos extratos destas espécies: 36,00, 4,52, 6,19 e 10,47%, respectivamente. No entanto o extrato metanólico de Mentha piperita sobre o R. solani mostrou uma inibição considerável de 50,71%, em sua maior concentração. Muitos estudos têm apresentado resultados que corroboram com os encontrados neste trabalho, como os realizados com extratos vegetais de Ocimum basilicum (alfavaca), Ruta graveolens (arruda), Baccharis trimera (carqueja), as quais apresentaram atividade antifúngica contra Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Alternaria alternata, Phythophtora sp. e Colletotrichum graminicola (STARGALIN et al., 1999). Efeitos significados foram verificados na concentração de 1% para o extrato de açafrão o qual levou a uma inibição superior a 50% do crescimento do Fusarium oxysporum (61,15%) e R. solani (61,1%) (AMARAL e BARA, 2005). LITERATURA CITADA AMARAL, M. F. Z. J.; BARA, M. T. F. Avaliaçâo da Atividade Antifúngica de Extratos de Plantas sobre o Crescimento e Fitopatógenos. Revista Eletrônica de Farmácia, Suplemento Vol 2 (2), 5-8, 2005.

5 COSTA, F. J.; BANDEIRA, P. N.; ALBURQUERQUE, M. R. J. R.; PESSOA, O. D. L.; SILVEIRA, E. R. BRAZ-FILHO, R. Constituintes Químicos de Vernonia chalybaea Mart. Química Nova, v. 31, n. 7, p , CUNHA, J. P. A. R.; TEIXEIRA, M. M.; VIEIRA, R. F.; Avaliação de Pontas de Pulverização Hidráulicas na Aplicação de Fungicida em Feijoeiro. Ciência Rural, v. 35, n. 5, p , set-out, FERREIRA, M. F.; SANTOS, M. L.; BRAGA, M. J.; PELOSO, M. J. D. Aspectos Econômicos. In: VIEIRA, C.; PAULA JÚNIOR, T. J.; BORÉM, A. Feijão. Viçosa: UFV, 2 ed, p , FIORI, A.C.G.; SCHWAN-ESTRADA, K. R. F.; STANGARLIN, J.R.; VIDA, J.B.; CRUZ, M. E. S.; PASCHOLATI, S. F. Antifungal Activity of Leaf Extracts and Essential Oils of some Medicinal Plants against Didymella bryoniae. Journal Phytopathology 148, , GONÇALVES-VIDIGAL, M. C.; BONETT, L. P., FILHO, P. S. V.; GONELA, A.; RIBEIRO, A. S. Genetic Controlo in the Performance of Common Bean Diferential Cultivars to Colletotrichum lindemuthianum races. Brazilian Archives of Biology and Technology, v. 50, n. 4, p , jul, INSTITUTO BRASILEIRO DE GEOGRAFIA E ESTATÍSTICA IBGE. Levantamento Sistemático da Produção (SIDRA). Disponível em: Acesso em: 11 de maio de STANGARLIN, J.R.; SCHWAN-ESTRADA, K.R.F.; SILVA CRUZ, M.E.; NOZAKI, M.H. Plantas Medicinais e Controle Alternativo de Fitopatógenos. Biotecnol. Ciênc. Desenv., n.11, p.16-21, VALADARES, R. B. S.; PEREIRA, M. C.; KASUYA, M. C. M.; CARDOSO, E. J. B. N. Isolamento e Identificação de Fungos Micorrízicos de Gomeza sp. (Orchidaceae) em uma Floresta de Araucária do Estado de São Paulo. In: Fertbio, 2008, Londrina. Anais , VOGT, V.; CIFUENTE, D; TONN, C. SABINI, L.; ROSAS, S. Antifungal Activity In Vitro and In ivo of Extracts and Lignans Isolated from Larrea Divaricata Cav. Against Phytopathogenic Fungus. Industrial Crops And Products.42 (2013) , 2012 AGRADECIMENTOS "O presente trabalho foi realizado com o apoio do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico CNPq Brasil"