HISTOLOGIA E SEUS MÉTODOS DE ESTUDO Histologia Estudo dos tecidos do corpo e como eles se organizam para constituir órgãos. Tecidos fundamentais tecido epitelial, tecido conjuntivo, tecido muscular e tecido nervoso. Tecidos = Células + Matriz Extracelular (MEC) O conhecimento sobre as células progride paralelamente ao aperfeiçoamento dos métodos de investigação. PREPARAÇÃO DE TECIDOS PARA EXAME MICROSCÓPICO Fixação evitar a digestão do tecido por enzimas presentes nas próprias células (autólise) ou em bactérias; endurecer os fragmentos; preservar em grande parte a estrutura e composição molecular dos tecidos. Utilização de Fixadores - Pequenos fragmentos - Perfusão intravascular Fixadores - Solução isotônica tamponada de formaldeído à 4% - Glutaraldeído tamponado e tetróxido de ósmio Inclusão substâncias que proporcionam rigidez aos tecidos Microscopia de luz parafina e resina Microscopia eletrônica resina Inclusão em parafina - Desidratação (soluções crescentes de etanol) - Diafanização ou clareamento (xilol) - Parafina derretida (56-60 o C)
Microtomia Ultramicrotomia
Fixação física por congelamento Coloração Basófilos componentes dos tecidos que se coram bem com componentes básicos (hematxilina, azul de toluidina, azul de metileno) (ácidos nucléicos, glicosaminoglicanos e glicoproteínas ácidas). Acidófilos componentes dos tecidos que se coram bem com corantes ácidos (eosina, orange G, fucsina ácida) (mitocondrias, grânulos de secreção, proteínas citoplasmáticas, colágeno). Hematoxilina-Eosina (HE) Hematoxilina - azul ou violeta o núcleo das células e outras estruturas ácidas Eosina citoplasma e colágeno em cor de rosa Tricrômicros (de Mallory e de Masson) Núcleo, citoplasma, diferenciação de colágeno e músculo liso entre si.
MICROSCOPIA DE LUZ Microscópio óptico descobrimento das células e a elaboração da teoria de que todos os seres vivos são constituídos de células. Preparações coradas são observadas por iluminação que atravessa o espécime. Composto por partes mecânicas e ópticas Componente óptico consiste em três sistemas de lentes: condensadora, objetivas e oculares. Condensador: concentra a luz de uma lâmpada e projeta um feixe luminoso sobre a espécime. Objetivas: recebem a luz que atravessou o espécime e projeta uma imagem aumentada do objeto em direção à ocular. Oculares: recebe a imagem aumentada e novamente amplia imagem e projeta na retina, em uma tela, em uma câmera fotográfica ou um detector eletrônico.
MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE E DE CONTRASTE DIFERENCIAL DE INTERFERÊNCIA Permite a observação de células e cortes não corados. (espécimes biológicos não corados são geralmente transparentes e difíceis de serem observados com detalhes, pois todas as partes do espécime tem quase a mesma densidade óptica). A luz muda sua velocidade ao atravessar estruturas celulares e extracelulares que tenham índice de refração diferentes. Observação de células vivas. Microscopia de contraste diferencial (microscopia Nomarski) imagem aparentemente tridimensional. MICROSCOPIA CONFOCAL Os microscópios confocais dependem de grande capacidade de computação. Um plano focal delgado é focalizado de cada vez reconstrução em objeto tridimensional.
MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA Substâncias irradiadas por luz de um certo comprimento de onda, elas emitem luz com um comprimento de onda mais longo fluorescência. MICROSCOPIA ELETRÔNICA Microscopia eletrônica de transmissão e de varredura baseia-se na interação entre elétrons e componentes dos tecidos. Microscópio eletrônico detalhes das estruturas celulares. Separação de organelas intracelulares para o estudo de suas moléculas e respectivas funções.
HISTOQUÍMICA E CITOQUÍMICA Identificação e localização de diversas moléculas constituintes das células. A partir de reações químicas específicas ou por interações de alta afinidade entre moléculas. - Íons, - Ácidos nucléicos, - Proteínas, - Polissacarídeos e oligossacarídeos, - Lipídios. IMUNOHISTOQUÍMICA E IMUNOCITOQUÍMICA