Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 1

Transcrição

1 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 1 MICROSCOPIO DE LUZ: 1000 a 1500 x Até 5000 x

2 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 2 MICROSCOPIO DE LUZ : Partes do Microscópio de Luz:

3 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 3 MICROSCOPIO DE LUZ: Bacterioscopia ao Microscópio de Luz: Preparação a fresco Preparação coradas Diâmetro da célula bacteriana: 1 a 2 micrômetros 1 micrômetro = 1 m = 10-6 m Bactéria 1-2 m = 1-2 x 10-6 m Microscópio Luz 1000 x (10 3 ) Bactéria = 10-3 m = 1 a 2 mm

4 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 4 MICROSCOPIO DE LUZ: Aumento de 1000 x no Microscópio de Luz: Objetiva de Imersão: Ar Água

5 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 5 MICROSCOPIA ELETRÔNICA: Microscópio Eletrônico de Transmissão Descoberto em 1932 ME Transmissão (MET): x ME Varredura (MEV): x

6 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 6 MICROSCOPIA ELETRÔNICA: ME Transmissão ME Varredura

7 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 7 MICROSCOPIA ELETRÔNICA: Microscópio Eletrônico Transmissão Estudo da ultraestrutura celular; Bactéria Microvilosidade Microeletronografia Envoltórios Bactéria Enterócito Microeletronografia Colorizada Vermelho: DNA Genômico

8 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 8 MICROSCOPIA ELETRÔNICA: Microscópio Eletrônico Varredura Estudo da morfologia da célula;

9 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 9 MICROSCOPIA ELETRÔNICA: Microscópio Eletrônico Varredura

10 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 10 Os Métodos de Coloração Facilitam a Visualização dos Microrganismos ao Microscópio Óptico Preparação a fresco Preparação corada Caracterização da Morfologia da Bactéria

11 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 11 MÉTODOS DE COLORAÇÃO DIFERENCIAIS: Método de Coloração Diferencial Morfologia Reação Tintorial Identificação Método de Coloração de Gram: Coco Reação Positiva Agrupados Predominantemente em Cachos de Uvas Staphylococcus Bastonete Reação Positiva Esporulado Bacillus Clostridium Método de Coloração de Ziehl-Neelsen: : Bastonete Reação Positiva Micobactérias (Gênero Mycobacterium) M. leprae M. tuberculosis

12 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 12 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Solução de Cristal Violeta Solução de Iôdo de Gram (Lugol) Solução de Álcool Etílico 95% ou Acetona Solução de Safranina ou Fucsina Diluída 1 minuto 1 minuto o suficiente 30 seg Corante Mordente Descorante Corante Interpretação do Resultado: Reação Positiva = Roxo Reação Negativa = Rosa

13 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 13 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Hipóteses que Explicam a Diferenciação das Bactérias: Espessura da Camada de Peptidioglicano: ParedeCelular Gram Positiva Membrana Celular Gram Negativa Desorganização da Membrana Externa das Bactérias Gram Negativas pelo Diferenciador (Solvente Orgânico): Presença de Ácidos Teicóicos nas Bactérias Gram Positivas ;

14 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 14 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Cocos Gram positivo agrupados em cachos de uva Cocos Gram positivo agrupados em cadeias Cocos Gram positivo agrupados em tétrades

15 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 15 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Cocos Gram positivo agrupados 2 a 2 (diplococos) Bastonetes Gram positivo não esporulados Bastonetes Gram positivo esporulados

16 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 16 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE GRAM: Bastonetes Gram lábeis não esporulados Cocos Gram negativo agrupados 2 a 2 (diplococos) intra e extracelulares Bastonetes (cocobacilos) Gram negativo

17 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 17 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN: Solução de Fucsina de Ziehl-Neelsen, fenicada, concentrada à quente por 5 min Solução Álcool Ácida Solução de Azul de Metileno Corante Descorante Corante Interpretação do Resultado: Reação Positiva = Vermelha Reação Negativa = Azul BAAR= Bacilo Álcool- Ácido Resistente

18 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 18 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN: Hipóteses que Explicam a Diferenciação das Bactérias: Composição da Parede Celular das Micobactérias: Polipeptídios (Ex.: tuberculina) Lipídios Livres (Ex.: fator corda, ceras, micosídios ) Camada Micolato Arabinogalactano D-arabinose e D-galactose Ácidos Micólicos Citoplasma Camada de Peptidioglicano Membrana Citoplasmática Ácido D-glutâmico - Ac. m-diaminopimélico e L-alanina

19 Microscopia e Método de Coloração Bacteriana 19 MÉTODO DE COLORAÇÃO DE ZIEHL-NEELSEN: Tuberculose Hanseníase Globia