Efeito do ectoplasma utilizando Allium cepa como sistema teste ROSANA SILISTINO RICCHARD HALLAN HERNANDE LEITE 1
OBJETIVO Investigar os efeitos do ectoplasma sobre células de Allium cepa como modelo teste. 2
Ectoplasmia: objeto do estudo O pesquisador Charles R. Richet (1850-1935), em 1906, propôs o nome ectoplasma. Ectoplasmia: aparecimento temporário de substâncias protoplasmáticas mais ou menos organizadas, de essência plástica, física e extrafísica, de fácil decomposição, em graus diversos de solidificação, com formas instáveis, ora como tênues vapores, bastões [...] (VIEIRA, 1999, RICHET, 2008, apud ROSSA, 2011). 3
O uso do Allium cepa como organismo teste O Allium cepa (cebola) teve seu uso como sistema-teste em 1938 (LEVAN, 1945). Vegetais são um importante modelo para teste das alterações genéticas e reconhecidos como indicadores de efeitos citotóxicos, genotóxicos e mutagênicos de ambientes com presença de substâncias químicas (YI & MENG, 2003). 4
Vantagens do uso de testes em plantas 1. Detectar a genotoxicidade mais rápida e eficientemente do que ensaios animais, são mais simples e econômicos, e usados, com sucesso, em monitoramento ambiental (YI & MENG, 2003); 2. Indicadores de efeitos tóxicos: respondem com alta sensibilidade (GRANT, 1994); pelo crescimento rápido de suas raízes, grande número de células em divisão, alta tolerância a diferentes condições de cultivo, disponibilidade durante o ano todo, fácil manuseio e por possuir cromossomos em número reduzido (2n = 16) e de grande tamanho (QUINZANI-JORDÃO, 1987); 3. Validados em estudos de colaboração internacional: United Nations Environmental Program (UNEP), World Health Organization (WHO) e US Environmental Protection Agency (USEPA), (FERNANDES et al., 2007). 5
MATERIAL E MÉTODOS a) Material: ectoplasma de indivíduos ectoplastas (N= 12), do sexo feminino (G1) e masculino (G2); b) Faixa etária: 30 a 80 anos; c) Ectoplasta: entrevista e autorização do uso dos resultados, por meio do termo de consentimento livre e esclarecido; d) Local: sala de experimentos Ectolab Foz do Iguaçu; e) Tempo do experimento: 15 minutos. 6
A. Cepa como modelo teste Sementes de A. cepa (2n = 16 cromossomos), de um mesmo lote (variedade Baia Periforme). 7
MATERIAL E MÉTODOS GRUPO EXPERIMENTAL raíz Placas 1s/2r Placas 3s/4r Placas 5s/6r Placas 7s/8r ECTOPLASTA alcance da mão A. cepa ECTOPLASTA a 3 m A. cepa ECTOPLASTA alcance da mão A. cepa + HERBICIDA ECTOPLASTA a 3 m A. cepa + HERBICIDA 8
CONTROLE raíz 9s/10r A. Cepa (CONTROLE NEGATIVO) 11s/12r A. Cepa + HERBICIDA (CONTROLE POSITIVO) Em outra sala, os dois grupos controle serão colocados para germinar no mesmo horário e nas mesmas condições de temperatura e de umidade da sala experimental. 9
PROCESSAMENTO DAS AMOSTRAS Germinação: quando as raízes de A. cepa atingirem 2 cm de comprimento serão fixadas por 24 horas e armazenadas para o processamento de acordo com as análises. 10
A. CEPA Análises Avaliar possíveis alterações no potencial mutagênico, citotóxico e genotóxico nas células expostas ao ectoplasma e tratadas com o herbicida por meio das análises de: aberrações cromossômicas; freqüência de quebras, micronúcleos nucléolos: número de nucléolo por célula; o tamanho de um único nucléolo e a porcentagem de células com um par de nucléolos heteromórficos; ultraestrutura por meio da MET ; Metabolômica; ECTOPLASTAS - sangue Estudo estrutural utilizando o ML; Análise ultraestrutural por meio do MET 11
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ABNEY, K. R.; KOPSELL, D. A.; SAMS, C. E.; ZIVANOCIC S.; KOPSELL, D. E. UV-B radiation impacts shoot tissue pigment composition in Allium fistulosum L. cultigens. The Scientific World Journal, 2013, http://dx.doi.org/10.1155/2013/s13867. CABARAVDIC, M. Induction of chromosome aberrations in the Allium cepa test system caused by the exposure of cells to venzo(a) pyrene. Med Arh., v. 64, p. 215-8, 2010. FERETTI, D.; CERETTI, E.; ZERBINI, I.; LIMINA, R. M.; DOMINICI, L.; MORETTI, M.; MONARCA, S.; DONATO, F. Assessmente of the genotoxic effects of gaseous emissions and percolates from three municipal landfills using plant bioassays. Ann Ig., v. 21, p. 153-9, 2009. FERNANDES, T. C. C.; MAZZEO, D. E. C.; MORALES, M. A. M. Mechanism of micronuclei formation in polyploidizated cells of Allium cepa exposed to trifluralin herbicide. Pesticide Biochemistry and Physiology, v. 8, p. 252-259, 2007. 12