Universidade Estadual do Ceará UECE Faculdade de Veterinária FAVET Laboratório de Histologia de Efeitos Causados por Veneno de Serpentes - Histovesp Processamento Histológico Histologia e Embriologia Geral Veterinária
Monitores: Dante Gabriel Soares Rodrigues Gislane Ferreira de Holanda Lima Marrie da Silva Dutra Professoras: Janaina Serra Azul Evangelista Glayciane Bezerra de Morais (Nina)
Coleta Consiste em remover amostras de tecido de um determinado organismo; Amostra biológica de um organismo vivo (biópsia, durante uma cirurgia) X post mortem (necropsia); Material proveniente de trabalhos experimentais com animais em instituições de pesquisa credenciadas; Eutanásia;
Clivagem Consiste em reduzir as dimensões dos fragmentos dos tecidos coletados; Facilita a penetração dos fixadores e a difusão dos reagentes durante as demais etapas do processamento dos tecidos; Os fragmentos devem atingir cerca de 3 mm de espessura; Acondicionar os tecidos clivados em cassetes histológicos identificados; Fonte: http://www.fiocruz.br/ioc/cgi/cgilua.exe/ sys/start.htm?infoid=1723&sid=32
Fixação Visa interromper o metabolismo celular, estabilizando as estruturas e os componentes bioquímicos intra e extracelulares, preservando e conservando os elementos teciduais, além de permitir a penetração de outras substâncias subsequentes à fixação; É uma das etapas mais importantes da técnica histológica; Compatibilidade e adequação do fixador com a propriedade dos vários tipos de tecidos; Agentes fixadores: Fixadores aldeídos Agentes oxidantes Agentes desnaturantes Mecanismo desconhecido Combinação de reagentes Fixação a seco Microondas
Fonte: http://mail.biotur.ro/viz_prod_alte_produse.php?id=25
Descalcificação Remove a porção mineral e analisa somente os constituintes orgânicos do tecido ósseo; Se faz necessária para tecidos mineralizados, pois os cristais de cálcio destroem o fio da navalha, criando dentes que impedem a confecção de bons cortes e levam à formação de artefatos técnicos, impedindo a análise histológica adequada; o (Ácido etilenediaminetetracético ou EDTA) Bem lento, sem dano ao tecido; Não produz artefatos durante a maioria das colorações histológicas, diferente da descalcificação por ácidos, que gera artefatos quase irreversíveis;
Outros agentes descalcificantes: Critérios para a escolha do agente descalcificante: Ácido nítrico Ácido clorídrico Ácido pícrico Ácido fórmico Ácido tricloacético Ácido sulfossalicílico Grau de mineralização; Interesse da investigação; Técnicas de coloração; Tipo de fixador;
Desidratação Objetivo: remoção da água dos tecidos; Agente: álcool etílico; Processo: soluções de concentrações crescentes de álcool.
Outros agentes desidratantes Álcool butílico Álcool isopropílico Clorofórmio Óxido propileno Acetona Éter
Clarificação ou Diafanização Objetivo: tornar o tecido translúcido; Etanol é substituído por uma substância intermediária; Agente utilizado: xilol.
Outros agentes clarificantes Toluol Benzol Éter de petróleo Óleo de cedro Salicilato de metila
Impregnação Objetivo: eliminar agente clarificante e impregnar o fragmento com parafina para que adquira consistência rígida e assim possa ser cortado ao micrótomo; Temperatura: 56ºC-60ºC. Fonte: http://goo.gl/hyu9xx
Inclusão Tecidos previamente impregnados são colocados em um molde de parafina líquida Fonte: http://goo.gl/s1yoih
Inclusão Fonte: http://goo.gl/ieu2cn Fonte: http://goo.gl/mlnfud
Microtomia É o uso de um micrótomo para a realização do corte extremamente fino para a observação ao microscópio.
Tipos de micrótomos Micrótomo para parafina Micrótomo de congelamento Ultramicrótomo (microscopia eletrônica ) Corrediça Vibrátomo
Micrótomo para parafina
Micrótomo de congelamento
Ultramicrótomo
Corrediça
Micrótomo Vibratório
Banho Maria e Pescagem É um banho de água quente para deixar o corte de parafina esticado; Juntamente com a lâmina de vidro usa se gotas de um preparado de albumina para prender o corte de parafina a lâmina.
Clarificação Uso de xilol para retirar a parafina
Hidratação É usada uma sequência de soluções alcoólicas para hidratar o preparado. Essa sequência vai do Álcool Absoluto II ao Álcool 70 %.
Coloração É uma técnica usada para melhorar a visualização dos tecidos na microscopia
Afinidade tintorial Acidofilia: capacidade que uma estrutura tem de atrair corantes ácidos. Basofilia: capacidade que uma estrutura tem de atrair corantes básicos
Corantes básicos Tipos: Azul de tolúida; Azul de metileno; Hematoxilina. Neurônio 100x HE
Corantes ácidos Tipos: Orange G; Fucsina ácida; Eosina. Eosinófilo 100x
Variedades de corantes
Desidratação É usada a mesma bateria de alcooís só que em ordem crescente (álcool 70 % ao álcool absoluto)
Montagem Banho em xilol; Coloca se uma gota de Bálsamo do Canadá no meio da lâmina; Revestimento com uma lamínula; Limpa-se a lâmina;
Etapas: Coleta; Fixação; Descalcificação; Desidratação; Clarificação; Impregnação; Inclusão; Microtomia; Banho maria; Montagem
Artefatos Exemplos: retrações causadas pelo fixador, pelo etanol e pelo calor da parafina, pregas do corte
Referências Bibliográficas BACHA JUNIOR, W. J.; BACHA, L. M. Atlas colorido de histologia veterinária. 2 ed. São Paulo: Rocca, p. 1-3, 2003. JUNQUEIRA, L. C. U. & CARNEIRO, J. Histologia básica. 12ª Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, p. 2-4, 2013. http://www.fea.br/arquivos/biotecnologia/material/ http://www.epsjv.fiocruz.br/upload/img/capitulo_3_vol2.pdf Acesso em: 28 mar. 2016, 14:23:05
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