POP n.º: B93 Página 1 de 7 1. Sinonímia: GRUPO SANGUÍNEO e FATOR RH, RH e GRUPO. Mnemônico: GSF 2. Aplicabilidade: Bioquímicos do setor de bioquímica do LAC-HNSC. 3. Aplicação clínica: Determinação do grupo sangüíneo e do fator RH antes de transfusões, perfil pré-natal para aconselhamento, preparo pré-operatório e na suspeita de incompatibilidade materno-fetal. Técnica alternativa (substituída por técnica em gel-centrifugação) utilizada quando necessária. 4. Principio do teste: Tipagem Direta: Pesquisa a presença dos antígenos na superfície das hemácias. 5. Amostra: 5.1 Preparo do paciente: Não é necessário jejum. Vide POP da Coleta. 5.2 Tipo de amostra: Sangue venoso total. Anticoagulantes aceitáveis: heparina, EDTA, citrato, oxalato ou fluoreto. 5.3 Colheita: Quantidade mínima de sangue: 1 ml. Quantidade ideal: 5 ml. 5.4 Preservação e transporte: Transportar o material colhido a temperatura ambiente e dentro das normas de segurança legais. 5.5 Identificação da amostra: Etiqueta com código de barras gerado pelo sistema de gerenciamento de dados do LAC (Sistema Pleres). A etiqueta deve ser posicionada nos fracos de colheita a partir da tampa para o fundo em linha reta de forma que o código de barras fique visível e alinhado, sem enrugamentos. 5.6 Estabilidade e armazenamento: A estabilidade da amostra colhida é de 7 dias a temperatura ambiente (15 a 25 C), de 4 semanas se refrigerada (2 a 8 C) e 12 semanas a -20 C. Amostra hemolisada: não congelar, 3 dias a 2-8 C e 1 dia a 15-25 C. 5.7 Amostras Inadequadas: Amostras mal identificadas. Amostras com volume insuficiente.
POP n.º: B93 Página 2 de 7 6. Reagentes e materiais: Lâminas de vidro, pipeta de 50 µl, ponteiras de plástico e aglutinoscópio. Anti- A, Anti-B e Anti-D, Controle Rh e Soro anti-humano. 6.1 Preparo: pronto para uso 6.2 Estabilidade: estável até o fim do prazo de validade, quando fechado e acondicionado entre 2 e 8 C. 6.3 Armazenamento: Entre 2 e 8 C. 7. Equipamentos: 8. Calibração: 9. Procedimento: 9.1 Fluxo: As amostras não devem ser centrifugadas. O auxiliar de laboratório as leva para a estante da mesa dos Diversos, onde serão processadas. Técnica: Em duas lâminas de microscopia colocar 3 gotas (50 µl ) de sangue total a ser analisado. Acrescentar 1 (gota) de Anti-A na 1ª gota de sangue, Anti-B na 2ª gota e Anti-D na 3ª gota. Homogeneizar com o auxílio de uma ponteira de plástico e observar a aglutinação no Aglutinoscópio. Pesquisa do D fraco (Du): Quando o Rh for negativo em lâmina, confirmar o teste em tubo, pesquisar nas hemácias do indivíduo o antígeno D fraco, através de anti-d e soro Anti-humano. Técnica: Preparar uma suspensão de hemácias a 5% a serem tipadas (50 microlitros de sangue total + 1 ml solução salina). Rotular dois tubos com DuT (teste) e DuC (controle) e pingar no Teste duas gotas do Anti-D e duas gotas da suspensão de hemácias preparada; no Controle pingar 2 gotas de controle Rh e duas gotas da suspensão de hemácias. Centrifugar o tubo a 3400 rpm por 15 segundos e ler.
POP n.º: B93 Página 3 de 7 Se NEGATIVO, incubá-los a 37ºC por 30 minutos. Após centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos e ler. Se NEGATIVO: a) Encher o tubo com solução salina; b) Centrifugar 3400 rpm por 2 minutos; c) Desprezar a solução salina, mantendo o botão de hemácias no fundo do tubo; d) Homogeneizar e repetir os procedimentos a, b, c, d mais duas vezes. Desprezar o sobrenadante na última lavagem secando a borda do tubo com papel absorvente e, então, pingar duas gotas do soro anti-humano no tubo, centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos. Dar para o Bioquímico ler. Interpretação: O : se não aglutinar. A : se aglutinar com anti-a. B : se aglutinar com anti-b. AB : se aglutinar com ambos. Rh negativo : se não aglutinar com anti-d. Rh positivo : se aglutinar com anti-d. Obs1.: Quando o Rh for negativo: fazer pesquisa de D fraco. Obs2.: Anotar o resultado no mapa de trabalho e no caderno de resultados. Ex.: A Negativo, Du negativo. Obs3.: Se der positivo na 1ª fase da pesquisa ou na 2ª fase (após os 1ºs 15 ou após a incubação), o resultado será Rh Positivo. Obs4.: Se após a colocação do soro anti-humano houver aglutinação, o resultado será: Rh Negativo Du Positivo. 9.2 Definição do teste: 10. Controle de qualidade: 10.1 Interno: Comutatividade com técnica em gel-centrifugação (quando necessária). 10.1.1 Tipagem Reversa: Em lâmina: 1 gota de papa do grupo A + 1 gota de soro/plasma a testar. 1 gota de papa do grupo B + 1 gota de soro/plasma a testar. Resultado: aglutinação com papa A: grupo B aglutinação com papa B: grupo A aglutinação com a papas A e B: grupo O nenhuma aglutinação: grupo AB
POP n.º: B93 Página 4 de 7 10.2 Externo: Controle PELM Controlab (frequência: quando necessária). 11. Resultados: 11.1 Unidades: 11.2 Cálculos: 11.3 Critérios de aceitação: Tipos sanguíneos: A, B, AB ou O. Fator Rh: Positivo ou Negativo Du negativo. 12. Valores de referência: 13. Valores críticos: 14. Linearidade: 15. Limitações do método: 15.1 Interferentes: Observar atentamente quais os reativos utilizados e seguir passo a passo os procedimentos. Guardar os reativos na geladeira. Para Rh duvidoso na técnica em tubo, utilizar ID-Cartão Anti-D (Dia-Med). Ver anexo 18. 16. Interpretação dos resultados: Interpretação: POSITIVO: ocorre aglutinação NEGATIVO: não ocorre aglutinação
POP n.º: B93 Página 5 de 7 Ex1.: Houve aglutinação na 1ª gota (Anti-A) e na 3ª gota (Anti-D). O paciente é A POSITIVO. Ex2.: Não houve aglutinação em Anti-A, nem em Anti-B e nem Anti-D. O paciente é O NEGATIVO. 17. Biossegurança: Usar equipamento de proteção individual (luvas, óculos etc.). Fazer a descontaminação de bancadas e equipamentos conforme as normas de segurança do laboratório. Descartar resíduos de acordo com as Boas Práticas de Laboratório e com as normas federais, estaduais e locais. Vide Manual de biossegurança. 18. Anexos: 18.1 Antígenos Rh de resultados duvidosos: ID-Cartão Anti-D (Dia-Med): Utilizado para confirmação de Rh duvidoso na técnica em tubo. Reativos: ID-Cartão Anti-D com 6 microtubos contendo anticorpos anti-d policlonais de origem humana, suspensos em gel (armazenamento: 18 25ºC / validade: ver na caixa). ID-Diluent 1: Solução de Bromelina modificada para preparo de suspensões de hemácias (armazenamento: 2 8ºC / validade: ver na caixa). Amostras: anticoaguladas com EDTA ou citrato. (de preferência amostras recentemente colhidas) Preparação das amostras: Preparar a suspensão de hemácias a 5% com o ID-Diluent 1 (deixe atingir a temperatura ambiente antes de usar): Colocar no tubo de suspensões 0,5 ml do ID-diluent 1. Pipetar 50 µl do sangue total e homogeneizar. Incubar 10 minutos a temperatura ambiente (utilizar a suspensão no máximo 15 minutos após a incubação). Controle: testar semanalmente (ou quando necessário) hemácias conhecidas, positivas e negativas, e registrar este CQI em planilha específica. Procedimento: Identificar os microtubos a serem utilizados com o SIL do(a) paciente. Retirar o lacre de alumínio dos microtubos necessários do ID-cartão. Ressuspender suavemente a suspensão de hemácias e pipetar 10-12,5 µl nos microtubos apropriados. 18.2 Pesquisa de Antígeno D fraco (Du)
POP n.º: B93 Página 6 de 7 PESQUISA DE ANTÍGENO D FRACO (Du ) Quando o Rh for negativo em lâmina, confirmar o teste em tubo, pesquisar nas hemácias do indivíduo o antígeno D fraco, através de anti-d e soro Anti-humano. Técnica: Preparar uma suspensão de hemácias a 5% a serem tipadas (50 microlitros de sangue total + 1 ml solução salina). Rotular dois tubos com DuT (teste) e DuC (controle) e pingar no Teste duas gotas do Anti-D e duas gotas da suspensão de hemácias preparada; no Controle pingar 2 gotas de controle Rh e duas gotas da suspensão de hemácias. Centrifugar o tubo a 3400 rpm por 15 segundos e ler. Se NEGATIVO, incubá-los a 37ºC por 30 minutos. Após centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos e ler. Se NEGATIVO: a) Encher o tubo com solução salina; b) Centrifugar 3400 rpm por 2 minutos; c) Desprezar a solução salina mantendo o botão de hemácias no fundo do tubo; d) Homogeneizar e repetir os procedimentos a, b, c, d mais duas vezes. Desprezar o sobrenadante na última lavagem secando a borda do tubo com papel absorvente e, então, pingar duas gotas do soro anti-humano no tubo, centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos. Dar para o Bioquímico ler. Interpretação: O : se não aglutinar. A : se aglutinar com anti-a. B : se aglutinar com anti-b. AB : se aglutinar com ambos. Rh negativo : se não aglutinar com anti-d. Rh positivo : se aglutinar com anti-d. Obs1.: Quando o Rh for negativo: fazer pesquisa de D fraco. Obs2.: Anotar o resultado no mapa de trabalho e no caderno de resultados. Ex.: A Negativo, Du negativo. Obs3.: Se der positivo na 1ª fase da pesquisa ou na 2ª fase (após os 1ºs 15 ou após a incubação), o resultado será Rh Positivo. Obs4.: Se após a colocação do soro anti-humano houver aglutinação, o resultado será: Rh Negativo Du Positivo. Retirado do POPB93 Diversos - Tipagem Sangüínea CQ-Bioquímica Lab-HNSC 19. Bibliografia:
POP n.º: B93 Página 7 de 7 Referências Laboratório Álvaro.