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qlul=föj=ff PQQTM Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Princípios do teste O teste Access Toxo IgM II é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação qualitativa do anticorpo IgM específico do Toxoplasma gondii no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de imunoensaio Access. O Toxoplasma gondii é um parasita protozoário capaz de infectar muitas espécies de mamíferos e aves. 1 Estas infecções são muito comuns nos humanos e nos animais, embora os sintomas clínicos sejam em geral leves ou não evidentes. A difusão desta infecção depende da faixa etária e da localização geográfica da população. 2 Esta doença é detectada pela presença de anticorpos específicos anti-t. gondii no soro. Além disso, existe um risco para o feto se a mãe contrair uma infecção primária pouco antes da gravidez ou durante a mesma. Isto pode causar graves defeitos congénitos do feto, sobretudo deficiência da funcionalidade cerebral, e até mesmo aborto. 3 A presença de anticorpos IgG específicos do T. gondii no soro da mãe, determinada no início da gravidez, confere imunidade e protege o feto contra a infecção pelo parasita. Uma outra população com predisposição para a infecção pelo Toxoplasma são os doentes imunocomprometidos, incluídas as pessoas com SIDA. 4,5,6 As pesquisas realizadas indicaram que de 3 a 50% dos casos de SIDA desenvolvem toxoplasmose cerebral provocada pela infecção crónica. 7 Descobriu-se que estas infecções são causadas, quase exclusivamente, por um foco parasitário quiescente e vital (cisto) presente juntamente com a infecção pelo HIV (Vírus da Imunodeficiência Humana). O diagnóstico específico da infecção por Toxoplasma depende do isolamento, muito raro e difícil, do parasita. A confirmação serológica de anticorpos anti-toxoplasma indica a exposição ao parasita e constitui um meio de diagnóstico e de follow-up. 8 A análise de isotipos específicos de anticorpos anti-t. gondii pode fornecer informações sobre quando, por exemplo, a infecção foi adquirida. 9,10 Para determinar com mais precisão o estágio da infecção, é necessário determinar o nível do anticorpo IgM específico do T. gondii juntamente com o nível da IgG específica do T. gondii. Assim fazendo, é possível detectar uma infecção recente e tomar as devidas medidas profilácticas e terapêuticas. Dado que as infecções por Toxoplasma não são clinicamente evidentes, a detecção da IgM específica permite o follow-up de mulheres grávidas. O follow-up serológico em geral possibilita a detecção precoce de uma seroconversão e, tendo em conta a gravidade de infecção congénita no feto, a aplicação rápida das medidas necessárias. O teste Access Toxo IgM II é um ensaio imunoenzimático que utiliza o princípio da imunocaptura. A amostra a ser testada é adicionada a um recipiente de reacção contendo partículas paramagnéticas revestidas com anticorpo policlonal de ovelha específico da IgM humana como anticorpo de captura. Após a incubação no recipiente de reacção, a separação num campo magnético e a lavagem removem os materiais não ligados à fase sólida. Em seguida, um complexo formado por antigénio do T. gondii e anticorpo monoclonal específico do T. gondii (P30) que foi marcado com fosfatase alcalina é adicionado ao recipiente de reacção. Após uma segunda incubação e uma outra lavagem, um substrato quimioluminescente, Lumi-Phos* 530, é adicionado e a luz gerada pela reacção é medida com um luminómetro. A produção de fotões depende da quantidade de conjugado enzimático presente no final da reacção. A quantidade de luz medida para uma amostra permite uma determinação da presença do anticorpo IgM específico do T. gondii, em comparação com um valor de cut-off 2011 Beckman Coulter, Inc. A34296E Access Toxo IgM II Página 1

definido durante a calibração do ensaio no aparelho. Se a produção de luz for igual ou maior que o valor de cut-off, a amostra é considerada reactiva no ensaio Access Toxo IgM II. Informações sobre o produto Kit de reagentes Access Toxo IgM II Nº Cat. 34470: 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no equipamento. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Estável a 2 10 C por 28 dias após utilização inicial. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo de qualidade fora do intervalo de variação. Rejeitar a embalagem de reagente caso tenha sofrido prejuízos (p.ex. ruptura da camada elastomérica). Todos os anti-soros são policlonais, excepto quando indicado em contrário. R1a: R1b: R1c: R1d: Partículas paramagnéticas revestidas com anticorpos (ovelha) anti-igm humana suspensas em solução salina tamponada TRIS, com surfactante, albumina sérica bovina (BSA) e < 0,1% de azida sódica. Diluente: solução salina tamponada TRIS, com surfactante, proteína (bovina) e < 0,1% de azida sódica. Conjugado: complexo de antigénio de T. gondii inactivado anticorpo monoclonal de rato específico do T. gondii (P30) fosfatase alcalina (bovina) em solução salina tamponada TRIS, BSA e < 0,1% de azida sódica. Diluente: solução salina tamponada TRIS, com surfactante, proteínas (bovina, humana e murina) e < 0,1% de azida sódica. Avisos e precauções Colheita e preparação da amostra Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. O material de origem humana utilizado na preparação do reagente foi testado e considerado negativo ou não reactivo para a Hepatite B, a Hepatite C (HCV) e para o Vírus da Imunodeficiência humana (HIV-1 e HIV-2). Dado que nenhum método de ensaio conhecido pode oferecer a segurança completa da ausência de agentes infecciosos, manusear os reagentes e as amostras dos doentes como potencialmente infecciosos. 11 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 12 O antigénio T. gondii contido no conjugado foi inactivado. No entanto, manusear e eliminar as embalagens de reagentes como material potencialmente infeccioso. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. 1. Soro e plasma (EDTA, heparina ou citrato) são as amostras aconselhadas. Para a avaliação do estado imunológico, colher uma amostra só. Para a avaliação da seroconversão causada por infecção recente (a conversão duma amostra dum único doente de não reactiva para Access Toxo IgM II A34296E 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 2

reactiva), colher duas amostras. Colher a segunda amostra 10-20 dias após a primeira e testar ambas na mesma execução. 2. Seguir as recomendações abaixo para manipular, analisar e armazenar amostras de sangue: 13 Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação. Manter as provetas sempre fechadas. Dentro de duas horas após a centrifugação, transferir no mínimo 500 µl de amostra isenta de células para uma proveta de armazenamento. Tapar imediatamente a proveta com a rolha, apertando bem. Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a 15 30 C) durante o máximo de oito horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de oito horas, refrigerar as amostra a 2 8 C. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 48 horas, ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa. 3. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras: Certificar-se de que a fibrina e a matéria celular residuais tenham sido removidas antes da análise. Para a centrifugação, seguir as instruções do fabricante das provetas de colheita de sangue. 4. Cada laboratório deve determinar a aceitabilidade das próprias provetas de colheita de sangue e dos produtos de separação do soro. Estes produtos podem variar entre fabricantes diferentes e, às vezes, de um lote para o outro. 5. As amostras podem ser descongeladas no máximo três vezes. As amostras que tenham sido congeladas anteriormente devem ser bem misturadas após a descongelação antes de fazer o teste. Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access Toxo IgM II Materiais necessários mas não fornecidos Comentários sobre o procedimento 1. Calibradores Access Toxo IgM II Calibrators Negativo e positivo para o anticorpo IgM específico do T.gondii. Nº Cat. 34475 2. Access Toxo IgM II QC ou outro material de controlo de qualidade disponível no mercado. Nº Cat. 34479 3. Substrato: Access Substrate Nº Cat. 81906 4. Access, Access 2, SYNCHRON LXi: Tampão de lavagem: Access Wash Buffer II, Nº Cat. A16792 UniCel DxI: Tampão de lavagem: UniCel DxI Wash Buffer II, Nº Cat. A16793 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no equipamento. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 2011 Beckman Coulter, Inc. A34296E Access Toxo IgM II Página 3

3. Usar dez (10) μl de amostra para cada determinação além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 4. O primeiro resultado está pronto após 35 minutos. Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade Resultados Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Os resultados dos calibradores Access Toxo IgM II Calibrators são verificados automaticamente pelo sistema Access em relação a limites de URL predefinidos. Se ambos os níveis satisfizerem às especificações, o sistema calcula o valor de cut-off para a calibração. Para todos os testes, é necessário um valor de cut-off de calibração activo. Para o ensaio Access Toxo IgM II, a calibração é necessária a cada 28 dias. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas. 14 O uso mais frequente de controlos ou o uso de controlos adicionais fica a critério do utilizador de acordo com os métodos adequados ou os requisitos de acreditação dos laboratórios e as leis competentes. Utilizar controlos de qualidade Access Toxo IgM II QC ou outros materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. A presença ou a ausência de anticorpo IgM específico do T. gondii detectável é determinada comparando o sinal de URL de cada amostra do doente com o valor de cut-off de calibração. A relação amostra/cut-off (A/CO) = URL da amostra/url do cut-off de calibração. Os resultados são indicados como "reactivos" (sinal maior ou igual ao valor de cut-off) ou "não reactivos " (sinal menor que o valor de cut-off) dependendo da sua relação com o valor de cut-off. Contudo, os resultados até a 20% abaixo do "valor de cut-off" devem ser interpretados com prudência e confirmados com o teste de uma nova amostra 10-20 dias mais tarde. Para determinar com maior rapidez se o resultado de um teste está incluído na zona cinzenta, o cliente pode seleccionar, inserir e guardar os valores limites para esta zona. Este processo provocará a impressão da sinalização "GRY" perto do resultado de cada teste que coincidir com a zona cinzenta especificada. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para ter instruções sobre como inserir os limites da zona cinzenta e rever os resultados dos testes. Access Toxo IgM II A34296E 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 4

Resultado (A/CO) Interpretação (A/CO) < 1,0 Não reactivo 0,8 (A/CO) < 1,0 Zona cinzenta (A/CO) 1,0 Reactivo A tabela abaixo contém as indicações gerais para a interpretação dos resultados serológicos do T. gondii obtidos numa primeira colheita. Resultado do anticorpo IgG específico do T. gondii Resultado do anticorpo IgM específico do T. gondii Interpretação para amostras séricas Não reactivo Não reactivo Nenhuma evidência serológica de infecção por Toxoplasma gondii. Não reactivo Não reactivo Grey zone Possível infecção aguda no estágio inicial sem evidência de infecção pregressa por Toxoplasma gondii. Colher uma nova amostra dentro de 10 20 dias para a determinação dos anticorpos IgM e IgG anti-toxoplasma gondii. Se os resultados se repetirem, é improvável que a infecção tenha sido contraída. Não reactivo Reactivo Possível infecção aguda. Colher uma nova amostra dentro de 10 20 dias para repetir o teste quer da IgG, quer da IgM. Nos Estados Unidos, se os resultados se repetem, é necessário submeter uma amostra ao teste de confirmação. Duvidoso Não reactivo Indeterminado. Colher uma nova amostra dentro de 10 20 dias para repetir o teste quer da IgG, quer da IgM. Duvidoso Não reactivo Grey zone Indeterminado. Colher uma nova amostra dentro de 10 20 dias para repetir o teste quer da IgG, quer da IgM. Nos Estados Unidos, se os resultados se repetem, é necessário submeter uma amostra ao teste de confirmação. Duvidoso Reactivo Possível infecção aguda. Colher uma nova amostra dentro de 10 20 dias para repetir o teste quer da IgG, quer da IgM. Nos Estados Unidos, se os resultados se repetem, é necessário submeter uma amostra ao teste de confirmação. Reactivo Não reactivo Suposta infecção pregressa por T. gondii há mais de 6 meses. Reactivo Não reactivo Grey zone Suposta infecção pregressa por T. gondii. Colher uma nova amostra dentro de 10 20 dias para repetir o teste quer da IgG, quer da IgM. Nos Estados Unidos, se os resultados se repetem, é necessário submeter uma amostra ao teste de confirmação. Reactivo Reactivo Suposta infecção pregressa por T. gondii nos últimos 12 meses. Colher uma nova amostra dentro de 10 20 dias para repetir o teste quer da IgG, quer da IgM. Nos Estados Unidos, se os resultados se repetem, é necessário submeter uma amostra ao teste de confirmação. Limitações do procedimento 1. Os resultados do teste Toxo IgM devem ser usados juntamente com os resultados da análise Toxo IgG e com as informações disponíveis do quadro clínico do doente. 2. Nos Estados Unidos, os testes de amostras que resultaram Reactivas para o anticorpo IgM específico do T. gondii devem ser enviados a um laboratório de referência com experiência no diagnóstico de toxoplasmose para o teste de confirmação. 3. A presença do anticorpo IgM específico do T. gondii nem sempre indica uma infecção recente, pois a IgM pode persistir por muitos meses, ou até mesmo por vários anos, após a infecção. È notório que uma resposta à IgM pode ocorrer nas infecções secundárias e reactivadas. 2011 Beckman Coulter, Inc. A34296E Access Toxo IgM II Página 5

4. A grandeza do resultado medido acima do valor de cut-off não indica a quantidade total de anticorpos presentes. 5. Se uma amostra for colhida logo na fase inicial de uma infecção primária, os anticorpos específicos da classe IgM podem não estar presentes. Para confirmar uma infecção primária, uma segunda amostra deve ser colhida 10-20 dias mais tarde e testada juntamente com a primeira amostra para observar uma possível seroconversão. 6. O valor predictivo dum teste positivo diminui à medida que a difusão da doença diminui. A interpretação dos resultados positivos numa população de doentes de baixo risco deve ser feita com cuidado. 7. Dado que os testes de laboratório realizados com mulheres grávidas não podem identificar com segurança os fetos com risco de doença, não é aconselhável o rastreio de infecções maternas assintomáticas em associação com a interrupção de gravidez. 15 8. Os indivíduos imunocomprometidos e determinadas condições, tais como infecções graves e a terapêutica com medicamentos imunossupressores, podem provocar a supressão dos níveis de anticorpos abaixo do limiar de detecção do ensaio. 9. As concentrações de anticorpos IgM específicos do T. gondii numa dada amostra determinadas com ensaios de fabricantes diferentes podem variar devido às diferenças nos métodos de ensaio e na especificidade dos reagentes. 10.Nos ensaios que utilizam anticorpos, existe a possibilidade de interferência dos anticorpos heterófilos contidos na amostra do doente. Os doentes que estão regularmente em contacto com animais ou que tenham sido submetidos a imunoterapia ou a técnicas de diagnóstico que utilizam imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas podem produzir anticorpos, por ex. HAMA, que interferem com os imunoensaios. Para além disso, outros anticorpos heterófilos, tais como os anticorpos humanos anti-cabra, podem estar presentes nas amostras dos doentes. 16,17 Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errados. Os resultados de doentes suspeitos de ter estes anticorpos devem ser avaliados com cuidado. 11.Os resultados do Access Toxo IgM II devem ser interpretados baseando-se no quadro clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. Valores esperados A difusão desta infecção depende da faixa etária e da localização geográfica da população. 1 Na França (área de Paris), 80% da população adulta possui anticorpos IgG específicos do T. gondii; nos Estados Unidos, aproximadamente 50% da população possui anticorpos específicos. Em algumas áreas dos Estados Unidos, apenas 5 15% das mulheres em idade fértil possuem anticorpos IgG a um nível considerado de protecção. 1,2 De acordo com alguns estudos, a taxa de ocorrência de infecções congénitas foi estimada de 1 em cada 1000 a 1 em cada 8000 nascimentos. 2,18 A difusão de resultados reactivos para os anticorpos IgM específicos do T. gondii (6.4%) foi determinada através do ensaio Access Toxo IgM II, analisando 188 amostras séricas recém-colhidas provenientes de uma população de homens e de mulheres grávidas na França. A distribuição dos resultados é mostrada no seguinte histograma. Access Toxo IgM II A34296E 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 6

Access Toxo IgM II: Estudo prospectivo em 188 amostras recém-colhidas (França) 140 135 120 100 Frequência 80 60 Cut off 40 23 20 8 4 1 1 2 1 1 0 4 5 1 2 0 < 0,1 0,1 0,2 0,2 0,3 0,3 0,4 0,4 0,5 0,5 0,6 0,6 0,7 0,7 0,8 0,8 0,9 0,9 1 1 2 2 5 > 5 > 10 Sinal / Cut off da amostra Características específicas de desempenho Nos Centros 1 e 2, foram testadas amostras congeladas provenientes de homens e de mulheres grávidas, de uma população de dadores de sangue, juntamente com amostras prospectivas recém-colhidas provenientes de homens e de mulheres grávidas. As amostras retrospectivas (congeladas) foram utilizadas nestes centros com o objectivo de obter o número desejado de amostras reactivas e não reactivas suficientes para avaliar o ensaio. Comparação de métodos A presença de anticorpos IgM anti-t. gondii em 866 amostras (188 amostras recém-colhidas e 678 amostras congeladas provenientes de 798 mulheres grávidas e 68 homens) foi determinada por um centro na França utilizando o ensaio Access Toxo IgM II e comparando os resultados com um teste EIA disponível no comércio. Na tabela abaixo, são mostradas a concordância relativa, a sensibilidade relativa e a especificidade relativa (todos os resultados duvidosos foram excluídos do cálculo). Estudo prospectivo em amostras recém-colhidas Access Não reactivo Zona cinzenta Reactivo Total EIA de comparação Negativo (Não reactivo) 174 0 2 176 Duvidoso (Zona cinzenta) 0 0 2 2 Positivo (Reactivo) 1 1 8 10 Total 175 1 12 188 Estudo retrospectivo em amostras congeladas Access Não reactivo Zona cinzenta Reactivo Total EIA de comparação Negativo (Não reactivo) 496 1 6 503 Duvidoso (Zona cinzenta) 2 0 1 3 Positivo (Reactivo) 3 0 169 172 Total 501 1 176 678 2011 Beckman Coulter, Inc. A34296E Access Toxo IgM II Página 7

Comparação entre o Access Toxo IgM II e um EIA de comparação Amostras recém-colhidas Concordância relativa 98,37% (182/185) (96,6% 100%) Sensibilidade relativa 88,88% (8/9) (68,2% 100%) Especificidade relativa 98,86% (174/176) (97,25% 100%) Access duvidoso 0,53% (1/188) Amostras congeladas 98,66% (665/674) (97,78% 99,55%) 98,26% (169/172) (96,32% 100%) 98,80% (496/502) (97,86% 99,75%) 0,15% (1/678) Estudos sobre a especificidade: A especificidade do teste Access Toxo IgM II foi avaliada por dois centros independentes na França, em comparação com um teste EIA disponível no comércio. Avaliou-se um total de 1035 amostras (174 dadores de sangue, 50 homens e 811 mulheres grávidas). Utilizou-se também um teste de aglutinação como uma terceira técnica para resolver todos os resultados discrepantes. Os resultados duvidosos ou não confirmados pela terceira técnica, dentre os quais dois resultados Access duvidosos, não foram incluídos no cálculo. Especificidade: 1034/1035 = 99,90% (Dez amostras foram excluídas do cálculo). Estudos sobre a sensibilidade: A sensibilidade do teste Access Toxo IgM II foi avaliada por dois centros independentes na França, em comparação com um teste EIA disponível no comércio. Avaliou-se um total de 180 amostras provenientes de mulheres grávidas. Utilizou-se também um teste de aglutinação como uma terceira técnica para resolver todos os resultados discrepantes. Os resultados duvidosos ou não confirmados pela terceira técnica não foram incluídos no cálculo. Sensibilidade: 178/180 = 98,88%. Os duas resultados discrepantes correspondem a uma infecção pregressa com IgM residuais. (Três amostras foram excluídas do cálculo). Para além disso, 73 painéis (185 soros) de infecção por seroconversão ou follow-up (Centro 1) e 28 painéis (86 soros) de soroconversões (Centro 2) foram testados com o Access Toxo IgM II e o teste EIA de comparação: encontrou-se uma sensibilidade de 100% nestes painéis. Imprecisão Este ensaio destina-se a fornecer constantemente uma imprecisão total < 20%. Um estudo realizado com um sistema Access forneceu os seguintes dados: Intra-ensaio A precisão intra-ensaio foi determinada testando quatro amostras diferentes 30 vezes no mesmo ensaio. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo: Amostras S1 S2 S3 S4 Média (n=30) 0,08 1,03 4,95 8,22 %CV 3,20 4,67 3,24 2,98 expressa como a relação do sinal /cut-off do soro Inter-ensaio A precisão inter-ensaio foi determinada testando quatro amostras diferentes em triplicado em dez ensaios diferentes durante uma semana com dois sistemas Access diferentes. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo: Access Toxo IgM II A34296E 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 8

Amostras S1 S2 S3 S4 Média (n=30) 0,08 1,11 4,50 9,05 %CV 12,88 6,97 10,59 9,91 expressa como a relação do sinal /cut-off do soro A precisão inter-ensaio, próxima ao cut-off da análise, foi determinada testando doze soros diferentes, cinco replicados por amostra, em dez ensaios distintos com dois sistemas DxI diferentes. A regressão best-fit foi utilizada para determinar a percentagem do CV com o cut-off do ensaio e a 20% acima e 20% abaixo do valor de cut-off. Os resultados deste estudo são mostrados abaixo: A/CO relação %CV 0,8 4,95 1,0 6,67 (Cut-off do ensaio) 1,2 7,81 Especificidade analítica/interferências Amostras contendo até a 90 g/l de albumina, 100 mg/l de bilirrubina, amostras lipémicas contendo até o equivalente a 36 g/l de trioleína (triglicéridos) e amostras hemolisadas contendo até a 10 g/l de hemoglobina não afectam o resultado. As amostras seguintes, não reactivas num teste EIA disponível no comércio, foram avaliadas no ensaio Access Toxo IgM II, resultando não reactivas, o que indica a ausência de reactividade cruzada e/ou reactividade não específica com estas amostras. n Reactivo Não reactivo Infecções parasitárias e virais: 148 HIV 10 0 10 EBV 19 0 19 CMV 10 0 10 HSV 31 0 31 VZV 26 0 26 Sarampo 20 0 20 Parotidite 20 0 20 Rubéola 10 0 10 Mal de Chagas 2 0 2 Doença auto-imune e outras afecções: 73 Anti-rato 9 0 9 Auto-anticorpos ANA 10 0 10 Mieloma 9 0 9 Factor reumatóide 45 0 45 TOTAL 221 0 221 Comparação do Access Toxo IgM II no sistema DxI e no sistema Access 2 Um estudo comparou o desempenho do teste Access Toxo IgM II no sistema DxI e no sistema Access 2. 104 amostras séricas foram analisadas em duplicado, com aproximadamente 50% das amostras reactivas e 50% não reactivas, cobrindo todo o intervalo de variação do ensaio. O teste Access Toxo IgM II obteve 100% de concordância com as amostras positivas e 100% de concordância com as amostras negativas, demonstrando 100% de concordância entre os sistemas DxI e Access 2. 2011 Beckman Coulter, Inc. A34296E Access Toxo IgM II Página 9

. qlul=föj=ff=`^if_o^qlop PQQTR Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Rastreabilidade Informações sobre o produto Os calibradores Access Toxo IgM II Calibrators devem ser utilizados com o ensaio Access Toxo IgM II para a determinação qualitativa do anticorpo IgM específico do Toxoplasma gondii no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. Os calibradores Access Toxo IgM II Calibrators são usados para estabelecer a calibração (determinar o valor de cut-off) para o ensaio Access Toxo IgM II. As amostras do doente são, em seguida, classificadas ou como reactivas ou como não reactivas mediante uma comparação entre o resultado do doente e o valor de cut-off calculado. Para todos os testes, é necessário um valor de cut-off de calibração activo. Para o Access Toxo IgM II, é necessário efectuar a calibração do ensaio a cada 28 dias. Para informações sobre a calibração do ensaio qualitativo, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda. A substância a ser medida (analito) nos calibradores Access Toxo IgM II Calibrators tem como referência os calibradores internos do fabricante. O processo de rastreabilidade baseia-se na norma EN ISO 17511. Os valores atribuídos foram estabelecidos usando amostras representativas deste lote de calibrador e são específicos para as metodologias de ensaio dos reagentes Access. Os valores atribuídos por outras metodologias podem ser diferentes. Tais diferenças, se presentes, podem ser causadas por desvios entre os métodos. Access Toxo IgM II Calibrators Nº Cat. 34475: C0 e C1, 1,5 ml/recipiente Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Em geral, a estabilidade do recipiente aberto dura até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta do recipiente, quando armazenado e manuseado de maneira adequada. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo de qualidade fora do intervalo de variação. C0: Calibrador negativo: plasma humano desfibrinado, negativo para o anticorpo IgM específico do Toxoplasma gondii, com < 0,1% de azida sódica. C1: Calibrador positivo: plasma humano desfibrinado, positivo para o anticorpo IgM específico do Toxoplasma gondii, com < 0,1% de azida sódica. Cartão de 1 calibração: Access Toxo IgM II A34296E 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 10

Avisos e precauções Procedimento Detalhes da calibração Limitações do procedimento Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. O material de origem humana utilizado na preparação do reagente foi testado e considerado negativo ou não reactivo para a Hepatite B, a Hepatite C (HCV) e para o Vírus da Imunodeficiência humana (HIV-1 e HIV-2). Dado que nenhum método de ensaio conhecido pode oferecer a segurança completa da ausência de agentes infecciosos, manusear os reagentes e as amostras dos doentes como potencialmente infecciosos. 11 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 12 A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os calibradores Access Toxo IgM II Calibrators são fornecidas como: C0 negativo (não reactivo) para o anticorpo IgM específico do T. gondii. C1 positivo (reactivo) para o anticorpo IgM específico do T. gondii. O ensaio Access Toxo IgM II necessita de uma calibração (determinação do valor de cut-off) para obter uma "calibração" activa. Os dados de calibração do ensaio são válidos por 28 dias. Os calibradores são analisados em duplicado. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. 2011 Beckman Coulter, Inc. A34296E Access Toxo IgM II Página 11

. qlul=föj=ff=n` PQQTV Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Rastreabilidade Informações sobre o produto Os controlos de qualidade Access Toxo IgM II QC são utilizados para monitorizar o desempenho do sistema do ensaio Access Toxo IgM II. O controlo de qualidade Access Toxo IgM II QC é usado para a monitorização do desempenho de sistema do ensaio Access Toxo IgM II para a determinação qualitativa do anticorpo IgM específico do T. gondii. O uso de materiais de controlo de qualidade é indicado para detectar e potencialmente resolver erros críticos de análise causados pelos kits de teste, pelos técnicos de laboratório e pela aparelhagem e faz parte das boas práticas de laboratório. 14,19,20,21,22 São fornecidos um controlo de qualidade negativo e um positivo baixo para permitir a monitorização do desempenho das áreas mais importantes do intervalo de frequência do ensaio. A substância a ser medida (analito) nos controlos Access Toxo IgM II QC tem como referência os calibradores internos do fabricante. O processo de rastreabilidade baseia-se na norma EN ISO 17511. Os valores atribuídos foram estabelecidos usando amostras representativas deste lote de controlos de qualidade e são específicos para as metodologias de ensaio dos reagentes Access. Os valores atribuídos por outras metodologias podem ser diferentes. Tais diferenças, se presentes, podem ser causadas por desvios entre os métodos. Access Toxo IgM II QC Nº Cat. 34479: 3,5 ml/recipiente, 3 recipientes por nível Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Depois da abertura, os recipientes permanecem estáveis por 30 dias, quando manuseados e armazenados correctamente. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo de qualidade fora do intervalo de variação. Consultar o cartão de valores QC para os valores médios e os desvios padrão (DP). QC 1: QC 2: Cartão de valores QC: Plasma humano desfibrinado, negativo (não reactivo) para o anticorpo IgM específico do Toxoplasma gondii, com < 0,1% de azida sódica. Plasma humano desfibrinado, positivo (reactivo) para o anticorpo IgM específico do Toxoplasma gondii, com < 0,1% de azida sódica. 1 Access Toxo IgM II A34296E 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 12

Avisos e precauções Procedimento Limitações do procedimento Controlo de qualidade Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. O material de origem humana utilizado na preparação do reagente foi testado e considerado negativo ou não reactivo para a Hepatite B, a Hepatite C (HCV) e para o Vírus da Imunodeficiência humana (HIV-1 e HIV-2). Dado que nenhum método de ensaio conhecido pode oferecer a segurança completa da ausência de agentes infecciosos, manusear os reagentes e as amostras dos doentes como potencialmente infecciosos. 11 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 12 A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. O controlo de qualidade Access Toxo IgM II QC deve ser tratado da mesma maneira que as amostras dos doentes e analisado de acordo com as instruções anexadas ao aparelho e/ou ao método utilizados. Nota: Para os Sistemas de Imunoensaio Access, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre os métodos dos controlos de qualidade, a configuração de controlos, a introdução de solicitações de testes de amostras de controlo de qualidade e a visualização dos dados dos controlos de qualidade. 1. A utilização dos controlos de qualidade Access Toxo IgM QC não foi estabelecida com ensaios diferentes do Access Toxo IgM II. 2. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. Os controlos de qualidade devem ser analisados dentro de um período de 24 horas antes da execução da análise das amostras do doente. Utilizar quaisquer controlos de qualidade disponíveis no comércio e/ou outros controlos de qualidade provenientes de outras fontes para o programa de controlo de qualidade do laboratório. Os controlos de qualidade do ensaio devem conter níveis de analito que correspondam ou estejam próximos aos pontos limite de decisão e ser usados consoante os requisitos específicos das organizações credenciadas neste assunto. O uso mais frequente de controlos ou o uso de controlos adicionais fica a critério do utilizador de acordo com os métodos adequados ou os requisitos de acreditação dos laboratórios e as leis competentes. Os utilizadores devem consultar os respectivos manuais de sistema e/ou sistema de Ajuda para informações sobre o uso das funções dos controlos de qualidade e para a selecção das regras de QC adequadas para o próprio laboratório. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios critérios de aceitação para os controlos de qualidade do ensaio utilizados pelo laboratório. 14,23,24,25 Os resultados dos soros de controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. 2011 Beckman Coulter, Inc. A34296E Access Toxo IgM II Página 13

Valores esperados Para o teste Access Toxo IgM II, a média esperada (0) A/CO e o DP (σ) para os controlos de qualidade Access Toxo IgM II QC (QC 1 e QC 2) são fornecidos no cartão dos valores QC. As relações A/CO individuais devem estar dentro dos respectivos limites aceitáveis. Contudo, cada laboratório deve atribuir a própria média A/CO e os limites aceitáveis uma vez recolhidos os dados suficientes. 21 QC1: Não reactivo QC2: Reactivo Access Toxo IgM II A34296E 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 14

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Fabricado para: Beckman Coulter, Inc. 250 S. Kraemer Blvd. Brea, CA 92821 U.S.A. Beckman Coulter do Brasil Com e Imp de Prod Lab Ltda Estr dos Romeiros, 220 - Galpao G3 - KM 38.5 06501-001 - Sao Paulo - SP - Brasil CNPJ: 42.160.812/0001-44 Beckman Coulter Ireland Inc. Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland 353 91 774068 Impresso nos Estados Unidos da América Fabricado na França Revisado em Setembro 2011 0459 Access Toxo IgM II A34296E 2011 Beckman Coulter, Inc. Página 16