Prova do Processo Seletivo Especialista em Laboratório (Edital ICB-70/2012) Data 21/09/2012. Nome: R.G.

Transcrição

1 1. A solução aquosa de ácido sulfúrico utilizada em baterias de chumbo apresenta concentração de 4 mol/l. O volume total a ser utilizado para se obter 250 ml de uma solução de ácido sulfúrico na concentração de 19,6 g/l é igual a: (Massas atômicas: H=1,0; O=16; S=32) a) 25,0 ml b) 0,25 ml c) 125 ml d) 37,5 ml e) 12,0 ml 2. O soro caseiro é uma solução aquosa de sacarose e cloreto de sódio (sal de cozinha). Para preparar 5 litros de soro caseiro contendo 12,0 g/l de sacarose e 0,05 mol/l de cloreto de sódio, quais massas (em gramas) do açúcar e do sal devem ser utilizadas, respectivamente? (Massa molar: cloreto de sódio= 58,5 g/mol; sacarose= 342,24 g/mol) a) 60 e 14,625 b) 48 e 22,275 c) 72 e 12,500 d) 60 e 17,225 e) 60 e 13, Em 200 ml de leite de vaca são encontrados 9,4 g de carboidratos, 6,3 g de proteínas, 143 mg de sódio e 240 mg de cálcio. A concentração (em mmol/l) de sódio e cálcio no leite é, respectivamente, de: (Massas atômicas: Na=23; Ca=40) a) 11,9 e 28,5 b) 31,1 e 17,5 c) 75,7 e 32, 5 d) 52,5 e 30,0 e) 31,1 e 30,0 4. Um cão de pequeno porte cor preta cruzou com uma cadela de grande porte branca. Dois de seus filhotes, cujos genótipos são idênticos, cruzaram. Considerando que as características pelagem preta e porte grande são dominantes e que na primeira-prole todos os filhotes nasceram com o mesmo genótipo, qual é a proporção de cães brancos e de porte grande esperada na segunda prole? 1

2 a) 1:16 b) 2:16 c) 3:16 d) 4:16 e) 5:16 5. Uma solução de ácido clorídrico, a 37% (massa/massa), possui densidade de 1,18 g/ml. Qual o volume necessário para preparar 300 ml de uma solução a 5 normal (5N) de ácido clorídrico? Massa molecular: HCl 36,5 a) 120 ml b) 137,2 ml c) 150 ml d) 148,0 ml e) 125,4 ml 6. Considerando que um paciente ingira um comprimido de medicamento que possui 800 mg de ácido ascórbico dissolvido em 200 ml de água e, que o ácido ascórbico foi totalmente dissolvido sem alteração de volume, assinale a alternativa que indica, corretamente, a concentração do ácido ascórbico nessa solução. Fórmula molecular do ácido ascórbico = C 6 H 8 O 6 Massas Molares (g/mol): C = 12,0; O = 16,0; H = 1,01 a) 14,5 mmol/l b) 13,0 mmol/l c) 18,5 mmol/l d) 22,7 mmol/l e) 21,3 mmol/l 7. Um cultivo celular de uma linhagem permanente de macrófagos foi diagnosticado como contendo micoplasma. Como pode ser realizado tal diagnóstico e qual deve ser o procedimento ideal a ser adotado nessa sala de cultura? a) Extração de DNA de uma amostra de células, amplificação do DNA utilizando primer específico de um gene comum do micoplasma e do macrófago, descarte da amostra da linhagem infectada e descongelamento de alíquota de células para nova cultura. b) Extração de DNA de uma amostra de células, amplificação do DNA utilizando primer específico de um gene de micoplasma, congelamento da 2

3 linhagem infectada e descongelamento de alíquota após limpeza da incubadora de células e sala de cultura. c) Extração de DNA de uma amostra de células, amplificação do DNA utilizando primer específico de um gene de micoplasma, tratamento das células contaminadas e limpeza da incubadora de células e sala de cultura. d) Cultivo de amostra do meio de crescimento celular onde está a linhagem em ágar; uso de fungicida no meio celular durante 4 semanas ininterruptas e higienização da sala de cultura e incubadora com paraformaldeído. e) Cultivo de amostra do meio de crescimento celular da linhagem em Agar e cultivo da linhagem em penicilina e estreptomicina em altas concentrações durante 4 semanas. 8. Com relação à técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), assinale a alternativa correta: a) Na PCR em tempo real, a curva de melting permite a identificação, quantificação e especificidade dos produtos amplificados. b) A PCR em tempo real possui menor especificidade de reação que a PCR convencional e permite detecção e monitoramento dos produtos de amplificação durante toda a corrida c) A fase linear da curva de amplificação é utilizada para determinar o limiar de detecção na PCR em tempo real, o qual é utilizado na quantificação da expressão gênica d) A PCR convencional é menos específica e sensível, sendo uma análise semiquantitativa de bandas separadas por peso molecular em gel de agarose e) A análise quantitativa de DNA ou DNA complementar é eficientemente realizada pela PCR convencional, sendo amplamente utilizada para a detecção de carga viral no diagnóstico clínico. 9. Sobre uma reação de imunoistoquímica, o que NÃO é verdadeiro: a) Os tecidos podem ser utilizados congelados ou fixados em formaldeído, paraformaldeído, dentre outos fixadores. b) Podem ser utilizados anticorpos monoclonais e policlonais para a identificação de uma determinada proteína, porém ambos podem se ligar a diferentes epítopos alvos para dado antígeno. c) Os anticorpos policlonais são obtidos pela injeção de um antígeno peptídico em animais e, após a estimulação da resposta imune secundária, é feito o isolamento dos anticorpos a partir do soro. d) Permite a caracterização de tumores malígnos para determinar se são primários ou metastásicos. e) Detergentes como o Triton X-100 podem ser usados na imuno-histoquímica para reduzir a tensão superficial da água e para permeabilizar os tecidos para facilitar a reação dos anticorpos. 3

4 10. Considerando que iniciaremos um protocolo de marcação por fluorocromos e que nosso microscópio de fluorescência é composto pelos filtros SP545, BP535/26 e um LP610, os fluorocromos A (em:667nm), B (em:535nm) e C(em:525nm) devem ser avaliados nos filtros, respectivamente: a) LP610, SP545 e BP535/26 b) LP610, BP535/26 e SP545 c) BP535/26, SP545 e LP610 d) BP535/26, LP610 e SP545 e) SP545, LP610 e BP535/ Com relação à proteção do pesquisador durante o manuseio de material radioativo, é correto afirmar: a) Os radioisótopos H 3, C 14 e P 32 é emitem radiação do tipo β, sendo necessário o uso de anteparo de chumbo para manuseá-los. b) A radiação emitida pelo P 32 do tipo γ; assim seu manuseio pode ser realizado somente com a utilização de anteparo de acrílico. c) Os radioisótopos C 14 e H 3 emitem radiação do tipo raio-x, não havendo necessidade de nenhum anteparo para manuseio. No entanto, o P 32 emite radiação do tipo γ, necessitando de anteparo de acrílico para o manuseio. d) Os radioisótopos H 3, C 14 e P 32 é emitem radiação do tipo β, sendo necessário o uso de anteparo de acrílico somente para o manuseio do P 32. e) C 14 e H 3 emitem radiação do tipo β, já o P 32 emite radiação do tipo raio-x havendo a necessidade do uso de anteparo de chumbo. 12. Com relação aos métodos de estudo da interação proteína ácidos nucléicos: a) o EMSA é utilizado para identificar a seqüência de nucleotídeos do DNA onde as proteínas se ligam, b) o EMSA é utilizado para identificar proteínas ligantes de RNA, c) o footprinting é um ensaio de retardamento de banda em gel de poliacrilamida, d) o footprinting é um ensaio de retardamento de banda em gel de agarose, e) o EMSA é utilizado para avaliar a ligação de proteínas específicas ao DNA. 13. O método de Bradford utilizado para a determinação de proteínas: a) não sofre interferência de triton-x-100. b) é baseado na interação entre a forma catiônica do coomassie brilliant blue e macromoléculas de proteínas com aminoácidos de cadeias laterais ácidas. c) é um dos poucos métodos que permitem a determinação de proteínas e peptídeos com igual sensibilidade. 4

5 d) é baseado na interação entre a forma aniônica do coomassie brilliant blue e macromoléculas de proteínas e peptídeos com aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. e) é baseado na interação entre a forma aniônica do coomassie brilliant blue e macromoléculas de proteínas com aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. 14. Os seguintes metabólitos podem produzir glicose no organismo: a) alanina, leucina, glicogênio e ácido láctico b) alanina, glicogênio, palmitato e ácido láctico c) alanina, glutamina, ácido láctico e glicerol d) glutamina, alanina, ácido láctico e palmitato e) glicogênio, alanina, palmitato e glicerol 15. São metabólitos intermediários do Ciclo de Krebs: a) fumarato, citrato, malato, glutamato b) fumarato, citrato, malato, isocitrato c) fumarato, oxoglutarato, malato, glutamato d) aspartato, citrato, malato, metilcitrato e) fumarato, citrato, malato, aspartato 16. As enzimas mais importantes para o consumo de glutamina pelas células são: a) Glutamina sintetase, glutamato desidrogenase, alanina desidrogenase b) Glutaminase tipo H, glutamato desidrogenase, alanina desidrogenase c) Glutamina sintase, glutamato sintetase, alanina aminotransferase d) Glutaminase independente de fosfato, glutamato desidrogenase, alanina aminotransferase e) Glutaminase dependente de fosfato, glutamato aminotransferase, alanina aminotransferase 17. A técnica de PCR permite fazer milhares de cópias de um único pedaço de DNA. Para tanto, necessita-se de alguns componentes, como primers (DNAs iniciadores) e enzima DNA polimerase. Qual definição seria ideal para primer? a) Fitas de DNA, com mais ou menos 50 bases (A,T,C,G) que se ligam por complementaridade ao fim da sequência de DNA que se quer multiplicar b) Fitas de DNA, com mais ou menos 20 bases (A,T,C,G) que se ligam por complementaridade ao início da sequência de DNA que se quer multiplicar 5

6 c) Fitas de DNA, com mais ou menos 80 bases (A,T,C,G) que se ligam por complementaridade ao início da sequência de DNA que se quer multiplicar d) Fitas de DNA, com mais ou menos 40 bases (A,T,C,G) que se ligam por complementaridade ao meio da sequência de DNA que se quer multiplicar e) Fitas de DNA, com mais ou menos 180 bases (A,T,C,G) que se ligam por complementaridade ao início e ao fim da sequência de DNA que se quer multiplicar 18. Através da citometria de fluxo pode-se: a) analisar a marcação de células com anticorpos acoplados a fluorocromos, sem possibilidade de recuperar as células analisadas. b) analisar a marcação de células com anticorpos acoplados a fluorocromos, com possibilidade de recuperar as células analisadas, porém estas células não são mais viáveis e morrem se cultivadas in vitro. c) analisar a marcação de células com anticorpos acoplados a fluorocromos, com possibilidade de recuperar as células analisadas, desde que a marcação utilize um único fluorocromo. d) analisar a marcação de células com anticorpos acoplados a fluorocromos, com possibilidade de recuperar as células analisadas, que são viáveis e podem ser cultivadas in vitro. e) analisar a marcação de células com anticorpos acoplados a fluorocromos, sem possibilidade de recuperar as células analisadas, caso se utilize anticorpos marcados com mais de três fluorocromos distintos. 19. Com relação à técnica de PCR em tempo real, é correto afirmar: a) Necessita do uso de corantes fluorescentes intercalantes de DNA, tais como o SyBR Green, ou de sondas específicas acopladas a fluoróforos de escolha. A primeira técnica é mais específica que a segunda. b) Depende do uso de fluorescência, que é medida ao final da reação, tal como o produto de PCR comum é corrido em gel de agarose, geralmente visualizado em luz UV. c) Tem como parâmetro importante o Ct (cycle threshold), que indica qual o ciclo da reação no qual a amplificação começa a ser detectada a níveis superiores ao ruído (background) e passa a acontecer de forma exponencial. d) não permite, por meio do uso do SyBR Green, verificar a especificidade do produto gerado e detectado, mesmo em termocicladores modernos. e) uso de sondas do tipo Taqman, acopladas a um único fluoróforo permitindo realização do experimento em multiplex. 6

7 20. Em cada poço de uma placa de 96 foram plaqueadas 2,5 x 10 4 células em meio RPMI suplementado com soro fetal bovino, aminoácidos não essenciais, L-glutamina e ácido pirúvico; todos em concentrações adequadas, em volume final de 200 µl por poço. As células foram obtidas por lavagem peritoneal de camundongos e mantidas nesse ensaio com o uso de substância ativadora X, em concentração final de 20 µm. Ao todo foram preparadas 3 placas completas. Pergunta-se: I. Qual o volume de meio necessário ao ensaio? II. Qual a quantidade de células ao ensaio? III. Qual o volume de substância X utilizada por placa, considerando seu estoque de 1 mm? Qual opção responde, respectivamente, às perguntas acima? a) 19,2 ml; 4,8 x 106 células; 2,34 ml. b) 57,6 ml; 7,2 x 106 células; 384 µl. c) µl; 72 x 105 células; 3,84 ml. d) µl; 48 x 106 células; 230,4 µl. e) 192 ml; 1,44 x 106 células; 0,1152 ml 21. Com relação à microscopia de fluorescência, assinale a opção errada. a) Entende-se por fluorescência a propriedade que algumas substâncias possuem, após serem excitadas com radiação de baixo comprimento de onda, resultando na emissão de radiação de maior comprimento de onda. b) Na microscopia de fluorescência utilizam-se três tipos de filtro, sendo: filtros de excitação, filtros de emissão e filtros separadores de raios dicromáticos ou espelhos dicromáticos. c) Utiliza anticorpos que, por serem moléculas emissoras luz de alta energia, geram fluorescência em todos os comprimentos de onda luminosa dentro do espectro da luz visível, o que permite a identificação da estrutura a qual o anticorpo está associado. d) A microscopia de fluorescência baseia-se no seguinte fenômeno: a energia é absorvida pelo átomo, que fica excitado; o elétron, após absorver energia, orbita para um nível energético superior; o elétron retorna ao seu estado inicial emitindo um fóton. e) A microscopia de fluorescência pode ser aplicada para a determinação da localização e dinâmica de proteínas e outros compartimentos celulares. 7

8 22. Em relação ao princípio da citometria de fluxo, é correto afirmar que: a) Forward Scatter ou FSC permite a mensuração da complexidade celular ou granulosidade, enquanto Side Scatter ou SSC permite analisar o tamanho relativo das partículas ou volume celular. b) Os detectores são apontados na linha do feixe de luz (Forward Scatter ou FSC) e vários perpendiculares a este (Side Scatter ou SSC), além de um ou mais detectores fluorescentes. c) Um feixe de luz de um único comprimento de onda é direcionado a um meio líquido em fluxo. Detectores são apontados ao local onde o fluxo passa através do feixe de luz que determinam componentes e propriedades de células, mas não de organelas celulares que fluem na suspensão celular. d) Um citômetro de fluxo utiliza os princípios da microscopia, porém, ao invés de imagens da célula, ele permite uma quantificação de um conjunto de parâmetros das células suspensas que passam através de vários feixes de luz. e) Um citômetro de fluxo consiste somente de um fluxo de células, uma fonte de luz, um único detector e conversor de sistema analógico para digital, e um computador para análise dos sinais obtidos. 23. Considere as etapas descritas abaixo: Ligar o fluxo e a luz UV de 10 a 15 minutos antes de seu uso. Descontaminar a bancada de trabalho com álcool etílico ou isopropílico a 70%. Usar avental de manga longa, luvas, máscara e anteparo de acrílico para manuseio das amostras. Autoclavar material por 20 minutos a 120 C Usar de forma prolongada lâmpadas UV para esterilização. Os procedimentos operacionais padrão descritos acima são necessários para o desenvolvimento das técnicas de, respectivamente: (A) extração de DNA (B) cultivo celular e tecidual (C) eletroforese com visualização em transiluminador (D) esterilização e desinfecção de utensílios descartáveis para PCR (E) preparo de amostras com radioativo P 32 a) B, A, E, C, D b) E, D, C, A, B c) B, A, E, D, C d) C, D, A, B, E e) C, D, B, A, E 8

9 24. Uma cultura celular não aderente de HL-60 foi descongelada e mantida em condições específicas. Após três dias de cultivo, as células apresentaram uma confluência de aproximadamente 85%. Marque a alternativa correta sobre o procedimento adequado a ser adotado na situação descrita. a) As células devem ser tripsinizadas, para que algumas delas sejam retiradas da garrafa de cultivo, visando a reduzir a confluência na mesma. b) Deve-se reduzir a confluência no local de cultivo através de lavagens com o meio de cultura. Haverá a redução do efeito das moléculas de adesão secretadas pelas células em cultivo. c) As células devem ser lavadas com um meio estéril que não contenha cálcio e magnésio, e depois tripsinizadas, para que algumas delas possam ser transferidas para outra garrafa de cultivo, a fim de reduzir a confluência celular. d) Deve-se aumentar a concentração de soro fetal bovino para 30%, como um aporte adicional de fatores tróficos para reduzir a morte destas células em cultura. e) As células devem ser ressuspendidas e algumas delas transferidas para outro recipiente de cultivo, a fim de reduzir a confluência celular. 25. A respeito do cultivo e manutenção de culturas celulares, marque com V as afirmações verdadeiras e com F as afirmações falsas, em seguida, marque a opção que contenha a seqüência correta, de cima para baixo. ( ) O meio de cultura deve apresentar sais inorgânicos, hidratos de carbono, aminoácidos, vitaminas, lipídios, tampão, antibiótico e indicador de ph, devendo ser acrescido de soro. ( ) Dentre os parâmetros ambientais que devem ser controlados, incluem: temperatura, umidade, porcentagem de CO 2 e ph. ( ) Para a determinação da viabilidade celular, pode-se utilizar o azul de tripan, no qual apenas as células viáveis coram-se de azul. O percentual de células viáveis pode ser obtido através de contagem em uma câmara de Neubauer. ( ) Um dos principais determinantes para manutenção de uma cultura de células é o soro, que possui uma série de fatores de crescimento e de adesão. ( ) A garantia de condições estéreis é essencial para evitar contaminações. A utilização de luz UV e álcool 70% no fluxo laminar colaboram para que as condições sejam adequadas. a) V, V, V, F, V b) V, V, V, V, F c) V, V, F, V, V d) F, V, F, V, V e) V, V, V, V, V 9