UNIVERSIDADE ESTADUAL DE GOIÁS UNIDADE UNIVERSITÁRIA DE SÃO LUÍS DE MONTES BELOS TECNOLOGIA EM LATICÍNIOS VERUSCA MARTINS SANTANA

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1 UNIVERSIDADE ESTADUAL DE GOIÁS UNIDADE UNIVERSITÁRIA DE SÃO LUÍS DE MONTES BELOS TECNOLOGIA EM LATICÍNIOS VERUSCA MARTINS SANTANA DETERMINAÇÃO DE RESÍDUOS DE ANTIBIÓTICOS DA CLASSE DOS BETA LACTÂMICOS EM LEITE COMERCIALIZADO CLANDESTINAMENTE EM SÃO LUÍS DE MONTES BELOS - GO SÃO LUÍS DE MONTES BELOS-GO 2011

2 2 VERUSCA MARTINS SANTANA DETERMINAÇÃO DE RESÍDUOS DE ANTIBIÓTICOS DA CLASSE DOS BETA LACTÂMICOS EM LEITE COMERCIALIZADO CLANDESTINAMENTE EM SÃO LUÍS DE MONTES BELOS - GO Artigo apresentado à Universidade Estadual de Goiás como requisito para obtenção do titulo de Tecnólogo em Laticínios. Orientador: Prof. Esp. Flávio de Castro Salles. SÃO LUÍS DE MONTES BELOS-GO 2011

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4 4 Dedico este trabalho ao meu marido Rene Miguel e ao meu filho Calebe Miguel, também a todos que me ajudaram e apoiaram. E aos meus amigos e professores.

5 5 AGRADECIMENTOS Agradeço primeiramente a Deus por ter me guiado e iluminado em cada decisão a ser tomada. Agradeço ao meu orientador prof. Esp. Flávio de Castro Salles, que com toda paciência e dedicação me acompanhou nessa longa caminhada. Agradeço também ao meu esposo, Rene Miguel, que de forma especial e carinhosa me deu força e coragem, me apoiando nos momentos de dificuldades, e também ao meu filho, Calebe Miguel, que mesmo sem saber o que isso significa sempre esteve do meu lado. Agradeço à coordenadora do curso Abilene Lyra Dias e aos professores que desempenharam com dedicação as aulas ministradas. E por fim, agradeço aos meus colegas e amigos que sempre esteve ao meu lado, aos funcionários da Universidade Estadual de Goiás que sempre estavam prontos a nos ajudar.

6 6 Eu não procuro saber as respostas, procuro compreender as perguntas. Confúcio

7 7 LISTA DE TABELAS Tabela - 1 Concentrações de resíduos de antibióticos detectáveis pelo Charm-test comparados com os Limites Máximos de Resíduos (LMRs) tolerados pela Legislação Brasileira. Tabela - 2 Resultados de resíduos de antibióticos nas amostras de leites das leiterias estudadas utilizando o teste Charm-test.

8 8 LISTA DE FIGURA Figura 1 Figura 2 Figura 3 Unidade CHARM SL/MRL - TEST Teste negativo linha teste T e linha de controle C são as mesmas cores ou linha T é mais escura. Teste positivo linha teste T é mais clara que a linha controle C '.

9 9 LISTA DE ABREVIATURAS ANVISA Agência Nacional de Vigilância Sanitária LMRs Limites Máximos de Resíduos PAMvet Programa de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos de Origem Animal Kg Quilograma µl Microlitro µg Micrograma

10 10 SUMÁRIO RESUMO...11 ABSTRACT INTRODUÇÃO MATERIAL E MÉTODOS RESULTADOS E DISCUSSÃO CONCLUSÃO REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS... 18

11 11 DETERMINAÇÃO DE RESÍDUOS DE ANTIBIÓTICOS DA CLASSE DOS BETA- LACTÂMICOS EM LEITE COMERCIALIZADO CLANDESTINAMENTE EM SÃO LUÍS DE MONTES BELOS GO Verusca Martins Santana¹; Flávio de Castro Salles² RESUMO: A qualidade e segurança de alimentos têm recebido cada vez mais atenção da população mundial, especialmente em relação a perigos microbiológicos e químicos presentes em alimentos. Foram coletadas amostras de leite em dez leiterias do município de São Luis de Montes Belos-GO, no mês de agosto de 2011, para a realização da pesquisa, tendo em vista que são amplamente utilizados no tratamento de mastite no gado leiteiro e também como suplementos em sua dieta. Para detectar os resíduos de antibióticos presentes nas amostras de leite, foi utilizado o KIT comercial denominado CHARM /MRL TEST, que determina a presença de resíduos de antibióticos da classe dos beta lactâmicos. Todas as amostras estudadas apresentaram resultado negativo para a presença de antibióticos da classe dos beta lactâmicos. Palavras-chave:Contaminação. Mastite;Qualidade. ABSTRACT:The quality and food safety have received increasing attention of the world population, especially in relation to microbiological and chemical hazards in food. Milk samples were collected at points of sale in the city of São Luís de Montes Belos-GO at august of 2011 to perform the research, in view of they are widely used in the treatment of mastitis in dairy cattle and also as a supplement to your diet. To detect residues of antibiotics present in milk samples, was used the commercial kit called CHARM /MRL TEST, that determines the presence of antibiotic residues of beta lactam antibiotics. All samples studied presented results negative for the presence of beta lactam antibiotics type beta-lactam. Word-key: Contamination; Mastitis; Quality. 1 Acadêmica do Curso de Tecnologia em Laticínios, Universidade Estadual de Goiás (UEG) - UnU São Luís de Montes Belos/GO. <verusca.santana@hotmail.com>; 2 Professor do Curso Tec. em Laticínios, Universidade Estadual de Goiás (UEG) - UnU São Luís de Montes Belos/GO. <flaviolaticíniosueg@yahool.com.br>;

12 INTRODUÇÃO De acordo com Nero (2007), a qualidade e segurança de alimentos têm recebido cada vez mais atenção da população mundial, especialmente em relação a perigos microbiológicos e químicos presentes em alimentos. Apesar de microrganismos patogênicos serem os agentes mais relacionados a enfermidades veiculadas por alimentos, a presença de resíduos de substâncias químicas também é muito comum em todo o mundo. Em leite, antibióticos são resíduos químicos detectados com bastante freqüência, tanto no Brasil como em outros países. Para Denobile (2004), os antibióticos são amplamente utilizados no tratamento de doenças no gado leiteiro e também como suplementos em sua dieta. Sua administração pode ser feita via intramamária, para o tratamento de mastite; por via parenteral (intramuscular, intravenosa, subcutânea), na terapia de infecções; por via intrauterina, para o tratamento de infecções uterinas, cervicais e vaginais, e por via oral, para o tratamento de doenças ou como suplemento alimentar, em doses subterapêuticas. De acordo com Brito (2005), após a administração de antibiótico nos animais é necessário aguardar o período de carência que consiste no prazo de eliminação do antibiótico no leite, após a última aplicação. Este período varia de produto para produto, e de acordo com a via de aplicação. Neste período de tratamento é recomendado que todo o leite da vaca seja descartado. No Brasil, apenas em 1980, surgiu uma legislação que permite a comercialização do leite somente após 72 horas, a partir da última aplicação de antibióticos, independentemente da via de inoculação (BRASIL, 1980), porém, segundo Almeida et al (2003) o tempo de eliminação do antibiótico depende da via de inoculação, da dosagem, do estado fisiológico da glândula mamária e do tipo de antibiótico aplicado, alcançando às vezes até 141 horas. As principais razões para a indústria, as autoridades de saúde e os consumidores se preocuparem com os resíduos de antibióticos no leite, de acordo com Brito e Brito (2001), reside no fato de que uma pequena porcentagem de consumidores apresentam reações alérgicas a estas substâncias, mesmo em pequenas quantidades. Alguns estudos sobre antibióticos indicam a probabilidade de o indíviduo desenvolver tumores malignos independentemente da dose.denobile (2004), afirma que a presença de resíduos de antibióticos em alimentos pode ter um

13 13 efeito adverso na flora intestinal humana, podendo prejudicar sua ação protetora local, além de propiciar a seleção de populações de bactérias resistentes. Para as empresas laticínistas, o principal problema é a inibição de culturas lácteas utilizadas na fabricação de queijos, iogurtes e outros produtos fermentados, dificultando a obtenção destes produtos ou alterando sua qualidade. Outros problemas são a formação de odores desagradáveis na manteiga e no creme de leite. (BRITO, 2005). A pasteurização e esterilização do leite não destroem os resíduos destas drogas, constituindo risco para o consumidor e problema para a indústria. Por exemplo, para eliminar a penicilina do leite é necessário atingir 100ºC, durante três horas, ocorrendo o mesmo com a tetraciclina (SANTOS, 2005). No intuito de avaliar e prevenir esses riscos, a ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária) implantou no Brasil, em 2003, o Programa de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos de Origem Animal (PAMvet), que visa controlar resíduos de medicamentos veterinários nos alimentos. O leite foi o primeiro alimento a ser pesquisado por ser muito consumido pela população brasileira. Definiram-se também os seguintes princípios ativos a serem pesquisados: tetraciclinas, beta-lactâmicos, sulfas, abamectina, doramectina e ivermectina (ANVISA, 2003). Mediante a importância do tema segurança de alimentos, o presente trabalho objetivou-se com a realização verificar a presença de resíduos de antibióticos do tipo beta-lactâmicos no leite in natura comercializado clandestinamente no município de São Luis de Montes Belos, Goiás. 2.0 MATERIAL E METODOS Coletaram amostras de leite em dez leiterias do município de São Luis de Montes Belos-GO, no mês de agosto de A coleta foi realizada uma vez por semana durante três semanas, perfazendo um total de 30 amostras. Estas foram coleta das na segunda-feira no período da manhã em recipientes plásticos com capacidade de 2 (dois) litros (maneira que são distribuídas ao consumidor) e encaminhadas imediatamente ao laboratório de uma indústria de laticínios para serem analisadas.

14 14 Para detectar os resíduos de antibióticos presentes nas amostras de leite, foi utilizado o KIT comercialmente denominado CHARM /MRL TEST, que determina a presença de resíduos de antibióticos da classe dos beta lactâmicos. kit Charm-test, que funciona com um princípio de ensaio de inibição microbiana. Este teste detecta resíduos de β-lactâmicos e outros antibióticos (gentamicina, tilosina) utilizados em gado leiteiro. A sensibilidade desse teste para as diferentes substâncias detectáveis está na Tabela 1, assim como os limites máximos de resíduos atualmente tolerados pela Legislação Brasileira. Tabela 1. Concentrações de resíduos de antibióticos detectáveis pelo Charm-test comparados com os Limites Máximos de Resíduos (LMRs) tolerados pela Legislação Brasileira. Substância antimicrobiana β-lactâmicos Concentração mínima para positividade no Charm-test (µg Kg) LMR (µg Kg) Penicilina G 3 4 Amoxicilina 6 4 Ampicilina 5 4 Ceftiofur Cefapirina 10 NE* Sulfametazina Sulfadimetoxina Gentamicina NE Oxitetraciclina Tilosina NE Fontes: Charm Sciences, Inc., EUA; ANVISA, 2003; *NE = não especificado. O método consiste em pré-aquecer a unidade de CHARM /MRL TEST a 55 C, e introduzir o dispositivo enzimático na unidade de aquecimento conforme Figura 1.

15 15 Figura 1- Unidade CHARM /MRL - TEST Em seguida, homogeneíza-se a amostra de leite e pipeta-se 300µl (marcado na pipeta fornecida). Logo após levanta-se o adesivo do dispositivo e transferi-se todo o conteúdo da pipeta para o dispositivo. Veda-se novamente o dispositivo e aguarda-se o tempo de 8 (oito) minutos. A interpretação do resultado deve ser conforme Figura 2 e Figura 3. Figura 2- Teste negativo linha teste T e linha de controle C são as mesmas cores ou linha T é mais escura.

16 16 Figura 3 - Teste positivo linha teste T é mais clara que a linha controle C '. 3.0 RESULTADO E DISCUSSÃO Todas as amostras estudadas apresentaram resultado negativo para a presença de antibióticos da classe dos beta lactâmicos (tabela 2). Estes resultados diferem dos obtidos por Folly (2001), realizado na região Norte do Estado do Rio de Janeiro, onde foram encontrados 4,33% das amostras do leite de consumo contaminadas com resíduo de antibiótico. Diferem também dos resultados encontrados por Nascimento et al. (2001) que demonstraram que em 96% das amostras analisadas 50% delas apresentaram resultados positivos. Os resultados encontrados por Almeida et al. (2003), pesar de serem pequenos, são bem significativos. Ele por meio do teste de SNAP, analisou 158 amostras na região de Uberlândia - MG, obtendo-se 1,89% de amostras de leite com resíduo de antibiótico. No entanto, esta diferença pode ser explicada pela diferença das técnicas laboratoriais utilizadas nas duas pesquisas,mesmo as duas técnicas reconhecidas pelo Ministério da Agricultura. Tabela 2. Resultados da pesquisa de resíduos de antibióticos em amostras de leites das leiterias estudadas utilizando o teste Charm-test,São Luis de M.Belos- GO,2011. Leiterias 1º Semana 2º Semana 3º Semana A negativo Negativo negativo B negativo Negativo negativo C negativo Negativo negativo D negativo Negativo negativo E negativo Negativo negativo F negativo Negativo negativo

17 17 G negativo Negativo negativo H negativo Negativo negativo I negativo Negativo negativo J negativo Negativo negativo As amostras foram submetidas a análises físico-químicas, na qual foram encontrados valores de crioscópia altos(0,488ºh a 0,416ºH), este fato pode ter influenciando nos resultados obtidos por ter sido o leite diluído, comprovado pela análise do índice crioscópico do leite, possivelmente diminuindo a concentração detectável do teste, assim reduzindo a eficácia da análise. 4.0 CONCLUSÃO Mediante aos resultados obtidos conclui-se que as amostras de leite analisadas não apresentaram resíduos de antibióticos da classe de beta - lactâmicos. Visto que a presença de resíduos de antibióticos no leite pode resultar em prejuízos econômicos e agravos à saúde, torna-se de suma importância monitorar o a qualidade do leite comercializado no município. Assim, sugere-se uma maior fiscalização por parte dos órgãos competentes destes pontos de vendas, em relação à presença de resíduos de antibióticos, pois segundo a legislação a venda de leite sem ter submetido a tratamento térmico é proibido.

18 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALMEIDA L. P. et al. Resíduos de antibiótico em leite de propriedades rurais da região de Uberlândia MG. Biosci. J., v- 19, n- 3, p , Set/Dez ANVISA - Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Programa Nacional de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos Expostos ao Consumo BRASIL,PAMVet. Brasília, Disponível em: < Acesso em 15 julho de BRASIL, MINISTÉRIO DA AGRICULTURA PECUÁRIA E ABASTECIMENTO. Divisão de Inspeção de Produtos de Origem Animal. Portaria n. 005 de 24 de abril de Diário Oficial União, Brasília, 25 abr p. 734 BRITO, M.A.V.P., ARCURI, E.F., BRITO, J.R.F. Avanços tecnológicos para o aumento da produtividade leiteira. Anais... Juiz de Fora: Embrapa Gado de Leite, p BRITO, J. R. F.; BRITO, M A V.P., Qualidade do leite brasileiro e os desafios para atendimento das exigências internacionais. Juiz de Fora: Embrapa Gado de Leite, p DENOBILE, M.; NASCIMENTO,E. S. Validação de método para determinação de resíduos dos antibióticos oxitetraciclina, tetraciclina, clortetraciclina e doxiciclina, em leite, por cromatografia líquida de alta eficiência. Revista Brasileira de Ciências Farmacêuticas vol. 40, n. 2, 2004

19 19 FOLLY, M.M. MACHADO, S.C.A. Determinação de resíduos de antibióticos, utilizando-se métodos de inibição microbiana, enzimático e imunoensaios no leite pasteurizado comercializado na região norte do estado do rio de janeiro, Brasil. Ciência Rural, Santa Maria, v.31, n.1, p.95-98, 2001 NASCIMENTO G.G.F et al. Ocorrência de resíduos de antibióticos no leite comercializado em piracicaba, SP. Rev. Nutr., campinas, v14n2: p , 2001 NERO L.A et al. Resíduos de antibióticos em leite cru de quatro regiões leiteiras no Brasil. Ciênc. Tecnol. Aliment., Campinas, v27n2: p , ; 2007 SANTOS M. V. Efeito do tratamento térmico sobre os resíduos de antibióticos β- lactâmicos. Artigos técnicos, MilkPoint, Acesso em 15 julho de 2011.