PROPOSTA DE TUTORIA DE PROJECTOS Disciplinas de Investigação do Mestrado Integrado em Medicina
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1 PROPOSTA DE TUTORIA DE PROJECTOS Disciplinas de Investigação do Mestrado Integrado em Medicina Orientador responsável (docente ou investigador doutorado da FMUC): Sofia Vale Pereira e Ana Mª Todo Bom Centro/Serviço/Instituto: Instituto de Patologia Geral (Directora Anabela Mota Pinto) spereira@fmed.uc.pt, apinto@fmed.uc.pt Área Temática do Projecto: Inflamação Alérgica Duração do projecto: 2 anos/2 anos e meio (indicar especificamente se o projecto é susceptível de ser continuado ao longo do tempo do curso) Financiamento: Sim Não Agência Financiadora: Projecto Ga2Len Exigência de competências prévias aos alunos? Sim Não Quais? (não aplicável a alunos do 1º e 2º anos do mestrado integrado) Título do projecto: Intervenção da Histamina e dos seus receptores Inflamação Alérgica a Pólens Resumo (Max. de 300 palavras): A alergia é considerada uma reacção exagerada aos antigénios do meio ambiente, mediada predominantemente por uma resposta imunológica com padrão Th2 e que se traduz pelo aumento da produção de IgE específica a esses antigénios. O contacto do alergénio com células imunocompetentes, e vai provocar a libertação de mediadores responsáveis pelo o envolvimento de outros grupos celulares que permitem continuar este processo inflamatório e o aparecimento das manifestações clínicas características. A prevalência de alergia a polen na Europa tem vindo a aumentar e é responsável por sintomatologia intensa no período de Abril a Junho. A rinite, 1
2 conjuntivite, asma, eczema e urticária de contacto fazem parte deste quadro clínico de polinose. As reacções inflamatórias alérgicas envolvem a participação de diferentes tipos de células. Os basófilos do sangue periférico e os mastócitos tecidulares têm um importante papel na doença alérgica pela sua capacidade de responder ao contacto com o alergénio através da ligação ao receptor de alta afinidade para a IgE, libertando potentes mediadores inflamatórios: histamina, serotonina, heparina, leucotrienos e prostaglandinas, tripsina beta glucosaminidase e factores quimiotáticos para diferentes tipos celulares. A histamina é considerada a principal amina vasoactiva e tem sido amplamente estudada. A histamina além de ser produzida pelos mastócitos e basófilos, é também produzida pelas células gástricas enterocromafins like, e terminações nervosas histaminérgicas no cérebro. O significado da histamina como mediador pode inferir-se das células que expressam receptores para este mediador - com excepção dos mastócitos (que no ser humano não parecem expressar receptores para a histamina) todas células expressam um tipo de receptores. Os receptores para a histamina estão entre os milhares de membros (incluindo os receptores olfactivos) da família 7- transmembrane-spanning (7TM) que, através da interacção com a família de proteínas Guanosina Trifosfato (GTP) activa reacções intracelulares que vão desencadear a activação da célula. Os receptores H1 (H1R) modificam os níveis de cálcio livre no citosol, enquanto os receptores H2 (H2R) medeiam a resposta intracelular caracterizada por aumentos da Adenosina Monofosfato cíclica (camp). Os receptores H3 (H3R) e H4 (H4R) podem actuar destas duas formas, mas têm ainda o mecanismo adicional de diminuir o camp. É libertada em resposta a uma grande variedade de estímulos nomeadamente reacções imunológicas envolvendo a ligação de IgE aos receptores dos mastócitos. Consoante o receptor a que se liga a sua acção é diferente, actuando através do receptor H1R medeia a resposta imediata no pulmão ao aumentar a permeabilidade das células epiteliais dos brônquios, induz vasodilatação das vénulas pós-capilares e broncoconstrição. Na resposta tardia, o H1R medeia a resposta inflamatória crónica, consegue suprimir a libertação de IL-12 e estimular a IL-10, conduzindo a uma resposta Th2. Ainda através do H1R contribui para a inflamação alérgica ao libertar o granulocyte macrophage-colony stimulating factor, IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-11, eotaxina e TNF-a das células endoteliais, células dendríticas (DC), Møs, e células mononucleadas. De notar que também através do H1R a histamina aumenta a expressão de moléculas de adesão como o ICAM-1, E-selectina, LFA-1. A regulação da acumulação de leucócitos nos tecidos é regulada pela ligação da histamina ao H1R, como acontece por exemplo em relação aos eosinófilos na alergia, mas esta acção é dose-dependente. Enquanto altas doses de histamina inibem a quimiotaxia dos eosinófilos através do H2R, o H1R aumenta a quimiotaxia destas células em baixas doses. O H4R pode também ter um papel major na quimiotaxia dos 2
3 eosinófilos. Pouco depois de libertada a histamina é inactivada pelas histaminases. Esta intervenção dos receptores de histamina determina respostas diferentes em doentes alérgicos que podem ter consequências na intervenção terapêutica a instituir futuramente a estes doentes. (área, importância, meios, metodologias, etc.) Objectivos (Max de 500 palavras): Objectivos Gerais Exposição/Introdução do(s) aluno(s) a: Revisão crítica de literatura Metodologia de elaboração de um projecto de investigação científica Metodologia de Investigação aplicada à clínica (protocolos, inquéritos, factores de inclusão e exclusão, etc) Realização de técnicas laboratoriais conducentes a execução prática do projecto Tratamento de dados (cálculos dos resultados, cálculos estatísticos, elaboração de bases de dados) Objectivos Específicos Estudo da sensibilização a alergénios polínicos para selecção de doentes (Prick Test); Estudo de activação de basófilos em resposta a antigénios polínicos: - Padrão de desgranulação; - Determinação de Histamina; Identificação de receptores de histamina H1R, H2R, H3R, H4R em condições basais e após estimulação; tendo por objectivo reconhecer nos grupos de doentes a estudar o papel pró-inflamatório e regulador deste mediador. Plano de trabalhos (Max de 1500 Palavras): Material Biológico: Os estudos farão uso de dados clínicos e amostras sangue periférico recolhidos de doentes alérgicos a pólen, e sensibilizados a pólen sem doença alérgica, em condições basais e após estimulação. Cronograma 3
4 1ª Fase Colocação do estudo 2ª Fase Revisão da literatura pertinente pelos alunos Elaboração do projecto e protocolos Compreensão da metodologia e selecção de amostras em estudo Recolha de informação clínica Articulação com o laboratório Trabalho de Laboratório realização dos estudos laboratoriais seleccionados e processamento dos resultados obtidos. Elaboração de base de dados electrónica 3ª Fase Plano e execução de análise estatística 4ª Fase Elaboração do relatório e artigo final (fases, objectivos, metodologias, resultados de cada fase, calendarização, etc.) Competências específicas do projecto a adquirir pelo aluno: Conhecimento da Fisiopatologia da inflamação alérgica. Exposição dos alunos a análise crítica da literatura, metodologia de investigação clínicos, realização de técnicas laboratoriais e compreensão do seu alcance; limitações, elaboração e apresentação de comunicação científica, processo de submissão e revisão de artigos científicos. Estes resultados serão independentes de os achados confirmarem ou infirmarem a hipótese condutora. (Entre outros requisitos, os alunos deverão ser capazes de formular uma hipótese científica; ser capazes de desenhar um projecto científico e identificar a sua relevância face ao estado do actual do conhecimento; saber desenhar experiências científicas aplicando protocolos específicos; saber interpretar e discutir de forma crítica os resultados obtidos; descrever e expor oralmente os resultados obtidos.) 4
5 5
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