XIV ENCONTRO SOBRE METODOLOGIAS E GESTÃO DE LABORATÓRIOS DA EMBRAPA VALIDAÇÃO UMA REVISÃO BASEADA EM DOCUMENTOS E NORMAS

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1 XIV ENCONTRO SOBRE METODOLOGIAS E GESTÃO DE LABORATÓRIOS DA EMBRAPA VALIDAÇÃO UMA REVISÃO BASEADA EM DOCUMENTOS E NORMAS PAULA FERNANDES DE AGUIAR PROF. DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ANALÍTICA DO IQ/UFRJ paulafda@iq.ufrj.br Tel: (021) / Tel: (011) /

2 OBJETIVOS APRESENTAR O ENTENDIMENTO SOBRE A VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE ANÁLISE A PARTIR DE VÁRIOS DOCUMENTOS E NORMAS

3 TIPOS DE DOCUMENTOS E NORMAS GERAIS PODEM, EM PRINCÍPIO, SER UTILIZADOS PARA QUALQUER MÉTODO OU TÉCNICA ANALÍTICA ESPECÍFICOS SÃO UTILIZADOS PARA ATENDER A UMA DETERMINADA EXIGÊNCIA OU A UM ORGANISMO CERTIFICADOR, ACREDITADOR OU HABILITADOR

4 DOCUMENTOS/NORMAS GERAIS USADOS COMO BASE PARA A APRESENTAÇÃO 1. ICH: 2005 VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES: TEXT AND METHODOLOGY - Q2(R1) 2. IUPAC: 2002 HARMONISED GUIDELINES FOR SINGLE-LABORATORY VALIDATION OF METHODS OF ANALYSIS 3. INMETRO: 2008 ORIENTAÇÃO SOBRE VALIDAÇÃO DE MÉTODOS ANALÍTICOS DOQ-GCRE VIM: 2008 VOCABULÁRIO INTERNACIONAL DE METROLOGIA

5 DOCUMENTOS/NORMAS GERAIS USADOS COMO BASE PARA A APRESENTAÇÃO 5. ISO/IEC 17025: 2005 VOCABULÁRIO INTERNACIONAL DE METROLOGIA 6. EURACHEM: 1998 THE FITNESS FOR PURPOSE OF ANALYTICAL METHODS. A LABORATORY GUIDE TO METHOD VALIDATION AND RELATED TOPICS 7. ANVISA: 2005 GUIA PARA A QUALIDADE EM QUÍMICA ANALÍTICA. UMA ASSISTÊNCIA À HABILITAÇÃO. SÉRIES TEMÁTICAS 1 - LABORATÓRIO

6 DOCUMENTOS/NORMAS ESPECÍFICOS USADOS COMO BASE PARA A APRESENTAÇÃO 1. RESOLUÇÃO 899 DA ANVISA (AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA): 2003 GUIA PARA VALIDAÇÃO DE MÉTODOS ANALÍTICOS 2. GUIA PARA VALIDAÇÃO DO MAPA (MINISTÉRIO DA AGRICULTURA, PECUÁRIA E ABASTECIMENTO): 2008 GUIA PARA VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE ANALÍTICOS E CONTROLE DE QUALIDADE INTERNA DAS ANÁLISES DE MONITORAMENTO DO PLANO NACIONAL DE RESÍDUOS E CONTAMINANTES PNCRC ANIMAL

7 DOCUMENTOS/NORMAS ESPECÍFICOS USADOS COMO BASE PARA A APRESENTAÇÃO 3. DIRETIVA /23/CE: 2002 DESEMPENHO DE MÉTODOS ANALÍTICOS E INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS 4. U.S. PHARMACOPOEIA CONV. (USP) VOL. 31: 2008 CAPÍTULO VALIDAÇÃO

8 VALIDAÇÃO VALIDAÇÃO DE MÉTODO ( ) VALIDAÇÃO É A CONFIRMAÇÃO POR EXAME E FORNECIMENTO DE EVIDÊNCIA OBJETIVA DE QUE OS REQUISITOS ESPECÍFICOS PARA UM DETERMINADO USO PRETENDIDO SÃO ATENDIDOS ABNT NBR ISO/IEC : 2005

9 VALIDAÇÃO DE MÉTODO ( ) NOTA 2 CONVÉM QUE A TÉCNICA USADA PARA A DETERMINAÇÃO DO DESEMPENHO DE UM MÉTODO SEJA UMA DAS SEGUINTES OU UMA COMBINAÇÃO DESTAS: 1. CALIBRAÇÃO COM USO DE PADRÕES DE REFERÊNCIA OU MATERIAL DE REFERÊNCIA 2. COMPARAÇÕES COM RESULTADOS OBTIDOS POR OUTROS MÉTODOS 3. COMPARAÇÕES INTERLABORATORIAIS 4. AVALIAÇÃO SISTEMÁTICA DOS FATORES QUE INFLUENCIAM O RESULTADO 5. AVALIAÇÃO DA INCERTEZA DO RESULTADO COM BASE NO CONHECIMENTO CIENTÍFICO DOS PRINCÍPIOS TEÓRICOS DO MÉTODO E NA EXPERIÊNCIA PRÁTICA ABNT NBR ISO/IEC : 2005

10 TABELA COMPARATIVA DOS CRITÉRIOS SOLICITADOS PELOS DOCUMENTOS E NORMAS DOCUMENTOS E NORMAS CRITÉRIOS DE DESEMPENHO S/E LIN SENS F. TRAB LD LQ CCα CCβ EXAT RECUP REPE P. INT REPRO ROB ICH X X X X X X X X X X USP X X X X X X X X X X X ANVISA X X X X X X X ** X X INMETRO X X X X X X X X X X MAPA X X X X X X X X 657 X X X X X X X X X IUPAC X X X X X X X X X EURACHEM X X X X X X X X X X X X ** = SE HOUVER REPRODUTIBILIDADE A PREC. INTERM. NÃO É NECESSÁRIA

11 DEFINIÇÕES

12 SELETIVIDADE/ESPECIFICIDADE CAPACIDADE DO MÉTODO EM QUANTIFICAR COM EXATIDÃO O ANALITO DE INTERESSE, NA PRESENÇA DE IUPAC(S) INTERFERENTES VIM(S) PROPRIEDADE DE UM SISTEMA DE MEDIÇÃO,..., SEGUNDO A QUAL O SISTEMA FORNECE RESPOSTA DE UM OU MAIS ANALITOS, DE TAL FORMA QUE AS RESPOSTAS DOS ANALITOS SEJAM INDEPENDENTES ENTRE SI... MÉTODO QUE PRODUZ RESPOSTA PARA VÁRIOS ANALITOS, MAS QUE PODE DISTINGUIR A RESPOSTA DO ANALITO DE INTERESSE DA DE OUTROS INMETRO(S) CAPACIDADE DO MÉTODO EM DETERMINAR INDUBITAVELMENTE O ANALITO DE INTERESSE NA PRESENÇA DE COMPONENTES PASSÍVEIS DE ESTAREM PRESENTES NA AMOSTRA, COMO IMPUREZAS, PRODUTOS DE DEGRADAÇÃO, EFEITOS DE MATRIZ, ETC. ANVISA(E/S) USP(E) ICH(E) CAPACIDADE DO MÉTODO DE DISCRIMINAÇÃO ENTRE A SUBSTÂNCIA A ANALISAR E SUBSTÂNCIAS ANÁLOGAS MAPA(S/E)

13 SELETIVIDADE/ESPECIFICIDADE VIM(S) EURACHEM(E) CAPACIDADE DO MÉTODO EM DETERMINAR COM EXATIDÃO E ESPECIFICAMENTE O ANALITO DE INTERESSE NA PRESENÇA DE COMPONENTES PASSÍVEIS DE ESTAREM PRESENTES NA AMOSTRA, COMO IMPUREZAS, PRODUTOS DE DEGRADAÇÃO, EFEITOS DE MATRIZ, ETC. PROPRIEDADE DE UM SISTEMA DE MEDIÇÃO,..., SEGUNDO A QUAL O SISTEMA FORNECE RESPOSTA DE UM OU MAIS ANALITOS, DE TAL FORMA QUE AS RESPOSTAS DOS ANALITOS SÃO INDEPENDENTES ENTRE SI... CAPACIDADE DE UM MÉTODO DISTINGUIR A SUBSTÂNCIA A ANALISAR DE OUTRAS SUBSTÂNCIAS 657(E)

14 USP MAPA ICH EXPRESSA O GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE O VALOR ACEITO COMO VERDADEIRO E O VALOR MEDIDO. GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE O RESULTADO DE UM ENSAIO E O VALOR DE REFERÊNCIA ACEITO. É DETERMINADA ATRAVÉS DA VERACIDADE E DA PRECISÃO 657 EXATIDÃO PROXIMIDADE DOS RESULTADOS OBTIDOS PELO MÉTODO EM ESTUDO EM RELAÇÃO AO VALOR VERDADEIRO ANVISA GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE O VALOR MEDIDO E O VALOR VERDADEIRO DO MENSURANDO VIM HABILIDADE DO INSTRUMENTO EM DAR RESPOSTAS PRÓXIMAS AS DO VALOR VERDADEIRO DO MENSURANDO EURACHEM GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE O RESULTADO DE UMA MEDIÇÃO E O VALOR VERDADEIRO DO MENSURANDO INMETRO

15 IUPAC(V/R) EXPRESSA O GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE O VALOR ACEITO COMO VERDADEIRO E O VALOR MEDIDO. GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE A MÉDIA DE UM NÚMERO INFINITO DE REPLICATAS E O VALOR VERDADEIRO VIM (V) RECUPERAÇÃO/VERACIDADE INMETRO(R) GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE O VALOR MÉDIO OBTIDO DE UMA SÉRIE DE RESULTADOS DE ENSAIOS E UM VALOR DE REFERÊNCIA ACEITÁVEL EURACHEM(R/V) PERCENTAGEM DA CONCENTRAÇÃO REAL DE UMA SUBSTÂNCIA RECUPERADA DURANTE O PROCESSO ANALÍTICO 657(R) FRAÇÃO DA QUANTIDADE TOTAL DO ANALITO PRESENTE NA AMOSTRA, QUE É OBTIDA APÓS A FINALIZAÇÃO DO PROCESSO DE EXTRAÇÃO MAPA(R)

16 EXPRESSA O GRAU DE DISPERSÃO DE UMA SÉRIE DE MEDIDAS E DEVE SER CONSIDERADA EM TRÊS NÍVEIS: REPETITIVIDADE, PRECISÃO INTERMEDIÁRIA E REPRODUTIBILIDADE ICH EXPRESSA O GRAU DE CONCORDÂNCIA DE UMA SÉRIE DE USP MEDIDAS QUANDO O PROCEDIMENTO É APLICADO REPETIDAMENTE A ALÍQUOTAS DE UMA AMOSTRA. ELA PODE SER UMA MEDIDA DA REPRODUTIBILIDADE OU DA REPETITIVIDADE PRECISÃO IUPAC EXPRESSA O GRAU DE DISPERSÃO DE UMA SÉRIE DE MEDIDAS INDEPENDENTES E REALIZADAS EM CONDIÇÕES DEFINIDAS. DEVE SER INVESTIGADA EM CONDIÇÕES DE REPETITIVIDADE E DE PRECISÃO INTRA-ENSAIO É A AVALIAÇÃO DA PROXIMIDADE DOS RESULTADOS OBTIDOS EM UMA SÉRIE DE MEDIDAS DE UMA AMOSTRAGEM MÚLTIPLA DE UMA MESMA AMOSTRA ANVISA

17 GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE RESULTADOS DE ENSAIOS INDEPENDENTES, OBTIDOS EM CONDIÇÕES ESPECÍFICAS 657 EURACHEM PRECISÃO É A AVALIAÇÃO DA DISPERSÃO DE RESULTADOS ENTRE ENSAIOS INDEPENDENTES, REPETIDOS DE UMA MESMA AMOSTRA, AMOSTRAS SEMELHANTES OU PADRÕES, EM CONDIÇÕES DEFINIDAS. AS DUAS FORMAS MAIS COMUNS DE EXPRESSÁ-LA SÃO POR MEIO DA REPETITIVIDADE E DA REPRODUTIBILIDADE MAPA DISPERSÃO DE RESULTADOS ENTRE ENSAIOS INDEPENDENTES, REPETIDOS DE UMA MESMA AMOSTRA, AMOSTRA SEMELHANTE OU PADRÕES, EM CONDIÇÕES DEFINIDAS INMETRO GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE RESULTADOS OBTIDOS POR REPLICATAS DE UMA MESMA AMOSTRA EM CONDIÇÕES ESPECIFICADAS VIM

18 REPETITIVIDADE/PRECISÃO INTRA-ENSAIO OU INTRA-CORRIDA PRECISÃO EM CONDIÇÕES DE REPETITIVIDADE, ISTO É, OBTENÇÃO DE RESULTADOS A PARTIR DE ENSAIOS INDEPENDENTES, COM O MESMO MÉTODO, COM MATERIAL DE ENSAIO IDÊNTICO, NO MESMO LABORATÓRIO, PELO MESMO OPERADOR E UTILIZANDO O MESMO EQUIPAMENTO 657 EXPRESSA A PRECISÃO SOB AS MESMAS CONDIÇÕES EXPERIMENTAIS NO MENOR INTERVALO DE TEMPO POSSÍVEL ICH USP CONCORDÂNCIA ENTRE OS RESULTADOS DENTRO DE UM CURTO PERÍODO DE TEMPO COM O MESMO ANALISTA E MESMA INSTRUMENTAÇÃO ANVISA CONDIÇÃO DE MEDIDA... QUE COMPREENDE O MESMO MÉTODO, OS MESMOS OPERADORES, O MESMO SISTEMA DE MEDIÇÃO, AS MESMAS CONDIÇÕES DE FUNCIONAMENTO, O MESMO LABORATÓRIO, E MEDIDAS EM REPLICATAS DE UMA MESMA AMOSTRA, DURANTE UM CURTO ESPAÇO DE TEMPO VIM

19 REPETITIVIDADE/PRECISÃO INTRA-ENSAIO OU INTRA-CORRIDA IUPAC VARIAÇÕES OBSERVADAS EM UMA CORRIDA MAPA GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE OS RESULTADOS DE MEDIÇÕES SUCESSIVAS DE UM MESMO MENSURANDO, EFETUADAS SOB AS MESMAS CONDIÇÕES DE MEDIÇÃO INMETRO VIM CONDIÇÃO DE MEDIDA... QUE COMPREENDE O MESMO MÉTODO, OS MESMOS OPERADORES, O MESMO SISTEMA DE MEDIÇÃO, AS MESMAS CONDIÇÕES DE FUNCIONAMENTO, O MESMO LABORATÓRIO, E MEDIDAS EM REPLICATAS DE UMA MESMA AMOSTRA, DURANTE UM CURTO ESPAÇO DE TEMPO

20 PRECISÃO INTERMEDIÁRIA/PRECISÃO INTER- ENSAIOS OU INTER- CORRIDAS/REPRODUTIBILIDADE INTRALABORATORIAL EURACHEM ICH USP EXPRESSA VARIAÇÃO NO LABORATÓRIO QUANDO DA TROCA DE DIAS, DE ANALISTAS, DE EQUIPAMENTOS, ETC VIM CONCORDÂNCIA ENTRE OS RESULTADOS DO MESMO LABORATÓRIO MAS OBTIDOS EM DIAS DIFERENTES, COM ANALISTAS DIFERENTES E/OU EQUIPAMENTOS DIFERENTES CONDIÇÕES DE MEDIDAS QUE INCLUEM O MESMO MÉTODO, O MESMO LABORATÓRIO, E REPLICATAS DE UMA MESMA AMOSTRA POR UM PERÍODO LONGO, ALÉM DE OUTRAS CONDIÇÕES DE MUDANÇAS ANVISA INMETRO VARIAÇÕES OBSERVADAS ENTRE CORRIDAS IUPAC

21 PRECISÃO INTERMEDIÁRIA/PRECISÃO INTER- ENSAIOS OU INTER- CORRIDAS/REPRODUTIBILIDADE INTRALABORATORIAL PRECISÃO OBTIDA NO MESMO LABORATÓRIO EM CONDIÇÕES PRÉ-ESTABELECIDAS ESPECÍFICAS (RELATIVAS, POR EXEMPLO, AO MÉTODO, MATERIAIS DE ENSAIO,OPERADORES, AMBIENTE) E AO LONGO DE INTERVALOS DE TEMO JUSTIFICADAMENTE LONGOS 657 MAPA PRECISÃO AVALIADA SOBRE MESMA AMOSTRA, AMOSTRAS IDÊNTICAS OU PADRÕES, UTILIZANDOO MESMO MÉTODO, MESMO LABORATÓRIO, MAS ALTERANDO ALGUMAS CONDIÇÕES, TAIS COMO: ANALISTAS EQUIPAMENTOS E CONDIÇÕES AMBIENTAIS, ENTRE OUTRAS

22 VIM CONDIÇÕES DE MEDIDAS QUE INCLUEM DIFERENTES LABORATÓRIOS, OPERADORES, SISTEMAS DE MEDIÇÃO, E REPLICATAS DE UMA MESMA AMOSTRA ANVISA A REPRODUTIBILIDADE DEVE SER AVALIADA A PARTIR DE ESTUDOS COLABORATIVOS DE ACORDO COM A NORMA ISO REPRODUTIBILIDADE/ PRECISÃO INTER- LABORATORIAL CONCORDÂNCIA ENTRE OS RESULTADOS OBTIDOS EM LABORATÓRIOS DIFERENTES COMO EM ESTUDOS COLABORATIVOS USO DE UM PROCEDIMENTO ANALÍTICO EM DIFERENTES LABORATÓRIOS, COMO EM COMPARAÇÕES INTERLABORATORIAIS USP GRAU DE CONCORDÂNCIA ENTRE OS RESULTADOS DE MEDIÇÕES DE UM MESMO MENSURANDO EFETUADAS SOB CONDIÇÕES VARIADAS DE MEDIÇÃO INMETRO

23 A REPRODUTIBILIDADE PODE SER AVALIADA A PARTIR DE RESULTADOS OBTIDOS COM O MESMO MÉTODO NAS MESMAS AMOSTRAS EM LABORATÓRIOS DIFERENTES COM OPERADORES DIFERENTES E EQUIPAMENTOS DIFERENTES EURACHEM REPRODUTIBILIDADE/ PRECISÃO INTER- LABORATORIAL VIM CONDIÇÕES DE MEDIDAS QUE INCLUEM DIERENTES LABORATÓRIOS, OPERADORES, SISTEMAS DE MEDIÇÃO, E REPLICATAS DE UMA MESMA AMOSTRA EXPRESSA A PRECISÃO ENTRE LABORATÓRIOS ICH

24 VALOR MEDIDO ATRAVÉS DE UM DETERMINADO PROCEDIMENTO PARA O QUAL A PROBABILIDADE DE DETECTAR INCORRETAMENTE UM ANALITO É β, E CORRETAMENTE É α VIM MENOR QUANTIDADE DE ANALITO NA AMOSTRA QUE PODE SER IUPAC DIFERENCIADO DO ZERO LIMITE DE DETECÇÃO USP ICH MENOR QUANTIDADE DO ANALITO PRESENTE NA AMOSTRA QUE PODE SER DETECTADO, PORÉM NÃO NECESSARIAMENTE QUANTIFICADO ANVISA INMETRO EURACHEM

25 LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO CONCENTRAÇÃO ABAIXO DA QUAL O MÉTODO NÃO ALCANÇA A PRECISÃO ACEITÁVEL IUPAC INMETRO MENOR QUANTIDADE DE ANALITO QUE PODE SER DETERMINADA COM NÍVEL ACEITÁVEL DE PRECISÃO E TENDÊNCIA EURACHEM ANVISA MENOR QUANTIDADE DE ANALITO NA AMOSTRA QUE PODE SER QUANTIFICADA COM PRECISÃO E EXATIDÃO ACEITÁVEIS ICH USP

26 ANVISA HABILIDADE DE SE OBTER ICH RESULTADOS DIRETAMENTE PROPORCIONAIS À CONCENTRAÇÃO DO ANALITO NA AMOSTRA USP LINEARIDADE CAPACIDADE DE UMA METODOLOGIA ANALÍTICA EM DEMONSTRAR QUE OS RESULTADOS OBTIDOS SÃO DIRETAMENTE PROPORCIONAIS À CONCENTRAÇÃO DO ANALITO NA AMOSTRA, DENTRO DE UM INTERVALO ESPECIFICADO MAPA INMETRO HABILLIDADE DE UM MÉTODO ANALÍTICO PRODUZIR RESULTADOS QUE SEJAM PROPORCIONAIS À CONCENTRAÇÃO DO ANALITO NA AMOSTRA, EM UMA DADA FAIXA DE CONCENTRAÇÃO, TANTO DIRETAMENTE QUANTO POR MEIO DE UMA TRANSFORMAÇÃO MATEMÁTICA BEM DEFINIDA

27 LINEARIDADE HABILILIDADE DE UM MÉTODO ANALÍTICO PRODUZIR RESULTADOS QUE SEJAM PROPORCIONAIS À CONCENTRAÇÃO DO ANALITO NA AMOSTRA, EM UMA DADA FAIXA DE CONCENTRAÇÃO, TANTO DIRETAMENTE QUANTO POR MEIO DE UMA TRANSFORMAÇÃO MATEMÁTICA BEM DEFINIDA EURACHEM EXPRESSÃO DA RELAÇÃO ENTRE OS VALORES MEDIDO E INDICADO VIM

28 INTERVALO DE CONCENTRAÇÃO DO ANALITO NO QUAL O MÉTODO É CONSIDERADO VALIDADO IUPAC É A FAIXA ENTRE OS LIMITES DE QUANTIFICAÇÃO INFERIOR E SUPERIOR DE UM MÉTODO ANALÍTICO. É ANVISA DERIVADO DO ESTUDO DE LINEARIDADE E CONFIRMADO PELA EXATIDÃO, PRECISÃO E LINEARIDADE ADEQUADOS FAIXA DE TRABALHO/INTERVALO FAIXA DE CONCENTRAÇÃO NA QUAL O ANALITO EM QUESTÃO PODE SER DETERMINADO COM PRECISÃO E TENDÊNCIA ACEITÁVEIS INMETRO EURACHEM INTERVALO ENTRE A MAIOR E A MENOR CONCENTRAÇÃO DO ANALITO NA AMOSTRA ICH INTERVALO ENTRE A MAIOR E A MENOR CONCENTRAÇÃO DO ANALITO NA AMOSTRA QUE PODE SER DETERMINADO COM PRECISÃO, EXATIDÃO E LINEARIDADE ADEQUADAS USP

29 LIMITE A PARTIR DO QUAL SE PODE CONCLUIR QUE UMA AMOSTRA É NÃO CONFORME, COM PROBABILIDADE DE ERRO DE α 657 LIMITE DE DECISÃO (CCα) CARACTERIZA A VARIAÇÃO PROVENIENTE DO RUÍDO MAPA

30 CAPACIDADE DE DETECÇÃO (CCβ) 657 TEOR MAIS BAIXO DE SUBSTÂNCIA QUE PODE SER DETECTADO, IDENTIFICADO E/OU QUANTIFICADO COM UMA PROBABILIDADE DE ERRO DE β CARACTERIZA A VARIAÇÃO PROVENIENTE DA MEDIDA MAPA

31 HABILIDADE DE UM MÉTODO ANALÍTICO NÃO SER AFETADO POR PEQUENAS E DELIBERADAS VARIAÇÕES EM SEUS FATORES INMETRO SUSCEPTIBILIDADE DE UM MÉTODO ANALÍTICO A ALTERAÇÕES DAS CONDIÇÕES EXPERIMENTAIS, AS QUAIS PODEM SER EXPRESSAS COMO UMA LISTA DE MATERIAIS DA AMOSTRA, DAS SUBSTÂNCIAS A ANALISAR, DAS CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO, AMBIENTAIS E/OU DE PREPARAÇÃO DA AMOSTRA 657 EURACHEM ROBUSTEZ MEDIDA DA CAPACIDADE DO MÉTODO EM PERMANECER INALTERADO QUANDO PEQUENAS VARIAÇÕES SÃO IMPOSTAS AS VARIÁVEIS. USP É A RESISTÊNCIA DOS RESULTADOS DO MÉTODO A PEQUENAS ALTERAÇÕES SÃO FEITAS NAS CONDIÇÕES EXPERIMENTAIS ANVISA IUPAC ICH MEDIDA DA CAPACIDADE DO MÉTODO EM RESISTIR A PEQUENAS E DELIBERADAS VARIAÇÕES DOS PARÂMETROS ANALÍTICOS

32 EXECUÇÃO DOS CRITÉRIOS DE DESEMPENHO NENHUMA NORMA/DOCUMENTO/GUIA / DIRETRIZ SE REFERE A UMA ORDEM DE EXECUÇÃO OU, PELO MENOS, DE APRESENTAÇÃO DESTES CRITÉRIOS NO ENTANTO, CADA CRITÉRIO DE DESEMPENHO TEM COMO OBJETIVO DEMONSTRAR A CAPACIDADE / ADEQUAÇÃO DE UM DETERMINADO MÉTODO EM ATENDER EM UMA EXIGÊNCIA ESPECÍFICA

33 BRUCE ET AL. (1996) PROPUSERAM QUE ESTES CRITÉRIOS FOSSEM APRESENTADOS NA SEGUINTE ORDEM 1. ESPECIFICIDADE / SELETIVIDADE 2. LINEARIDADE 3. FAIXA DE TRABALHO 4. LIMITE DE DETECÇÃO EQUIPAMENTO AMOSTRA 1. EXATIDÃO 2. LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO 1. COMPARAÇÃO INTERLABORATORIAL 2. PRECISÃO DO MÉTODO FINAIS

34 IMPLEMENTAÇÃO DOS CRITÉRIOS DE DESEMPENHO

35 ESPECIFICIDADE ICH ENSAIOS DE IDENTIFICAÇÃO O MÉTODO DEVE PODER DISCRIMINAR COMPOSTOS DE ESTRUTURAS SEMELHANTES. A DISCRIMINAÇÃO PODE SER CONFIRMADA OBTENDO-SE RESULTADOS POSITIVOS DE AMOSTRAS CONTENDO OS ANALITOS DE INTERESSE (TALVEZ ATRAVÉS DE MR) E DE RESULTADOS NEGATIVOS DE AMOSTRAS QUE NÃO CONTÉM ESTES ANALITOS O MÉTODO TAMBÉM PODE SER APLICADO A ANALITOS COM ESTRUTURAS SEMELHANTES OU RELACIONADAS AOS ANALITOS DE INTERESSE, DE FORMA A CONFIRMAR QUE UMA RESPOSTA POSITIVA NÃO VÁ SER ENCONTRADA

36 ESPECIFICIDADE ENSAIOS DE IDENTIFICAÇÃO USP ANVISA O MÉTODO DEVE PODER IDENTIFICAR O ANALITO DE INTERESSE NA PRESENÇA DE IMPUREZAS. A ESPECIFICIDADE PODE SER CONFIRMADA ATRAVÉS DA ANÁLISE DE AMOSTRAS FORTIFICADAS COM IMPUREZAS EM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES E VERIFICANDO QUE OS RESULTADOS FICARAM INALTERADOS

37 SELETIVIDADE INMETRO FAZER A ANÁLISE COM A AMOSTRA E MATERIAIS DE REFERÊNCIA PELO MÉTODO EM ESTUDO E OUTROS MÉTODOS VALIDADOS ANALISAR AMOSTRAS CONTENDO VÁRIOS INTERFERENTES SUSPEITOS NA PRESENÇA DO ANALITO DE INTERESSE

38 SELETIVIDADE MAPA A VERIFICAÇÃO DA SELETIVIDADE DEVE SER REALIZADA A PARTIR DA COMPARAÇÃO ENTRE OS SINAIS ADVINDOS DO PROCESSAMENTO DA MATRIZ, DO EXTRATO DA MATRIZ FORTIFICADO E DO ANALITO ANALISAR RÉPLICAS DO EXTRATO DAS AMOSTRAS DA MATRIZ, FORTIFICADO EM 5 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO ANALISAR RÉPLICAS DAS AMOSTRAS DO ANALITO EM SOLUÇÃO, EM 5 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO COMPARAR OS RESULTADOS POR NÍVEL DE CONCENTRAÇÃO

39 ESPECIFICIDADE 657 SELECIONAR UMA GAMA DE COMPOSTOS QUIMICAMENTE APARENTADOS (METABÓLITOS, DERIVADOS, ETC) OU OUTRAS DE SUSCEPTÍVEIS DE SEREM ENCONTRADOS COM O COMPOSTO EM CAUSA E QUE POSSAM ESTAR PRESENTES NAS AMOSTRAS ANALISAR UM NÚMERO ADEQUADO DE AMOSTRAS EM BRANCO (n 20) E VERIFICAR AS POSSÍVIES INTERFERÊNCIAS NA REGIÃO EM QUE SE PREVÊ A ELUIÇÃO DA SUBSTÂNCIA A ANALISAR FORTIFICAR AMOSTRAS EM BRANCO REPRESENTATIVAS NUMA CONCENTRAÇÃO RELEVANTE COM SUBSTÂNCIAS QUE POSSAM INTERFERIR NA IDENTIFICAÇÃO E/OU QUANTIFICAÇÃO DA SUBSTÂNCIA A ANALISAR

40 SELETIVIDADE IUPAC EM MUITOS TIPOS DE ANÁLISE A SELETIVIDADE É ESSENCIALMENTE UMA AVALIAÇÃO QUALITATIVA. NO ENTANTO, HÁ MEDIDAS QUANTITATIVAS QUE PODEM SER REALIZADAS. b ANbINT O ÍNDICE DE SELETIVIDADE ( ) É UMA POSSÍVEL FORMA DE QUANTIFICAR A SELETIVIDADE. b AN REPRESENTA A SENSIBILIDADE DO MÉTODO (INCLINAÇÃO DA CURVA DE CALIBRAÇÃO) E b INT A INCLINAÇÃO DA CURVA GERADA COM O BRANCO DA MATRIZ FORTIFICADO COM O INTERFERENTE

41 EURACHEM ESPECIFICIDADE / SELETIVIDADE É INVESTIGADA ESTUDANDO A HABILIDADE DO MÉTODO EM MEDIR O ANALITO DE INTERESSE EM ALÍQUOTAS NAS QUAIS TENHAM SIDO INTRODUZIDOS DETERMINADOS INTERFERENTES PODE AVALIADA TAMBÉM ESTUDANDO SUA HABILIDADE EM MEDIR O ANALITO DE INTERESSE EM RELAÇÃO A OUTRO MÉTODO

42 FAIXA DE TRABALHO ICH É NORMALMENTE DEFINIDA ATRAVÉS DO ESTUDO DA LINEARIDADE E DEPENDE DA APLICAÇÃO DO MÉTODO USP ANVISA É ESTABELECIDA PELA CONFIRMAÇÃO DE QUE O PROCEDIMENTO ANALÍTICO LEVA A RESULTADOS COM LINEARIDADE, EXATIDÃO E PRECISÃO ACEITÁVEIS AO LONGO DA FAIXA SELECIONADA

43 INMETRO FAIXA DE TRABALHO E FAIXA LINEAR DEVE COBRIR A FAIXA DE APLICAÇÃO PARA A QUAL O ENSAIO VAI SER USADO E A CONCENTRAÇÃO MAIS ESPERADA DA AMOSTRA DEVE, SEMPRE QUE POSSÍVEL, SE SITUAR NO CENTRO DA FAIXA DE TRABALHO

44 FAIXA DE TRABALHO IUPAC A FAIXA DE TRABALHO PODE SER UMA PARTE DA FAIXA PARA A QUAL A LINEARIDADE FOI VERIFICADA

45 EURACHEM FAIXA DE TRABALHO E LINEARIDADE MÍNIMO DE 6 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO A RELAÇÃO RESPOSTA-CONCENTRAÇÃO NÃO TEM QUE SER PERFEITAMENTE LINEAR, PORÉM, DEVE SER REPRODUTÍVEL COM O TEMPO

46 LINEARIDADE USP ICH ANVISA UMA RELAÇÃO LINEAR DEVE SER AVALIADA AO LONGO DA FAIXA DE TRABALHO E DEMONSTRADA ATRAVÉS DE DILUIÇÕES DE UMA SOLUÇÃO MÃE PREPARADA COM O ANALITO DE INTERESSE OU DE SOLUÇÕES DESTE ANALITO EM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES. É RECOMENDADO O USO DE, NO MÍNIMO, 5 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO

47 INMETRO LINEARIDADE MÍNIMO DE 5 NÍVIES DE CONCENTRAÇÃO NA CURVA ANALÍTICA COM UM NÚMERO DE REPLICATAS POR NÍVEL DE CONCENTRAÇÃO O MAIS PRÓXIMO POSSÍVEL DAQUELE EMPREGADO NA ROTINA DO LABORATÓRIO

48 LINEARIDADE MAPA A CURVA DE CALIBRAÇÃO/RESPOSTA DEVE SER OBTIDA A PARTIR DE 5 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO, EQUIDISTANTEMENTE DISTRIBUÍDOS, COM PELO MENOS, 6 RÉPLICAS POR NÍVEL TRÊS TIPOS DE CURVA DE CALIBRAÇÃO/RESPOSTA DEVEM SER ELABORADOS: * PADRÕES DE CALIBRAÇÃO EM SOLUÇÃO * MATRIZ BRANCA FORTIFICADA COM PADRÕES DE CALIBRAÇÃO * EXTRATO DA MATRIZ BRANCA FORTIFICADO COM OS PADRÕES DE CALIBRAÇÃO

49 LINEARIDADE MAPA AS REPLICATAS DE CADA NÍVEL DE CONCENTRAÇÃO DEVEM SER INDEPENDENTES OU REPETIÇÕES GENUÍNAS, E NÃO SOMENTE REPETIÇÕES DAS LEITURAS AS MEDIDAS DEVEM SER FEITAS EM ORDEM ALEATÓRIA, ADOTANDO-SE OS DEVIDOS CUIDADOS PARA EVITAR CONTAMINAÇÃO CRUZADA AS CURVAS DE CALIBRAÇÃO NÃO DEVEM SER FORÇADAS A PASSAR PELA ORIGEM AVALIAR A HOMOCEDASTICIDADE

50 CURVAS DE CALIBRAÇÃO 657 A CURVA DE CALIBRAÇÃO/RESPOSTA DEVE SER OBTIDA A PARTIR DE 5 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO, INCLUINDO O ZERO

51 CALIBRAÇÃO E LINEARIDADE IUPAC A CURVA DEVE TER PELO MENOS 6 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO OS NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO DEVEM ESTAR IGUALMENTE ESPAÇADOSO INTERVALO DE INTERESSE O INTERVALO DE CONCENTRAÇÃO DEVE SER ENTRE 0 E 150% OU 50 E 150% DA CONCENTRAÇÃO MAIS PROVÁVEL DE SER ENCONTRADA AS ANÁLISE PARA CADA NÍVEL DE CONCENTRAÇÃO DEVEM SER REALIZADAS, PELO MENOS, EM DUPLICATA, PREFERENCIALMENTE EM TRIPLICATA OU MAIS, EM ORDEM ALEATÓRIA

52 EXATIDÃO ANVISA USP ICH DEVE SER ESTABELECIDA AO LONGO DA FAIXA DE TRABALHO, USANDO UM MÍNIMO DE 9 DETERMINAÇÕES DE TAL FORMA QUE SEJAM AVALIADOS 3 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO DIFERENTES A USP AINDA INDICA QUE PARA DEMONSTRAR A EXATIDÃO, UM PADRÃO DE REFERÊNCIA PODE SER UTILIZADO

53 INMETRO RECUPERAÇÃO / TENDÊNCIA OS PROCESSOS UTILIZADOS PARA AVALIAR A TENDÊNCIA DE UM MÉTODO SÃO, ENTRE OUTROS: USO DE MATERIAIS DE REFERÊNCIA CERTIFICADOS, PARTICIPAÇÃO EM COMPARAÇÕES INTERLABORATORIAIS E REALIZAÇÃO DE ENSAIOS DE RECUPERAÇÃO

54 MAPA RECUPERAÇÃO ANALISAR AS 6 RÉPLICAS DA MATRIZ BRANCA FORTIFICADA COMOS PADRÕES DE CALIBRAÇÃO EM 5 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO CALCULAR A CONCENTRAÇÃO MÉDIA E O CV EM CADA EXATIDÃO DEVE SER FEITA ATRAVÉS DE ENSAIOS DE RECUPERAÇÃO CASO NÃO HAJA MRC, A MATRIZ BRANCA FORTIFICADA DEVE SER UTILIZADA

55 VERACIDADE 657 CALCULAR A CONCENTRAÇÃO MÉDIA E O CV DEVE SER FEITA ATRAVÉS DE MRC. NA FALTA DESTE, EM VEZ DA VERACIDADE, A RECUPERAÇÃO PODE SER DETERMINADA RECUPERAÇÃO SELECIONAR 18 ALÍQUOTAS DE UM MATERIAL EM BRANCO E FORTIFICAR 3 GRUPOS EM 6 ALÍQUOTAS NAS CONCENTRAÇÕES.. CALCULAR A CONCENTRAÇÃO PRESENTE EM CADA AMOSTRA, ASSIM COMO A CONCENTRAÇÃO MÉDIA E O CV PARA CADA NÍVEL DE CONCENTRAÇÃO

56 EXATIDÃO/RECUPERAÇÃO IUPAC A MÉDIA DE UMA SÉRIE DE ANÁLISES COMPLETAS REALIZADAS COM MATERIAL DE REFERÊNCIA EM DIFERENTES CORRIDAS DEVEM SER AVALIADAS CASO NÃO EXITA UM MRC, PODE SER UTILIZADO UM MATERIAL BEM CARACTERIZADO COMO REFERÊNCIA. OUTRQA ALTERNATIVA É USAR MATRIZES FORTIFICADAS UM MÉTODO REFERÊNCIA TAMBÉM PODE SER USADO PARA AVALIAR A EXATIDÃO DO MÉTODO QUE ESTÁ SENDO VALIDADO

57 EURACHEM EXATIDÃO É ESTUDADA EM 2 COMPONENTES; RECUPERAÇÃO E PRECISÃO RECUPERAÇÃO 6 REPLICATAS DE MATRIZES OU AMOSTRAS FORTIFICADAS

58 REPETITIVIDADE OU PRECISÃO INTRA-CORRIDA ICH ANVISA DEVE SER ESTABELECIDA AO LONGO DA FAIXA DE TRABALHO, USANDO UM MÍNIMO DE 9 DETERMINAÇÕES DE TAL FORMA QUE SEJAM AVALIADOS 3 NÍVEIS DE CONCENTRAÇÃO DIFERENTES

59 USP REPETITIVIDADE PRECISÃO INTERMEDIÁRIA REPRODUTIBILIDADE DEVEM SER AVALIADAS ATRAVÉS DE UM NÚMERO DE REPLICATAS DE UMA AMOSTRA HOMOGÊNEA

60 INMETRO REPETITIVIDADE PODE SER DETERMINADA POR MEIO DA ANÁLISE DE PADRÕES, MATERIAL DE REFERÊNCIA OU ADIÇÃO DO ANALITO A BRANCO DE AMOSTRA, EM VÁRIAS CONCENTRAÇÕES NA FAIXA DE TRABALHO

61 REPETITIVIDADE 657 MAPA PREPARAR E ANALISAR UM CONJUNTO DE AMOSTRAS COM MATRIZES IDÊNTICAS, FORTIFICADAS COM SUBSTÂNCIAS A ANALISAR DE MODO A OBTER CONCENTRAÇÕES EQUIVALENTES AS SEGUINTES... PARA CADA NÍVEL DE CONCENTRAÇÃO, A ANÁLISE DEVE SER REALIZADA EM, PELO MENOS, 6 RÉPLICAS CALCULAR A CONCENTRAÇÃO MÉDIA, O DESVI PADRÃO E O CV

62 IUPAC REPETITIVIDADE AS EXPERIÊNCIAS DESTE CRITÉRIO DEVEM PODER DEMONSTRAR QUE NÃO HÁ MUDANÇA NA PRECISÃO COM A MUDANÇA DE CONCENTRAÇÃO DO ANALITO A FORMA MAIS ECONÔMICA DE AVALIAR A REPETITIVIDADE É A AVALIAÇÃO NOS LIMITES INFERIOR E SUPERIOR (OU PRÓXIMO A ELES) DA FAIXA DE TRABALHO A ANÁLISES DEVEM SER FEITAS EM DUPLICATA VERDADEIRAS

63 EURACHEM REPETITIVIDADE PODE SER DETERMINADA POR MEIO DE MATERIAL DE REFERÊNCIA OU ADIÇÃO DO ANALITO A BRANCO DE AMOSTRA, EM VÁRIAS CONCENTRAÇÕES NA FAIXA DE TRABALHO REALIZAR 10 REPLICATAS PARA CADA NÍVEL DE CONCENTRAÇÃO CALCULAR A MÉDIA, O DESVIO PADRÃO E O LIMITE DE REPETITIVIDADE

64 ICH PRECISÃO INTERMEDIÁRIA NORMALMENTE É AVALIADA SOBRE AS POSSÍVEIS FONTES DE VARIABILIDADE DO MÉTODO COMO POR EXEMPLO, EM DIAS DIFERENTES, COM ANALISTAS DIFERENTES E EQUIPAMENTOS DIFERENTES

65 ANVISA PRECISÃO INTERMEDIÁRIA OU PRECISÃO INTER-CORRIDAS OBTIDA EM DIAS DIFERENTES, COM ANALISTAS DIFERENTES E EQUIPAMENTOS DIFERENTES RECOMENDA-SE UM MÍNIMO DE 2 DIAS DIFERENTES COM ANALISTAS DIFERENTES

66 INMETRO PRECISÃO INTERMEDIÁRIA OBTIDA EM DIAS DIFERENTES, COM ANALISTAS DIFERENTES E EQUIPAMENTOS DIFERENTES

67 REPRODUTIBILIDADE INTRALABORATORIAL MAPA 657 PREPARAR E ANALISAR UM CONJUNTO DE AMOSTRAS COM MATRIZES IDÊNTICAS, FORTIFICADAS COM SUBSTÂNCIAS A ANALISAR DE MODO A OBTER CONCENTRAÇÕES EQUIVALENTES AS SEGUINTES... PARA CADA NÍVEL DE CONCENTRAÇÃO, A ANÁLISE DEVE SER REALIZADA EM, PELO MENOS, 6 RÉPLICAS

68 REPRODUTIBILIDADE INTRALABORATORIAL MAPA 657 REPETIR ESTES PASSOS PELO MENOS MAIS 2 VEZES, COM OPERADORES DIFERENTES, INSTRUMENTOS DIFERENTES, LOTES DIFERENTES DE REAGENTES, SOLVENTES, TEMPERATURA AMBIENTE DIFERENTE, ENTRE OUTRAS CALCULAR A CONCENTRAÇÃO MÉDIA, O DESVIO PADRÃO E O CV

69 IUPAC PRECISÃO ENTRE CORRIDAS A VARIAÇÃO DAS CONDIÇÕES ENTRE CORRIDAS DEVE REPRESENTAR A ROTINA DO LABORATÓRIO A PRECISÃO PODE LEVAR AINDA EM CONSIDERAÇÃO A VARIAÇÃO ENTRE OPERADORES, DIAS E EQUIPAMENTOS

70 EURACHEM PRECISÃO INTERMEDIÁRIA - INTRALABORATORIAL OBTIDA EM DIAS DIFERENTES, COM ANALISTAS DIFERENTES E EQUIPAMENTOS DIFERENTES REALIZAR 10 REPLICATAS CALCULAR A MÉDIA, O DESVIO PADRÃO E O LIMITE DE REPRODUTIBILIDADE

71 REPRODUTIBILIDADE OU PRECISÃO INTER-LABORATORIAL ICH 657 INMETRO DEVE SER AVALIADA ATRAVÉS DE ENSAIOS DE PROFICIÊNCIA/COMPARAÇÕES INTERLABORATORIAIS EURACHEM ANVISA

72 LIMITE DE DETECÇÃO ANVISA USP VÁRIAS ABORDAGENS PODEM SER EMPREGADAS. POR EXEMPLO, AVALIAÇÃO VISUAL, RELAÇÃO SINAL-RUÍDO OU NA CURVA ANALÍTICA ICH

73 INMETRO LIMITE DE DETECÇÃO VÁRIAS ABORDAGENS PODEM SER EMPREGADAS DUAS FORMAS DE CÁLCULO SÃO PROPOSTAS

74 LIMITE DE DETECÇÃO IUPAC HÁ VÁRIOS MÉTODOS PARA A DETERMINAÇÃO DO LIMITE DE DETECÇÃO É RECOMENDADO QUE SEJAM REALZADAS ANÁLISES DE 6 AMOSTRAS DE BRANCO DE MATRIZ E O LIMITE DE DECISÃO SERÁ 3 VEZES O DESVIO PADRÃO DESTAS ANÁLISES

75 EURACHEM LIMITE DE DETECÇÃO ANÁLISE DE 10 BRANCOS DE MATRIZ O LD É DETERMINADO COMO SENDO O VALOR MÉDIO DOS RESULTADOS DOS BRANCOS, ACRESCIDO DE 3 VEZES O DESVIO PADRÃO DAS ANÁLISES DOS BRANCOS OUTROS MÉTODOS, COMO OS SUGERIDOS PELA IUPAC, PODEM SER MAIS ADEQUADOS EM ALGUNS CASOS

76 LIMITE DE DECISÃO (CCα) 657 MAPA OS CÁLCULOS DEVEM SER REALIZADOS, PREFERENCIALMENTE, UTILIZANDO OS PROCEDIMENTOS DA CURVA DE CALIBRAÇÃO MATRIZADA, DE ACORDO COM A SÉRIE DE NORMAS ISO O LIMITE DE DECISÃO TAMBÉM PODE SER CALCULADA A PARTIR DE, PELO MENOS, 20 MATERIAIS EM BRANCO POR MATRIZ

77 ICH LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO USP VÁRIAS ABORDAGENS PODEM SER EMPREGADAS. POR EXEMPLO, AVALIAÇÃO VISUAL, RELAÇÃO SINAL-RUÍDO OU NA CURVA ANALÍTICA

78 LIMITE DE QUANTIFICAÇÃO OU LIMITE DE DETERMINAÇÃO INMETRO EURACHEM VÁRIAS ABORDAGENS PODEM SER EMPREGADAS POR EXEMPLO,VISUALMENTE OU 5, 6 OU 10 VEZES O DESVIO PADRÃO DO BRANCO DA AMOSTRA

79 MAPA LIMITE DE DETERMINAÇÃO (CCβ) 657 OS CÁLCULOS DEVEM SER REALIZADOS, PREFERENCIALMENTE, UTILIZANDO OS PROCEDIMENTOS DA CURVA DE CALIBRAÇÃO MATRIZADA, DE ACORDO COM A SÉRIE DE NORMAS ISO O LIMITE DE DETERMINAÇÃO É DETERMINADO A PARTIR DO LIMITE DE DECISÃO

80 ROBUSTEZ ICH USP EURACHEM ANVISA DEVE SER AVALIADA DURANTE A ETAPA DE DESENVOLVIMENTO DO MÉTODO E DEVE MOSTRAR A CONFIABILIDADE DO RESULTADO DAS ANÁLISES EM RELAÇÃO A MUDANÇAS DELIBERADAMENTE CAUSADAS NAS CONDIÇOES DAS VARIÁVEIS DO MÉTODO

81 INMETRO ROBUSTEZ PARA AVALIAR A ROBUSTEZ DE UM MÉTODO PODE-SE RECORRER AO TESTE DE YOUDEN

82 ROBUSTEZ IUPAC DEVEM SER AVALIADOS TODOS OS ASPECTOS DO MÉTODO QUE SÃO PROVÁVEIS DE INFLUENCIAR SEUS RESULTADOS A ROBUSTEZ É TESTADA PELA INTRODUÇÃO DE PEQUENAS MS DELIBERADAS MODIFICAÇÕES NO MÉTODO É SUGERIDO O USO DE UM PLANEJAMENTO FATORIAL FRACIONÁRIO PARA ESTE FIM ALGUMAS VARIAÇÕES POSSÍVEIS SÃO: MUDANÇAS DE EQUIPAMENTOS, OPERADORES, FORNECEDORES DE REAGENTES, CONCENTRAÇÃO DE REAGENTES, ph DA SOLUÇÃO, TEMPERATURA DA REAÇÃO, TEMPO DE REAÇÃO

83 ROBUSTEZ / APLICABILIDADE PEQUENAS ALTERAÇÕES 657 ESTES ESTUDOS UTILIZAM A INTRODUÇÃO, DELIBERADA PELO PRÓPRIO LABORATÓRIO, DE PEQUENAS VARIAÇÕES RAZOÁVEIS E A OBSERVAÇÃO DE SUAS CONSEQÜÊNCIAS DEVEM SER EFETUADOS ESTUDOS PRÉVIOS PARA A SELEÇÃO DE FATORES DO PRÉ-TRATAMENTO, DA LIMPEZA E DA ANÁLISE DA AMOSTRA, SUSCEPTÍVEIS DE INFLUENCIAREM OS RESULTADOS DA MEDIÇÃO. ESTES FATORES PODEM INCLUIR O ANALISTA, A FONTE, A IDADE DOS REAGENTES, SOLVENTES, PADRÕES E EXTRATOS DE AMOSTRA, A TAXA DE AQUECIMENTO, TEMPERATURA, ph, ENTRE OUTROS

84 ROBUSTEZ - GRANDES ALTERAÇÕES 657 O MÉTODO ANALÍTICO DEVE SER TESTADO EM DIFERENTES CONDIÇÕES EXPERIMENTAIS QUE INCLUEM, POR EXEMPLO, ESPÉCIES DIFERENTES, MATRIZES DIFERENTES OU CONDIÇÕES DE AMOSTRAGEM DIFERENTES A IMPORTÂNCIA DESTAS ALTERAÇÕES PODE SER AVALIADA, POR EXEMPLO, UTILIZANDO A ABORDAGEM DE YOUDEN

85 ESTABILIDADE MAPA DEVEM SER AVALIADAS A ESTABILIDADE: 1. DO ANALITO NA MATRIZ BIOLÓGICA ESTABILIDADE DE LONGA DURAÇÃO AS AMOSTRAS DEVEM SER ANALISADAS EM TRIPLICATAS, EM DUAS CONCENTRAÇÕES COMPARAR OS RESULTADOS COM AQUELES OBTIDOS DA ANÁLISE DAS AMOSTRAS RECÉM PREPARADAS OS INTERVALOS DE TEMPO ENTRE AS AMOSTRAS DEVEM SER EQUIDISTANTES

86 ESTABILIDADE MAPA APÓS CICLOS DE CONGELAMENTO E DESCONGELAMENTO AS AMOSTRAS DEVEM SER MANTIDAS CONGELADAS POR 24h E ENTÃO SUBMETIDAS AO DESCONGELAMENTO À TEMPERATURA AMBIENTE RECONGELAR AS AMOSTRAS E DESCONGELÁ-LAS EM OUTRAS 24h. REPETIR O PROCEDIMENTO POR 3 CICLOS, QUANTIFICANDO-SE O ANALITO APÓS O TERCEIRO CICLO AS AMOSTRAS DEVEM SER ANALISADAS EM TRIPLICATAS, EM DUAS CONCENTRAÇÕES COMPARAR OS RESULTADOS COM AQUELES OBTIDOS DA ANÁLISE DAS AMOSTRAS RECÉM PREPARADAS

87 ESTABILIDADE MAPA 2. DO PÓS-PROCESSAMENTO DEVE SER ANALISADA SEMPRE QUE O EXTRATO NÃO FOR ANALISADO IMEDIATAMENTE AS AMOSTRAS DEVEM SER ANALISADAS EM TRIPLICATAS, EM DUAS CONCENTRAÇÕES COMPARAR OS RESULTADOS COM AQUELES OBTIDOS DA ANÁLISE IMEDIATA DOS EXTRATOS RECÉM OBTIDOS OS INTERVALOS DE TEMPO ENTRE AS AMOSTRAS DEVEM SER EQUIDISTANTES

88 ESTABILIDADE MAPA 3. DAS SOLUÇÕES PADRÃO DEVE COMEÇAR A SER ESTABELECIDA À TEMPERATURA AMBIENTE DO LABORATÓRIO, APÓS 6h DEPOIS DO PREPARO AS AMOSTRAS DEVEM SER ANALISADAS EM TRIPLICATAS, EM DUAS CONCENTRAÇÕES

89 ESTABILIDADE 657 DEVEM SER AVALIADAS A ESTABILIDADE: 1. DA SUBSTÂNCIA A ANALISAR EM SOLUÇÃO PREPARAR UMA SOLUÇÃO MÃE DA SUBSTÂNCIA A ANALISAR E DILUIR DE MODO A PREPARAR ALÍQUOTAS SUFICIENTES DE CADA CONCENTRAÇÃO SELECIONADA REALIZAR AS ANÁLISES

90 ESTABILIDADE DA SUBSTÂNCIA A ANALISAR NA MATRIZ DEVEM SER UTILIZADOS, PREFERENCIALMENTE, AMOSTRAS REAIS ANALISAR AMOSTRAS REAIS APÓS 1, 2, 4 E 20 SEMANAS EM AMOSTRAS DE BRANCO FORTIFICADAS PODEM SUBSTITUIR S AMOSTRAS REAIS, CASO ESTAS NÃO ESTEJAM DISPONÍVEIS

91 CÁLCULOS E TESTES ESTATÍSTICOS

92 DE UMA FORMA GERAL AS NORMAS, GUIAS E DIRETRIZES NÃO FORNECEM MUITA INFORMAÇÃO SOBRE QUAIS E COMO APLICAR TESTES ESTATÍSTICOS PARA OS DIVERSOS CRITÉRIOS DE DESEMPENHO EXCETO O DOCUMENTO DO MAPA QUE DESCREVE EM DETALHES O QUE E COMO FAZER OS CÁLCULOS E IMPLEMENTAR OS TESTES ESTATÍSTICOS

93 QUE NORMA/ GUIA/ DIRETRIZ SEGUIR????

94 PARA SELECIONAR A FORMA COMO A VALIDAÇÃO DEVERÁ SER EXECUTADA, É NECESSÁRIO VERIFICAR SE ALGUMA NORMA/DIRETRIZ OU GUIA DEVE SER SEGUIDO EM CASO AFIRMATIVO, SEGUIR AS ORIENTAÇÕES DO MESMO CASO CONTRÁRIO, SEGUIR AS RECOMENDAÇÕES DE UM DOCUMENTO REFERÊNCIA, COMO OS CITADOS NESTA APRESENTAÇÃO

95 O GUIA PARA A QUALIDADE EM QUÍMICA ANALÍTICA DA ANVISA COMENTA:... NÃO EXISTE UM ACORDO UNÂNIME SOBRE A INTERPRETAÇÃO DE ALGUNS DOS TERMOS NEM SOBRE AS CONVENÇÕES USADAS NA SUA DETERMINAÇÃO. ASSIM, AO MENCIONAR DADOS DE VALIDAÇÃO, É RECOMENDÁVEL MENCIONAR QUAISQUER CONVENÇÕES ADOTADAS.

96 ABNT NBR ISO/IEC : 2005 VALIDAÇÃO DE MÉTODO ( ) NOTA 3 A VALIDAÇÃO É UM EQUILÍBRIO ENTRE CUSTOS, RISCOS E POSSIBILIDADES TÉCNICAS. BOM SENSO

97 REFERÊNCIAS 1. SWARTZ, M.E.; KULL, I.; CHROATOGRAPHY ONLINE.COM; THE WEBSITE OF LC/GC NORTH AMERICA; VALIDATION, QUALIFICATION OR VERIFICATION?; OUT/ INTERNATIONAL CONFERENCE ON HARMONISATION OF TECHNICAL REQUIREMENTS FOR REGISTRATION OF PHAMACEUTICALS FOR HUMAN USE (ICH) : 2005 VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES: TEXT AND METHODOLOGY - Q2(R1) 3. NORMA NBR ISSO 9000: SISTEMAS DE GESTÃO DA QUALIDADE FUNDAMENTOS E VOCABULÁRIO 4. U.S. PHARCOPOEIA (USP) 32 : 2008 VALIDAÇÃO CAPÍTULO 1225

98 5. INTERNATIONAL UNION OF PURE AND APPLIED CHEMISTRY (IUPAC) : 2002 HARMONIZED GUIDELINES FOR SINGLE LABORATORY VALIDATION OF METHODS OF ANALYSIS 6. DECISÃO DA COMISSÃO DIRETIVA 96/23/CE : 2002 (657) DESEMPENHO DE MÉTODOS ANALÍTICOS E INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS 7. INSTITUTO NACIONAL DE METROLOGIA, NORMALIZAÇÃO E QUALIDADE INDUSTRIAL (INMETRO) ORIENTAÇÃO SOBRE VALIDAÇÃO DE MÉTODOS ANALÍTICOS DOQ-GCRE-008 : GUIA PARA VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE ANALÍTICOS E CONTROLE DE QUALIDADE INTERNA DAS ANÁLISES DE MONITORAMENTO DO PLANO NACIONAL DE RESÍDUOS E CONTAMINANTES PNCRC ANIMAL : 2008 MINISTÉRIO DA AGRICULTURA, PECUÁRIA E ABASTECIMENTO (MAPA)

99 10. VIM : 2008 VOCABULÁRIO INTERNACIONAL DE METROLOGIA 11. ISO/IEC : 2005 VOCABULÁRIO INTERNACIONAL DE METROLOGIA 12. PRACTICAL METHOD VALIDATION: VALIDATION SUFFICIENT FOR AN ANAYSIS METHOD, P. Bruce et al., MIKROCHIMICA ACTA, 128(1998) GUIA PARA A QUALIDADE EM QUÍMICA ANALÍTICA. UMA ASSISTÊNCIA À HABILITAÇÃO. SÉRIES TEMÁTICAS 1 LABORATÓRIO - ANVISA: 2005