PROJETO DE PESQUISA. Análise histotecnológica de produtos bioativos em célulastronco, tumorais e parasitas in vitro

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1 PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM PATOLOGIA Centro de Ciências da Saúde - UFPE Av. Prof. Moraes Rego Cidade Universitária - CEP: Recife PE Prédio da Pós-graduação do Centro de Ciências da Saúde (CCS) - térreo Fone/Fax: (81) PROJETO DE PESQUISA Análise histotecnológica de produtos bioativos em célulastronco, tumorais e parasitas in vitro LINHA DE PESQUISA Aspectos biotecnológicos e microbiológicos aplicados a Patologia Coordenadora: PALOMA LYS DE MEDEIROS Professora do Departamento de Histologia e Embriologia - Centro de Ciências Biológicas - UFPE Recife, 2012

2 METAS Viabilizar o desenvolvimento de projetos de pesquisa na área de cultura de células e novas biotecnologias, em consonância com as linhas de pesquisa do Programa de Pós-graduação em Patologia (POSPAT); Tutorar estudantes de mestrado do POSPAT, bem como alunos das iniciações científica (Pibic) e tecnológica (Pibiti), ligados aos projetos de pesquisa do programa; Caracterizar os aspectos morfológicos de células-tronco mesenquimais (CTMs), células cancerígenas e parasitos in vitro sob a ação de produtos bioativos através de marcações específicas pré- estabelecidas para cada condição de cultura em particular; Investigar as ações anticancerígenas e leishmanicida de produtos naturais, sintéticos (novos ou já comercializados) e hormonais, em modelos experimentais in vitro; Estudar amplamente a viabilidade de novos suportes (biomateriais) como arcabouços tridimensionais no cultivo de células-tronco, no intuito de melhor compreendermos os fatores que possam influenciar na sua biodegradação, bioreabsorção e na forma de como eles podem interagir com essas células (biocompatibilidade); Sedimentar o conhecimento da histotecnologia, a partir de novos processamentos histológicos e o estudo microscópico de amostras obtidas das culturas ou mesmo de biomateriais utilizados nas mesmas. MODELOS DE EXPERIMENTAÇÂO NOVOS SUPORTES PARA O CULTIVO DE CÈLULAS-TRONCO. ESTUDO DAS AÇÕES ANTICANCERÍGENAS E LEISHMANICIDA DE PRODUTOS SINTÉTICOS, NATURAIS OU HORMONAIS IN VITRO. INFRAESTRUTURA Os projetos oriundos desta proposta serão desenvolvidos nas dependências do Laboratório de Cultura de Tecidos situado no Departamento de Histologia e Embriologia-CCB/UFPE; no Laboratório de Histotecnologia do POSPAT, pertencente ao Programa de pós-graduação em Patologia do CCS, e alguns poderão ter a 2

3 parceria com o Setor de Microscopia Eletrônica do Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami (LIKA)/UFPE. METODOLOGIAS PRODUTOS: Biomateriais a serem utilizados Gel, membranas e esponjas de biopolímero de cana-de-açúcar serão cedidos pelo grupo de pesquisa Biopolímeros de Cana-de-Açúcar, coordenado pelo Prof. Dr. José Lamartine de Andrade Aguiar do Programa de Pós-graduação em Cirurgia do Hospital das Clínicas-CCS/UFPE. Extratos de plantas ou substâncias puras com potencias atividades anticancerígena e leishmanicida Os produtos em questão serão cedidos pelo Prof. Dr. Luiz Lúcio Soares da Silva e também através de uma colaboração (convênio) em andamento com pesquisadores do LTF (Laboratório de Tecnologia Farmacêutica)-UFPB. CASUÍSTICA E MANUSEIO DOS CORDÕES UMBILICAIS: Coleta de material Cordões umbilicais serão obtidos de parturientes (com 36 a 40 semanas de idade gestacional), do setor de Obstetricia do Hospital das Clínicas-UFPE; após a assinatura de um termo de doação de Consentimento Livre e Esclarecido, de acordo com aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa envolvendo Seres Humanos do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal de Pernambuco CEP/CCS/UFPE. Isolamento e cultura de células Cada mestrando ou iniciante científico envolvido na pesquisa deverá estar apto a realizar o isolamento das células e realizar a manutenção das culturas para desenvolvimento dos testes de viabilidade, citotoxicidade, biocompatibilidade e diferenciação. Estudos de diferenciação celular 3

4 As culturas estudadas serão avaliadas quanto à capacidade de diferenciação das células e biocompatibilidade com os diferentes materiais utilizados mediante protocolos estabelecidos do Laboratório de Cultura de Tecidos. Imunofenotipagem das células-tronco mesenquimais A confirmação da linhagem mesenquimal será realizada através da citometria de fluxo (FACScalibur BD ), em colaboração com a Prof a. Dr a. Márcia Bezerra da Silva do Dept o de Biofísica/UFPE. AVALIAÇÃO DAS CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DAS CÉLULAS As culturas de células serão acompanhadas semanalmente através de sistema de vídeo-microscopia (LEICA) com o auxílio de microscópio de contraste de fase para verificação das características morfológicas. A evolução da morfologia será semanalmente registrada através das capturas de imagem, no intuito de se comparar os aspectos dessas células desde o isolamento até as sucessivas passagens in vitro, levando-se em consideração os tipos de suportes utilizados no cultivo das mesmas (gel, membranas ou esponjas de polímero de cana-de-açúcar). A microscopia eletrônica será realizada em função das peculiaridades de cada cultura: a) células-tronco cultivadas com os biomateriais e b) células cancerígenas e parasitos (Leishmanias) sob efeito de produtos naturais, sintéticos ou hormonais. A Microscopia Eletrônica proceder-se-á conforme protocolos do Setor de Microscopia Eletrônica do LIKA, sob a coordenação dos pesquisadores: Dr. Luiz Carlos Alves e Dr. Fábio André Brayner dos Santos. CRITÉRIOS ESSENCIAIS AO DESENVOLVIMENTO DO PROJETO Para o desenvolvimento deste plano trabalho, os pesquisadores deverão ter experiência na área de conhecimento envolvendo cultura de células, tecidos e parasitos. Os pós-graduandos envolvidos na pesquisa em questão deverão ser treinados previamente em função das novas tecnologias. Além disso, faz-se necessário para formação do futuro pesquisador o conhecimento dirigido às técnicas de processamento e os diferentes métodos de coloração, os quais poderão ser obtidos com a realização da disciplina intitulada: Métodos de colorações especiais em histotecnologia oferecida pelo Programa de Pós-graduação em Patologia. Os iniciantes científicos e os pós-graduandos poderão ter em seu Curriculum o curso de 4

5 extensão oferecido anualmente intitulado: IV Curso de Introdução ao cultivo de células-tronco e cancerígenas, oferecido pelo Dept o. de Histologia e Embriologia- CCB/UFPE. Bioética Todos os projetos a serem desenvolvidos pelo grupo de pesquisadores envolvidos neste projeto cumprirão as normas vigentes no que se refere à manipulação de amostras teciduais de origem humana, seguindo as orientações do Conselho Nacional de Pesquisa envolvendo Seres Humanos. PARTICIPANTES (Pesquisadores e Técnicos) Paloma Lys de Medeiros, Doutora, Professora Adjunta IV, Coordenadora e pesquisadora do Dept o. de Histologia e Embriologia-C.C.B./UFPE; Eliete Cavalcanti da Silva, Doutora, Professora Adjunta IV, Pesquisadora do Dept o. de Histologia e Embriologia-C.C.B./UFPE; Luiz Lucio Soares da Silva, Doutor, Professor Associado I, Pesquisador do Dept o. de Histologia e Embriologia-C.C.B./UFPE; Ariene Cristina Dias Guimarães Bassoli, Doutora, Professora Adjunta IV, Pesquisadora do Dept o. de Histologia e Embriologia-C.C.B./UFPE; Márcia Bezerra da Silva, Doutora, Professora Adjunto IV, Pesquisadora do Dept o. de Biofísica e Radiobiologia-C.C.B./UFPE José Lamartine de Andrade Aguiar, Doutor, Professor Titular do Programa de Pós-graduação em Cirurgia-C.C.S./UFPE; Luiz Carlos Alves, Doutor, Pesquisador do Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães Fábio André Brayner dos Santos, Doutor, Pesquisador do Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães; Luana Albuquerque Barros, Bacharel em Ciências Biológicas, Mestranda, Mestranda do Programa em inovação Terapêutica-PPGIT/UFPE Silvânia Tavares Paz, Licenciada em Ciências Biológicas, Histotecnólogaresponsável técnica do Laboratório de Patologia do Programa de Pósgraduação em Patologia/UFPE; 5