ENGENHARIA GENÉTICA DOS TECIDOS ANIMAIS

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1 ENGENHARIA GENÉTICA DOS TECIDOS ANIMAIS Mestrado em Biotecnologia FERN/UALG 2005/2006 DOCENTE: Prof. José António Belo Gabinete 3.10; Telefone: # ; BIBLIOGRAFIA: Engenharia genética Princípios e aplicações, 2001 Arnaldo Videira (ed.) Lidel. Lisboa; ISBN: Animal Cell Culture Methods (Methods in Cell Biology, Vol 57), June David Barnes (Editor), Jennie P. Mather (Editor) Academic Pr; ISBN: Gene targeting A practical approach, A. L. Joyner (Editor) Oxford Univ. Press; ISBN: X Essential Developmental Biology (A Practical Approach), Claudio D. Stern and Peter W. H. Holland (Editors) Oxford University Press 1

2 Endereços de Internet de revistas internacionais com interesse para a disciplina Motor de busca bibliográfica PubMed OnLine - American Journal of Human Genetics - Annual Review of Cell and Developmental Biology - Annual Review of Biomedical Engineering - BioEssays - Biotechnology Advances - Biotechnology and Bioengineering Cell - Current Opinion Cell Biology - EMBO Journal - Experimental Cell Research - Journal of Biotechnology - Journal of Cell Biology - Journal of Cell Science - Molecular Biology of the Cell - Nature - Reviews in Molecular Biotechnology - Science - Tissue and Cell - Transgenic Research - Trends in Biotechnology - Trends in Cell Biology - Hiper-ligações para páginas Internet dedicadas à Biotecnologia Células Animais Biotechnology and Biological Sciences Research Council (BBSRC) - Biotechnology Research Institute - British Medical Research Council (MRC) Stem Cell Bank - Departamento de Engenharia Biológica, UMinho - European Federation of Biotechnology - European Molecular Biology Laboratory - Harvard Stem Cell Institute - International Society for Stem Cell Research - Medical Research Council (UK) - National Center for Biotechnology Information - 2

3 Riken Center for Development Biology - Sigma-Aldrich - Society for Developmental Biology - Stem Cell Research Foundation - The Jackson Laboratory - Tissue Engineering Society International - Wellcome Trust - UNSW Mouse Development - Edinburgh Mouse Atlas - Society for Developmental Biology - 3

4 ENGENHARIA GENÉTICA DOS TECIDOS ANIMAIS Mestrado em Biotecnologia FERN/UALG 2005/2006 PROGRAMA TEÓRICO: 1) Introdução. O desenvolvimento da tecnologia de células animais. Vantagens da Cultura de Células. Desvantagens. Principais diferenças in vitro. Definição de tipos de cultura de tecidos. Biologia da célula em cultura. Manutenção de linhas celulares. 2) Introdução ao uso do ratinho Mus musculus como animal modelo. Desenvolvimento embrionário; morfologia de embriões e adultos de ratinho. Análise espacial da expressão genética. Ferramentas electrónicas para aceder ao genoma de ratinho. 3) Produção de ratinhos transgénicos. Princípios, limitações e considerações gerais. Tipos de vectores e desenho da construção. O set-up para a microinjecção. Escolha das estirpes a utilizar, superovulação, microinjecção e transferência para o oviducto. Análise dos animais transgénicos resultantes. 4) Embryonic Stem (ES) Cell Technology alteração dirigida e estável do património genético de ratinho. Isolamento, propagação e manutenção de Células Estaminais Embrionárias de ratinho. Inactivação dirigida de genes usando estas células. Tipos de vectores e desenho da construção. Utilização de recombinases sítio-específicas. 5) Produção de quimeras utilizando células ES alvejadas genéticamente: injecção no blastocisto e agregação de morulas. Aparelhos para micromanipulação, transferência de embriões, detecção e quantificação de quimerismo. Manutenção de linhas de ratinhos genéticamente alvejados. Estratégias de gene-trap usando células ES. Perspectivas e limitações. Considerações científicas, biomédicas e éticas. 4

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6 ENGENHARIA GENÉTICA DOS TECIDOS ANIMAIS Mestrado em Biotecnologia FERN/UALG 2005/2006 PROGRAMA TEÓRICO/PRÁTICO: I) Visionamento de videos com demonstrações práticas de: a) preparações e manipulações de embriões de. b) tecnicas para o estabelecimento de transgénese em ratinhos c) manipulação génetica dirigida utilisando células ES. II) Apresentação e discussão de artigos científicos. Grupo 1 Jun Cheng, Amalia Dutra, Aya Takesono, Lisa Garrett-Beal and Pamela L. Schwartzberg (2004). Improved Generation of C57BL/6J Mouse Embryonic Stem Cells in a Defined Serum-Free Media. genesis 39: Grupo 2: Lobe CG, Koop KE, Kreppner W, Lomeli H, Gertsenstein M, Nagy A. Z/AP, a double reporter for cre-mediated recombination. Dev Biol 1999 Apr 15;208(2): Novak A, Guo C, Yang W, Nagy A, Lobe CG. Z/EG, a double reporter mouse line that expresses enhanced green fluorescent protein upon Cre-mediated excision. Genesis Nov-Dec;28(3-4): Grupo 3 Norris DP, Robertson EJ. Asymmetric and node-specific nodal expression patterns are controlled by two distinct cis-acting regulatory elements. Genes Dev Jun 15;13(12): Grupo 4 Petra Pennekamp,1 Christina Karcher,Anja Fischer, Axel Schweickert, Boris Skryabin, Jurgen Horst,Martin Blum and Bernd Dworniczak (2002). The Ion Channel Polycystin-2 Is Required for Left-Right Axis Determination in Mice. Current Biology, Vol. 12, , June 4 Grupo 5 Christopher B. Brown, Jennifer M. Wenning, Min Min Lu, Douglas J. Epstein, Erik N. Meyers, and Jonathan A. Epstein (2004). Cre-mediated excision of Fgf8 in the Tbx1 expression domain reveals a critical role for Fgf8 in cardiovascular development in the mouse. Developmental Biology 267: