PROGRAMA INSTITUCIONAL DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E TECNOLÓGICA. Dados de Identificação

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1 PROGRAMA INSTITUCIONAL DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E TECNOLÓGICA Relatório Dados de Identificação Aluno de Iniciação Científica Nome Winny Caldas Moreno Tavares Curso Medicina Veterinária Período a que se refere: de 01/08/2017 a 31/07/2018 Nome Orientador Joanna Maria Gonçalves de Souza Fabjan Unidade Acadêmica Nome Viviane Lopes Brair Universidade Federal Fluminense - UFF Colaboradores (até 3) Unidade / IES Universidade Federal Fluminense - UFF Nome Paulo Sergio Cerqueira Rangel Unidade / IES Universidade do Grande Rio - UNIGRANRIO Nome Thereza Cristina Vasconcelos Unidade / IES Universidade do Grande Rio - UNIGRANRIO Título de Projeto Utilização da citologia vaginal como ferramenta para identificação do momento da ovulação em cabras da raça Toggenburg Resumo (máximo de 250 palavras) A detecção do momento da ovulação tem grande importância para o manejo reprodutivo de um rebanho. Esse processo pode ser feito com o uso da ultrassonografia, porém nem sempre o equipamento é de fácil acesso, trazendo assim, a necessidade da detecção do momento da ovulação pela citologia vaginal. Sendo assim, o objetivo deste projeto foi identificar o momento da ovulação utilizando a citologia vaginal. Foram utilizadas nove cabras pluríparas com idade média de 3 anos e criadas em manejo intensivo em Coronel Pacheco, município de Minas Gerais (21 35'S e 43 15'W). No protocolo de indução de estro utilizou-se um dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR) por seis dias, e em D5, d-cloprostenol e ecg por via intramuscular. Após a retirada do CIDR até o momento da ovulação realizou-se, a cada 12 horas: coleta da citologia vaginal com swab e esfregaço, ultrassonografia transretal e detecção de estro. A taxa de ovulação foi de 88%. Após a retirada do CIDR, a porcentagem das células superficiais elevou-se e estas apresentaram uma média diferente das outras estudadas (P<0,05). Em função do baixo coeficiente de variação entre as observações (6%), este tipo celular foi o escolhido para o teste de valor preditivo. O valor preditivo negativo foi de 100% em intervalos superiores às 48 h que antecederam à ovulação e, a partir daí, 88% no intervalo de 36 h a 24 h e 75% às 12 h antes. Já o valor preditivo positivo no momento da ovulação foi de 88%. Tais resultados indicaram uma acurácia de 89,6%. Bolsa de Iniciação Científica (IC)

2 Introdução No Brasil, as cabras são criadas tanto para subsistência de famílias como para comércio e a produção de cabras é uma parte importante da sociedade e da agricultura (CORDEIRO, 2013; LÔBO et al., 2010). Sabe-se que a eficiência reprodutiva é o parâmetro que, isoladamente, mais contribui para a produtividade do rebanho e, desde que os mercados e custos de produção sejam favoráveis, deve-se buscar maximizá-la. No entanto, para isso, independentemente do tipo de exploração, é necessário o conhecimento e a compreensão do comportamento e da fisiologia reprodutiva dessa espécie (SIMPLÍCIO et al., 2005). Justamente por isso, a reprodução é comumente o maior desafio encontrado pelos produtores. A inseminação artificial (IA) tem sido utilizada em poucos rebanhos no Brasil, praticamente apenas em rebanhos de elite. Parte disso é em função dos resultados variáveis encontrados na literatura e na prática comercial. A detecção do momento de início e fim do estro é importante para o manejo reprodutivo, além disso devido a duração de estro extremamente variável dos caprinos (GORDON, 1997). Para que se tenha sucesso na taxa de gestação com utilização da IA, a detecção eficiente do momento da ovulação é crucial nas fêmeas (NASCIMENTO e SOUZA, 2011). Desta forma, a principal estratégia utilizada atualmente a fim de realizar a detecção da ovulação é a partir da ultrassonografia (US). Porém, sabe-se que esta técnica tem desvantagens relacionadas ao custo do equipamento principalmente e necessidade de mão-de-obra qualificada. Sendo assim, buscam-se novas estratégias de detecção de ovulação que sejam confiáveis, mais simples e menos onerosas. A citologia vaginal é frequentemente utilizada na reprodução de cadelas para detecção do momento da ovulação propiciando a utilização da IA (BIERSHWAL, 1991; BOUCHARD et al., 1988). Estudos aplicando a ferramenta da citologia vaginal já foram realizados em caprinos para acompanhar o ciclo estral (PORTO et al., 2007), porém o uso da citologia vaginal para detecção do momento da ovulação nunca foi descrito. Principais Objetivos do Projeto Original O presente projeto tem como objetivo determinar, através de planejamento experimental, o padrão citológico vaginal de cabras Toggenburg no momento do estro e ovulação, em diferentes condições e épocas do ano. Esta técnica pode tornar-se uma medida adicional para auxiliar no manejo reprodutivo ou em pesquisas relacionadas a reprodução dos pequenos ruminantes. Os objetivos específicos são: avaliar microscopicamente as células vaginais de cabras da raça Toggenburg na contra-estação reprodutiva; classificar as células vaginais de acordo com cada período do ciclo estral das cabras Toggenburg; comparar a eficiência da detecção do momento da ovulação a partir da técnica de citologia vaginal com o método da ultrassonografia. Principais Etapas Executadas no Período

3 Levantamento bibliográfico; Elaboração do projeto; Coleta de dados a partir dos protocolos de indução de estro das cabras, acompanhamento do estro, swab para realização da citologia vaginal e exames US para determinar o momento da ovulação; Análise dos dados; Redação do relatório final e resumo. Material e Métodos Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais (CEUA) da Universidade do Grande Rio (UNIGRANRIO), em Duque de Caxias, Estado do Rio de Janeiro (protocolo número 004/2017) e foi conduzido de acordo com os princípios da Sociedade Brasileira de Ciência Animal de Laboratório. O estudo foi realizado durante a contra-estação reprodutiva em Coronel Pacheco, Minas Gerais, na região sudeste do Brasil. A unidade de pesquisa está localizada a 435 m de altitude (latitude S 21 35' e longitude W 43 15'). A área recebe uma precipitação anual média de 1581 mm³. A temperatura média anual no local é de 21 ºC. Os animais foram alojados sob manejo intensivo, recebendo silagem (Pennisetum purpureum) duas vezes ao dia e concentrado de proteína de acordo com a demanda de manutenção. O sal mineralizado (Salminas Sheep, Nutriplan, Juiz de Fora, MG, Brazil) e a água foram oferecidos à vontade. Um total de nove cabras pluríparas foram utilizadas, com idade média de três anos, com peso e escore da condição corporal médios de 58,3 kg e 3,18 respectivamente. As fêmeas foram submetidas a um tratamento de indução de estro curto com duração de seis dias (D0-D6) e receberam um dispositivo intravaginal de liberação lenta contendo 330 mg de progesterona (CIDR, Pfizer Animal Health, São Paulo, Brasil)). Duas administrações foram realizadas em D5: 30 μg de d-cloprostenol (Prolise, ARSA SRL, Buenos Aires, Argentina) intramuscular e 200 UI de gonadotrofina coriônica equina (ecg; Novormon 5000, Syntex SA, Industria Bioquímica e Farmacéutica Buenos Aires, Argentina) intramuscular. Três procedimentos foram iniciados em D7 e realizados a cada 12 horas. O primeiro a ser realizado foi o esfregaço vaginal inserindo um swab de algodão descartável e estéril, rotacionando no assoalho do vestíbulo vaginal para posterior esfregaço em lâmina de vidro e fixação e coloração com o kit Panótico rápido LB (Laborclin Ltda, São Paulo, Brasil). O segundo foi a ultrassonografia ovariana transretal (Mindray, Modelo M5 Vet, Mainland, China) com transdutor de 7.5 MHz adaptado ao uso em pequenos ruminantes (cabo do transdutor acoplado a uma haste rígida), o exame foi realizado com as cabras contidas em um tronco, após retirada manual das fezes e introdução de gel carboximetilcelulose retal, através de uma seringa. Os ovários foram localizados e o número, o diâmetro e a posição dos folículos ovarianos foram registrados (< 3 mm; 3 4 mm; 4 6 mm e > 6 mm). O dia da ovulação foi definido como o dia em que o maior folículo, previamente identificado, não fosse mais detectado. E o terceiro foi o monitoramento do estro com auxílio de rufião, logo após a remoção da esponja, durante 4 dias até não demonstrarem mais sinais de estro. Após detecção de estro as fêmeas foram divididas aleatoriamente em dois grupos, um de monta natural com quatro cabras acasaladas 12 h após a primeira observação de estro e, se mantivessem os sinais de estro até 24 h após a primeira monta, repetia-se a mesma. O outro grupo, com cinco fêmeas, foi submetido à IA, com a observação do estro 24 h após a retirada do CIDR, foi realizada a IA 24 h após observação de estro; no caso de observação de estro 36 h após retirada do CIDR, a IA era realizada 18 h após a observação; e por fim no caso de observação de estro em 48 h após retirada do CIDR, a IA era realizada 10 h após observação. A análise estatística foi realizada utilizando todos os testes para significância estatística no intervalo de confiança de 95%. A correlação de Pearson foi calculada entre as variáveis. As porcentagens foram comparadas usando o teste de Mann Whitney, McNemar, Kruskal Wallis e Dunn. Os dados quantitativos foram registrados como média ± DP, submetidos a análise de variância unidirecional e comparados pelo teste de Student t e ANOVA usando o programa Bioestat 5.0 com nível de confiança de 5%. Na avaliação de padrão celular comparados à ultrassonografia foi utilizado o teste de valor preditivo.

4 Apresentação e Discussão dos Principais Resultados A taxa de ovulação nas cabras Toggenburg foi de 89% (8/9), similar à taxa encontrada em cabras da raça Alpina que receberam dispositivo de progesterona e 200 UI de ecg (VELASQUÉZ; SOUZA; OSORIO, 2010). Quando o quantitativo de células parabasais, intermediárias, superficiais e anucleadas foram comparadas no momento da ovulação, as células superficiais obtiveram uma média significativamente diferente das outras células estudadas (P < 0,05). Já havia sido demonstrado anteriormente que existe uma mudança do epitélio celular ao longo do ciclo em cabras Alpinas e que os hormônios exógenos podem afetar esta diferenciação (TONIOLLO et al., 2005). Além disso, foi observado baixo coeficiente de variação entre as observações (6%), por isso utilizou-se o teste de predição, no período de 60 e 48 horas antes do momento da ovulação a porcentagem de falso positivo são nulas, 36 a 24 horas antes da ovulação a porcentagem de falso positivo foi de 12% e 12 horas antes da ovulação a porcentagem de falso positivo é de 25%. Esse valor menos preciso é explicado pelo coeficiente de variação bem superior ao do momento da ovulação, tendo assim o valor máximo de 25% chances de falso positivo. E no dia da ovulação a chance de um falso negativo para ovulação é de 12%, sendo 88% como positivo verdadeiro. Esses dados demonstram que a utilização da citologia para detecção do momento da ovulação pode ser uma opção interessante e eficaz. A correlação entre tamanho folicular e células intermediárias mostrou que elas possuíam uma correlação diretamente proporcional e esses valores são inversamente proporcionais à quantidade de células superficias. Notou-se que quando os folículos passam a diminuir de tamanho, as células intermediárias diminuem de proporção simultaneamente ao aumento da proporção de células superficiais. Estes dados contradizem de certa forma o relato anterior em cabras da raça Saanen, onde as células intermediárias mantiveram-se elevadas durante proestro, estro, metaestro e diestro, enquanto as células superficiais não sofreram grandes variações durante todo o ciclo (RAPOSO et al., 1999). Fatores Positivos e Negativos que Interferiram na Execução do Projeto Fatores positivos: Disponibilidade de material para execução do projeto; conhecimento prévio das características do rebanho como idade de cada animal e quantidade de partos anteriores. Fatores negativos: Baixa disponibilidade de animais; a escassez bibliográfica sobre citologia vaginal em pequenos ruminantes. Conclusões A citologia vaginal é um método eficaz para detecção do momento da ovulação em caprinos da raça Toggenburg e pode representar uma técnica alternativa quando o aparelho de ultrassonografia não estiver disponível. Referências Bibliográficas

5 BIERSHWAL, C. J. Determination of ovulation time in biches based on teasing, vaginal cytology, and Elisa for Progesterone. Theriogenology, New York, v. 35, n. 3, p , BOUCHARD, G. F.; SOLORZANO, N.; CONCANNON, P. W.; YOUNG-QUIST, R. S.; CHRISTIANSEN, IB. J. Reprodução no cão e no gato. São Paulo: Ed. Manole, CORDEIRO, P.R.C.; CORDEIRO, A.G.P.C.; COSTA, M.G. Produção e mercado de leite caprino. Palestras do VIII Congreso Latinoamericano de Especialistas en Pequeños Rumiantes y Camélidos Sudamericanos, p.17-24, GORDON, I. Controlled reproduction in sheep and goats. Cambridge, UK. University Press, LÔBO, R.N.B; FACÓ, O; BEZERRA OLIVEIRA LÔBO A.M; VASQUES VILLELA L.C. Brazilian goat breeding programs. Small Ruminant Research, Volume 89, Issues 2 3, April 2010, Pages SIMPLÍCIO, AA Caprinocultura e ovinocultura de corte no Brasil: pontos para reflexão. Revista Conselho Federal de Medicina Veterinária Brasília DF. n.52, p NASCIMENTO, P.M.P.; SOUZA, J.M.G. Alternativas para contornar a estacionalidade reprodutiva de cabras leiteiras In: Produção de Caprinos e Ovinos de Leite..1 ed. Juiz de Fora : Embrapa Gado de Leite, 2011, v.1, p PORTO, R.R.M; CAVALCANTE, T.V.; DIAS, F.E.F.; ROCHA, J.M.N.; SOUZA, J.A.T. Perfil citológico de ovelhas da raça Santa Inês no acompanhamento do ciclo estral. Medicina Veterinária, 8, , RAPOSO, R.S; SILVA, L.D.M; LÔBO, R.N.B; FREITAS, V.J.F; DIAS, F.E.F. Perfil citológico vaginal de cabras cíclicas da raça Saanen. Ciência Animal 1999, 9(2): TONIOLLO, G.H; MONREAL, A.C.D; LAURA, I.A; SALAZAR, W.V; DELFÍNI, A. Citologia vaginal em cabras alpinas sincronizadas com CIDR e ecg. Arch. Zootec. 54: VELASQUÉZ, L.F.U; SOUZA, M.I.L; OSORIO, J.H. Resposta ovariana de cabras submetidas a implantes de progesterona seguidos de aplicações de gonadotrofina coriônica equina. R. Bras. Zootec., v.39, n.6, p , Trabalhos Publicados ou aceitos para Publicação e Apresentações em Congressos no Período Resumo publicado na XXXII Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, agosto de Vaginal cytology as a tool to predict the time of ovulation in goats and sheep. Informações Complementares

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