RESISTÊNCIA A ANTIMICROBIANOS DE AMOSTRAS DE SALMONELLA SP. ISOLADAS DE SUÍNOS ABATIDOS NO ESTADO DO RIO GRANDE DO SUL

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1 Arquivos da Faculdade de Veterinária. UFRGS. 9(): -9,. ISSN -5 Recebido/Received: nov RESISTÊNCIA A ANTIMICROBIANOS DE AMOSTRAS DE SALMONELLA SP. ISOLADAS DE SUÍNOS ABATIDOS NO ESTADO DO RIO GRANDE DO SUL ANTIMICROBIAL RESISTANCE PATTERNS OF SALMONELLA SP. ISOLATED FROM SLAUGHTERED PIGS IN THE STATE OF RIO GRANDE DO SUL - BRAZIL S.M.F. CASTAGNA, M.C. BESSA, D.A. CARVALHO, M. CARDOSO & M. COSTA 5 RESUMO No presente estudo foi avaliada a resistência a antimicrobianos de 99 amostras de Salmonella sp., isoladas de linfonodos mesentéricos e conteúdo intestinal de suínos, abatidos no Estado do Rio Grande do Sul. As amostras de Salmonella testadas pertenciam aos sorovares Agona, Bredeney, Derby, Enteritidis, Give, Havana, Infantis, Panama, Rissen, Salmonella sp.[,5:-:,, Salmonella sp.[,7:b:-, Senftenberg, Tennessee e Typhimurium. O modelo de resistência foi determinado por difusão em disco usando antimicrobianos. Foi observado resistência para sulfonamida (8,9%), tetraciclina (7,%), cotrimoxazol (5,%), ampicilina (,%), cloranfenicol (,%), estreptomicina (,%), ácido nalidíxico (,%), tobramicina (,%), neomicina (,%), amicacina (,%), cefaclor (,%), gentamicina (,%), ciprofloxacina (,%). Todas as amostras mostraram sensibilidade à amoxacilina/ácido clavulânico. Apenas amostras foram multi-resistentes (resistente a ou mais antimicrobianos). O sorovar Typhimurium foi significativamente mais resistente em comparação aos demais sorovares testados. ABSTRACT In the present study, 99 Salmonella strains isolated from mesenteric lymph nodes and intestinal contents from swine slaughtered in the state of Rio Grande do Sul (Brazil) were submitted to antibiogram test. The Salmonella strains belonged to serovars Agona, Bredeney, Derby, Enteritidis, Give, Havana, Infantis, Panama, Rissen, Salmonella sp.[,5:-:,, Salmonella sp.[,7:b:-, Senftenberg, Tennessee and Typhimurium. Resistance patterns were determined by disk diffusion using forteen antimicrobials. Resistance was observed to sulphonamide (8,9%), tetracycline (7,%), cotrimoxazole (5,%), ampicillin (,%), chloramphenicol (,%), streptomycin (,%), nalidixic acid (,%), tobramycin (,%), neomycin (,%), amikacin (,%), cefaclor (,%), gentamicin (,%), ciprofloxacin (,%). All strains showed total sensitivity to amoxicillin/clavulanic acid. Multidrug resistance (resistance to four or more antimicrobials) was observed in only isolates. The serovar Typhimurium was significantly more resistant when compared to the other Salmonella serovars. Descritores: Salmonella, suínos, resistência a antimicrobianos Key words: Salmonella, swine, antimicrobial resistance Médica Veterinária, aluna do PPG em Ciências Veterinárias/UFRGS Farmacêutica, aluna do PPG Microbiologia Agrícola e do Ambiente Aluna bolsista PIBIC/CNPq Professora Titular, Dep. de Medicina Veterinária Preventiva, Faculdade de Veterinária/UFRGS 5 Professora Adjunta, Dep. Microbiologia, ICBS/UFRGS

2 CASTAGNA S.M.F., BESSA M.C., CARVALHO D.A, CARDOSO M. & COSTA M.. Resistência a antimicrobianos de amostras de Salmonella sp. isoladas de suínos abatidos no estado do Rio Grande do Sul. Arq. Fac. Vet. UFRGS. 9:-9. INTRODUÇÃO A intensificação dos métodos de produção em suinocultura levaram ao aparecimento de uma série de doenças relacionadas com as tecnologias introduzidas. Os novos tipos de instalações, manejo, nutrição e métodos criatórios modificaram a relação dos animais com o seu ambiente e criaram condições para que agentes, que se mantinham em equilíbrio com o hospedeiro, viessem a exercer um efeito patogênico. Para o controle dessas enfermidades, assumiram papel preponderante os produtos antimicrobianos, usados principalmente através da ração. A função dos mesmos tem sido restabelecer o equilíbrio perdido, criando as condições necessárias para uma suinocultura lucrativa (Barcellos & Sobestianski, 998). Por outro lado, o uso crescente de antimicrobianos tem sido acompanhado da emergência de linhagens resistentes em diversos microrganismo, inclusive aqueles patogênicos (Fedorka-Cray et al., 998; 999a). Na literatura são freqüentes os relatos sobre o aumento do número de toxinfecções na população de diversos países, devido ao consumo de produtos suínos contaminados por Salmonella sp. Este fato expõe o risco que a presença de Salmonella em suínos pode representar para a Saúde Pública. Suínos infectados pela grande maioria dos sorovares de Salmonella não exibem sinais clínicos da doença e o tratamento não é indicado. De qualquer modo, os antimicrobianos usados na produção de suínos, para o tratamento e prevenção de doenças ou promoção de crescimento, podem selecionar amostras resistentes desta bactéria que poderão vir a ser causa de infecções de origem alimentar em humanos (Fedorka-Cray et al., 999b). A exemplo disto, podem-se citar surtos observados em humanos, causados por Salmonella Typhimurium DT, cuja fonte de infecção pode ser identificada como sendo produtos de suínos. Este fagotipo de Salmonella, por apresentar perfil de multi-resistência, tem ocasionado falha nos tratamentos administrados aos pacientes e gerado uma preocupação crescente nos profissionais da saúde (Baggesen et al., 999). A presença de Salmonella sp. em suínos de terminação foi observado no Estado do Rio Grande do Sul (Weiss et al., 999), o que justifica estudos para caracterizar o perfil de sorovares e resistência das amostras que tem sido isoladas. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi analisar amostras de Salmonella sp. isoladas de suínos abatidos no Rio Grande do Sul, com vistas a avaliar a presença de amostras multi-resistentes aos principais antimicrobianos utilizados. MATERIAL E MÉTODOS Amostras: Foram testadas 99 amostras de Salmonella sp. isoladas de linfonodos mesentéricos (5) e conteúdo intestinal (7) de suínos abatidos em três frigoríficos do Estado do Rio Grande do Sul. As amostras foram sorotipadas na Fundação Instituto Oswaldo Cruz e pertenciam aos seguintes sorovares: Agona (5), Bredney (7), Derby (), Enteritidis (), Give (), Havana (), Infantis (), Panama (), Rissen (), Salmonella sp. [,5:-:, (), Salmonella sp. [,7:b:- (), Senftenberg (), Tennessee () e Typhimurium (). As amostras foram mantidas congeladas (- o.c) em caldo Infusão Cérebro e Coração (BHI) acrescido de glicerol a % até o momento do teste. Antibiogramas: As culturas estoque foram recuperadas em BHI e testadas quanto a sua resistência aos antimicrobianos pelo método da difusão em ágar Mueller-Hinton (Barry & Thornsberry, 985). Foram utilizados no teste discos (Cecon) dos seguintes antimicrobianos: ácido nalidíxico ( mg), amicacina ( mg), amoxacilina/ácido clavulânico (/ mg), ampicilina ( mg), cefaclor ( mg), ciprofloxacina (5 mg), cloranfenicol ( mg), 5

3 CASTAGNA S.M.F., BESSA M.C., CARVALHO D.A, CARDOSO M. & COSTA M.. Resistência a antimicrobianos de amostras de Salmonella sp. isoladas de suínos abatidos no estado do Rio Grande do Sul. Arq. Fac. Vet. UFRGS. 9:-9. TABELA : Resistência a antimicrobianos de sorovares de Salmonella sp., isolados de fezes e linfonodos mesentéricos de suínos ao abate. SOROVAR NÚMERO DE AMOSTRAS RESISTENTES AGONA BREDNEY DERBY ENTERITIDIS GIVE HAVANA INFANTIS PANAMA RISSEN Salmonella sp. sorovar [,5:-:, N 5 7 TOB TET NEO AMP AMI SUL 5 NAL GEN AMC SUT CIP CLO CFC EST Salmonella sp. sorovar [,7:B:- SENFTENBERG TENNESSEE TYPHIMURIUM 8 7 TOTAL N: número de amostras TOB: tobramicina; TET: tetraciclina; NEO: neomicina; AMP: ampicilina; AMI: amicacina; SUL: sulfonamida; NAL: ácido nalidíxico; GEN: gentamicina; AMC: amoxacilina/ácido clavulânico; SUT: cotrimoxazol; CIP: ciprofloxacina; CLO: cloranfenicol; CFC: cefaclor; EST: estreptomicina. cotrimoxazol (5 mg), estreptomicina ( mg), gentamicina ( mg), neomicina ( mg), sulfonamida ( mg), tetraciclina ( mg) e tobramicina ( mg). Os dados foram avaliados estatisticamente usando o teste do Qui-quadrado (c ) do Programa computacional Instat. RESULTADOS E DISCUSSÃO No presente estudo, das 99 amostras de Salmonella sp. testadas nenhuma apresentou resistência à amoxacilina/ácido clavulânico. Os maiores índices de resistência foram encontradas contra sulfonamida (8,9%), tetraciclina (7,%), cotrimoxazol (5,%) e ampicilina (,%), antimicrobianos freqüentemente utilizados no manejo dos animais nas granjas. O grupo das quinolonas (ciprofloxacina e ácido nalidíxico), porém, apesar do uso crescente em suinocultura, não apresentou níveis de resistência elevados (Tabela ). Outros autores (Fedorka-Cray et al., 999b; Bahson & Fedorka-Cray, 999; Harvey et al., 999), encontrando resultados semelhantes, observaram que os maiores índices de resistência ocorriam contra antimicrobianos disponíveis há mais tempo no mercado e que eram comumente utilizados na terapêutica. Bahson & Fedorka-Cray (999) demonstraram estatisticamente a relação existente entre a utilização de tetraciclina na fase final de crescimento e o isolamento de amostras

4 CASTAGNA S.M.F., BESSA M.C., CARVALHO D.A, CARDOSO M. & COSTA M.. Resistência a antimicrobianos de amostras de Salmonella sp. isoladas de suínos abatidos no estado do Rio Grande do Sul. Arq. Fac. Vet. UFRGS. 9:-9. FIGURA : Percentagem de amostras resistentes nos sorovares Typhimurium (n=), Agona (n=5) e outros sorovares (n=5) de Salmonella sp. aos grupos de antimicrobianos testados. A: Aminoglicosídeos (Amicacina, Estreptomicina, Gentamicina, Tobramicina e Neomicina); B: Quinolonas (Ciprofloxacina e Ácido nalidíxico); C: Betalactâmicos (Ampicilina); D: Tetraciclina; E: Cloranfenicol; F: Sulfas (Sulfonamida e Cotrimoxazol); G: Cefalosporina (cefaclor) de Salmonella sp. resistentes a partir de conteúdo intestinal e linfonodos dos animais ao abate. Weiss (999), comparando a resistência de amostras de Escherichia coli componentes da microbiota intestinal normal e Salmonella sp. isoladas de fezes de suínos provenientes das mesmas granjas, observou que havia uma coincidência no perfil de resistência das duas populações microbianas. Entretanto, as amostras de E. coli apresentavam uma maior tendência à multiresistência, talvez em decorrência da maior exposição ao uso continuado de antimicrobianos nas propriedades. Esta pressão de seleção exercida pelo uso de antimicrobianos é um fator importante para o desenvolvimento de resistência, principalmente em amostras bacterianas residentes do trato gastrintestinal. Tem sido observado que alguns sorovares como Typhimurium, Derby e Agona apresentam maior nível de resistência que os demais sorovares isolados de suínos (Fedorka- Cray et al., 999a). Esta maior resistência dos sorovares Typhimurium e Agona também pode ser observado nas amostras testadas no presente estudo (Figura ). Particularmente, o sorovar Typhimurium apresentou resistência significativamente maior (p<,) que os demais sorovares contra o grupo dos aminoglicosídeos, ampicilina, tetraciclina e cloranfenicol. Contra o grupo das sulfonamidas, houve diferença significativa (p=,) em relação aos demais sorovares isolados, mas não em relação ao sorovar Agona. Analisando as amostras de Salmonella sp. isoladas no presente trabalho, é possível constatar que amostras (7%) do sorovar Typhimurium apresentaram resistência a ou mais antimicrobianos testados, sendo consideradas multi-resistentes. Por outro lado, apenas (%) das amostras do sorovar Agona e (7,%) amostras dos demais sorovares apresentaram-se multi-resistentes. Comparando os resultados obtidos, é possível assegurar estatisticamente (p<,) que o sorovar Typhimurium apresentou maior número de amostras multi-resistentes que os demais sorovares encontrados. O sorovar Typhimurium tem sido apontado como aquele com maior tendência a adquirir perfil de multi-resistência. Isto tem tor- 7

5 CASTAGNA S.M.F., BESSA M.C., CARVALHO D.A, CARDOSO M. & COSTA M.. Resistência a antimicrobianos de amostras de Salmonella sp. isoladas de suínos abatidos no estado do Rio Grande do Sul. Arq. Fac. Vet. UFRGS. 9:-9. N.º amostras 5 A B C Frigorífico ou + - FIGURA : Nível de resistência (até ou ³ antimicrobianos) de amostras de Salmonella, de acordo com os frigoríficos de procedência. nado este sorovar um sério problema para a saúde animal e humana, principalmente aquelas amostras pertencentes a um subgrupo específico conhecido como fagotipo DT. Este grupo tem apresentado maior patogenicidade para humanos (Baggesen & Aarestrup, 998; Nielsen et al., 999), e tem se caracterizado em diversos países por um perfil de resistência contra ampicilina, tetraciclina, estreptomicina, cloranfenicol e sulfonamidas (Threlfall et al., 99). Das amostras do sorovar Typhimurium isolados no presente estudo, quatro apresentaram perfil de resistência semelhante ao encontrado como marcador do fagotipo DT. Entretanto, não é possível afirmar que as amostras encontradas pertençam efetivamente a este fagotipo apenas pela semelhança do perfil de resistência, uma vez que este poderá mudar de acordo com a região de onde as amostras forem isoladas. Foi possível observar diferença no nível de resistência das amostras de acordo com o frigorífico de onde provinham os animais abatidos, havendo um predomínio de amostras resistentes nos frigoríficos B e C em comparação com o frigorífico A. Justamente naqueles frigoríficos, observou-se também uma ocorrência de amostras multi-resistentes (Figura ). Isto poderia ser explicado por uma maior pressão de seleção, através do uso freqüente de antimicrobianos nas granjas integradas destas empresas. Ao mesmo tempo, analisando os dados encontrados, observa-se que as amostras multi-resistentes do sorovar Typhimurium foram isoladas na sua maioria (9/ ) no frigorífico B, enquanto no frigorífico C foram isoladas a metade (/) das amostras multiresistentes do sorovar Agona. CONCLUSÃO As amostras de Salmonella testadas apresentaram maior resistência à sulfonamida e tetraciclina, sendo que o sorovar Typhimurium apresentou níveis de multi-resistência significativamente maiores que os demais sorovares. AGRADECIMENTOS Às instituições FAPERGS e CAPES pelo auxílio financeiro. À Dra. Eliane Falavina dos Reis, Departamento de Bacteriologia, Instituto Oswaldo Cruz, pela sorotipagem das amostras. 8

6 CASTAGNA S.M.F., BESSA M.C., CARVALHO D.A, CARDOSO M. & COSTA M.. Resistência a antimicrobianos de amostras de Salmonella sp. isoladas de suínos abatidos no estado do Rio Grande do Sul. Arq. Fac. Vet. UFRGS. 9:-9. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BAGGESEN, D.L.; AARESTRUP, F Characterisation of recently emerged multiple antibiotic resistant Salmonella enterica serovar Typhimurium DT and other multiresistant phage types from Danish pig herds. Veterinary Record, v., p BAGGESEN, D.L.; CHRISTENSEN, J.; NIELSEN, A.C.; SVENSMARK, B.; NIELSEN, B Characterisation of Salmonella enterica isolated from swine herds in a cross-sectional study of the Danish swine production. In: INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON THE EPIDEMIOLOGY AND CON- TROL OF SALMONELLA IN PORK,., 999, Washington. Proceedings...Washington. p.7-9. BAHNSON, B.P.; FEDORKA-CRAY, P.J The association of antimicrobial resistance pattern and reported usage of antimicrobials in commercial growing pig production. In: INTERNATIONAL SYM- POSIUM ON THE EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF SALMONELLA IN PORK,., 999, Washington. Proceedings... Washington. p.-. BARCELLOS, D.E.S.N.; SOBESTIANSKI, J.998. Uso de antimicrobianos em Suinocultura. Goiânia: Art, p.7. BARRY, A.L.; THORNSBERRY, C.985. Susceptibility Test: Diffusion Test Procedures. In: Manual of Clinical Microbiology,. ed. Washington, D.C,: American Society for Microbiology, p FEDORKA-CRAY, P.J; MILLER, M.; TOLLEFSON, L.; DARGATZ, D.A Development of Resistance in Salmonella Isolates of Veterinary Origin. Sutton, NE: American Association of Swine Practitioners, p.7-7. FEDORKA-CRAY, P.J.; PETERSEN, K.E.; DARGATZ, D.A.; TOLLEFSON, L.; WINELAND, N.E.; HEADRICK, M.; HOLLINGER, K.; FERRIS, K.999a. National Antimicrobial Resistence Monitoring System: Results for Swine. In: INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON THE EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF SALMO- NELLA IN PORK,., 999, Washington. Proceedings...Washington. p.8-9. FEDORKA-CRAY, P.J.; BAHNSON, P.B.; LADELY, S.R.999b. Antimicrobial Resistance Patterns of Salmonella Isolates Collected from Slaughter Age Pigs. In: INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON THE EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF SALMO- NELLA IN PORK,., 999, Washington. Proceedings...Washington. p.5-7. HARVEY, R.B.; FARRINGTON, L.A.; BUCKLEY, S.A.; DROLESKEY, R.E.; STANKER, L.H.; NISBET, D.J.; INSKIP, P.D.999. Epidemiological Survey of Antimicrobial-resistant Salmonella in Market-age Swine. In: INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON THE EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF SALMO- NELLA IN PORK,., 999, Washington. Proceedings... Washington. p.5-5. NIELSEN, B.; MOGELMOSE, V.; SORENSEN, L.L.; NIELSEN, A.C Tracing back multi-resistant Salmonella Typhimurium DT from pork at the slaugtherhouse to a specific swine herd by strategical use of serology and culture. In: INTERNA- TIONAL SYMPOSIUM ON THE EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF SALMONELLA IN PORK,., 999, Washington. Proceedings... Washington. p.-. THRELFALL, E.J.; FROST, J.A.; WARD, L.R.; ROWE, B.99. Epidemic in cattle and humans of Salmonella Typhimurium DT with chromosomally integrated multiple drug resistance. Veterinary Record, v., p.577. WEISS, L.H.N.999. Ocorrência de Salmonella sp. em suínos de terminação do Rio Grande do Sul. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) - Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre. WEISS, L.H.N.; NONNIG, R.; CARDOSO, M.; COSTA, M.999. Occurrence of Salmonella in finishing pigs from South Brazil. In: INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON THE EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF SAL- MONELLA IN PORK,., 999, Washington. Proceedings... Washington: [s.n.]. Recebido/Received: nov Aceito/Accepted: maio 9