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evmboëéåëáíáîé=üqpe=3ª geração (~45 minutos) c~ëí=üqpe=2ª geração (~20 minutos) PPUOM Finalidade do teste Resumo e explicação do teste O teste Access HYPERsensitive htsh é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação quantitativa dos níveis de hormona humana estimulante da tiróide (tirotropina, htsh) no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. Este teste pode fornecer resultados de 3ª geração (HYPERsensitive htsh) e/ou de 2ª geração (Fast htsh). A hormona humana estimulante da tiróide (htsh) é uma das diversas hormonas glicoproteicas compostas por duas cadeias peptídicas de ligação não-covalente: uma cadeia-α, praticamente idêntica em todas estas hormonas, e uma cadeia-β, que é responsável pela especificidade biológica e imunológica. Estas similaridades determinam vários níveis de reactividade cruzada em anti-soros diferentes. O teste Access HYPERsensitive htsh é um ensaio imunoenzimático de fase sólida que, virtualmente, não apresenta nenhuma reactividade cruzada com outras hormonas peptídicas. A sensibilidade e a especificidade deste teste permitem uma melhor discriminação entre pacientes com hipertiroidismo e eutiroidismo. A TSH humana segregada pela hipófise anterior é o regulador principal da função tiroideia. A secreção da hormona libertadora de tirotropina (TRH ou TRF) pelo hipotálamo controla a secreção de htsh. Este sistema, por sua vez, regula a libertação das hormonas da tiróide: a tiroxina (T4) e a triodotironina (T3). Um mecanismo de feedback negativo existente é sensível às concentrações circulantes das hormonas da tiróide, T3 e T4, monitorizadas pelo hipotálamo. No todo, este sistema é designado como o eixo tiróide-hipófise-hipotálamo. Qualquer alteração na função deste eixo pode influenciar os níveis de T4 e T3 na circulação. 1,2 A TSH humana afecta um grande número de processos metabólicos na glândula tiróide através da ligação do seu receptor de membrana celular e da activação da adenilato ciclase. A adenilato ciclase, por sua vez, facilita a produção do AMP cíclico, o segundo mensageiro da htsh, que estimula uma cascata de efeitos metabólicos intracelulares. Esta estimulação provoca um aumento da síntese e da libertação de T3 e T4, assim como a manutenção da integridade física e funcional da glândula tiróide. 3 A principal utilização clínica da medição do htsh é a avaliação do estado da tiróide. Em pacientes com a função hipotalâmica-pituitária intacta, a htsh é medida para: 1) excluir hipotiroidismo (níveis elevados de htsh) ou hipertiroidismo (níveis diminuídos ou não detectáveis de htsh); 2) monitorizar o tratamento de substituição de T4 em hipotiroidismo primário ou o tratamento antitiróide no hipertiroidismo; 3) acompanhar a supressão de T4 da influência trófica de htsh nos nódulos frios e no bócio atóxico; 4) avaliar a resposta para o teste de estímulo ao TRH. À medida que métodos mais sensíveis e precisos se tornam disponíveis, as medições de htsh também são mais amplamente utilizadas na identificação do hipotiroidismo ou do hipertiroidismo subclínico ou latente. 4,5 A TSH humana era originalmente quantificada utilizando sistemas de ensaio biológico, tais como o ensaio biológico murino de McKenzie. Contudo, estes métodos apresentavam uma sensibilidade insuficiente e necessitavam da concentração de grandes volumes de soro. 6 A preparação do anti-soro para htsh por Utiger e col., levaram ao desenvolvimento da técnica do radioimunoensaio para a medição de htsh. 7,8 A sensibilidade do ensaio e a necessidade duma pequena amostra sérica determinou um interesse imediato pelo método de radioimunoensaio. Página 1

Aumentos adicionais da sensibilidade foram obtidos com a tecnologia da quimioluminescência. O teste HYPERsensitive htsh apresenta um desempenho que corresponde à definição de sensibilidade funcional de terceira geração (0,01-0,02 µiu/ml [miu/l] com um CV% inter-ensaio 20%) para a medição da htsh. O teste Fast htsh apresenta um desempenho que corresponde à definição de sensibilidade funcional de segunda geração (0,1 µiu/ml [miu/l] com um CV% inter-ensaio 20%) para a medição da htsh. 9,10 Princípios do teste Informações sobre o produto O teste Access HYPERsensitive htsh é um ensaio imunoenzimático de local duplo ( sandwich ). Uma amostra é adicionada a um recipiente de reacção contendo conjugado anticorpo de cabra anti-htsh - fosfatase alcalina, uma solução de proteínas tamponada e partículas paramagnéticas revestidas com anticorpo monoclonal de rato anti-htsh imobilizado. (O anticorpo de cabra anti-rato é usado para imobilizar o anticorpo de rato anti-htsh.) A htsh liga-se ao anticorpo monoclonal anti-htsh imobilizado na fase sólida, enquanto o conjugado anticorpo de cabra anti-htsh - fosfatase alcalina reage com um sítio antigénico diferente presente na htsh. Após a incubação num recipiente de reacção, os materiais ligados à fase sólida são retidos num campo magnético enquanto os materiais não ligados são removidos por lavagem. De seguida, o substrato quimioluminescente, Lumi-Phos* 530, é adicionado ao recipiente e a luz gerada pela reacção é medida com um luminómetro. A produção de luz é directamente proporcional à concentração de hormona humana estimulante da tiróide na amostra. A quantidade de analito presente na amostra é a partir duma curva de calibração multiponto armazenada no sistema. Kit de reagentes Access HYPERsensitive htsh Nº Cat. 33820: 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Utilizzata sia per il test HYPERsensitive htsh che per il test Fast htsh. Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no aparelho. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta quando armazenado a 2 10 C. Estável a 2 10 C por 28 dias após utilização inicial. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Abrir a embalagem de reagente caso tenha sofrido prejuízos (p.ex. ruptura da camada elastomérica). Todos os anti-soros são policlonais, excepto quando indicado em contrário. R1a: R1b: R1c: Partículas paramagnéticas revestidas com IgG de cabra anti-rato: complexos anti-htsh monoclonais de rato suspensos em solução salina TRIS tamponada, com surfactante, albumina sérica bovina (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,1% de ProClin** 300. Solução salina TRIS tamponada com surfactante, BSA, proteína (murina, caprina), < 0,1% de azida sódica e 0,1% ProClin 300. Conjugado de anticorpos de cabra anti-htsh - fosfatase alcalina (bovina) em solução salina TRIS tamponada, com surfactante, BSA, proteína (caprina), < 0,1% de azida sódica e 0,1% de ProClin 300. Access HYPERsensitive htsh 386931C 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 2

Avisos e precauções Colheita e preparação da amostra Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 11 O ProClin 300 pode causar sensibilização cutânea. Evitar entornar ou salpicar este reagente sobre a pele ou as roupas. Em caso de contacto com este reagente, lavar com abundante água e sabão. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. 1. Soro e plasma (heparina) são as amostras aconselhadas. 2. Seguir as recomendações abaixo para manusear, analisar e armazenar amostras de sangue: 12 Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação. Manter as provetas sempre fechadas. Dentro de duas horas após a centrifugação, transferir no mínimo 500 µl de amostra isenta de células para uma proveta de armazenamento. Tapar imediatamente a proveta com a rolha, apertando bem. Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a 15 30 C) durante o máximo de oito horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de oito horas, refrigerar as amostra a 2 8 C. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 48 horas, ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa. As amostras podem ser descongeladas somente uma vez. 3. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras: Certificar-se de que a fibrina e a matéria celular residuais tenham sido removidas antes da análise. Para a centrifugação, seguir as instruções do fabricante das provetas de colheita de sangue. 4. Cada laboratório deve determinar a aceitabilidade das próprias provetas de colheita de sangue e dos produtos de separação do soro. Estes produtos podem variar entre fabricantes diferentes e, às vezes, de um lote para o outro. 5. Evitar a análise de amostras hemolisadas. Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access HYPERsensitive htsh Materiais necessários mas não fornecidos 1. Calibradores: Access HYPERsensitive htsh Calibrators Fornecido em zero e aproximadamente 0,1; 0,5; 4,0; 10,0 e 100,0 µiu/ml (miu/l). Nº Cat. 33825 2. Materiais do Controle de Qualidade (QC): material de controlo disponível no comércio. 3. Diluente de amostras A: Access Sample Diluent A Nº Cat. 81908 4. Substrato: Access Substrate Nº Cat. 81906 Página 3

5. Tampão de lavagem: Access Wash Buffer Nº Cat. 81907 (Access, Access 2, SYNCHRON LX i) Nº Cat. 8547197 (UniCel DxI) Comentários sobre o procedimento Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade Resultados 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no aparelho. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 3. O teste HYPERsensitive htsh utiliza cento e dez (110) µl de amostra para cada determinação, além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. O teste Fast htsh utiliza cinquenta e cinco (55) µl de amostra para cada determinação, além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 4. A unidade de medida padrão do sistema para indicar os resultados das amostras é µiu/ml. Para mudar essas unidades de medida para o Sistema Internacional de Unidades (unidades do SI), miu/l, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda. Para converter as concentrações manualmente para o Sistema Internacional, multiplicar µiu/ml pelo factor de multiplicação 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Para todos os testes, é necessário ter uma curva de calibração activa. Para os testes Access HYPERsensitive htsh e Access Fast htsh, a calibração é necessária a cada 28 dias. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas. 13 Utilizar materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. Os resultados dos testes dos doentes são determinados automaticamente pelo software do sistema utilizando um modelo matemático de curva logística de quatro parâmetros ponderada (4PLC). A quantidade de analito na amostra é a partir da produção de luz medida através dos dados de calibração armazenados no sistema. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de Access HYPERsensitive htsh 386931C 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 4

sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções completas sobre como visualizar os resultados das amostras. Limitações do procedimento Valores esperados 1. Para o teste HYPERsensitive htsh: As amostras podem ser medidas dentro do intervalo de indicação compreendido entre o limite de sensibilidade funcional (clínica) e o valor mais alto do calibrador. Se uma amostra contém uma quantidade menor que sensibilidade funcional para o ensaio, registar os resultados como menores que aquele valor. Valores de 0,01 0,02 µiu/ml com CVs inter-ensaio (inter-execução) 20% são considerados uma demonstração de sensibilidade funcional de Terceira Geração. 9,10 Se uma amostra contém uma quantidade maior que o valor estabelecido do calibrador mais alto Access HYPERsensitive htsh Calibrator (S5), registar os resultados como maiores que aquele valor (por ex., > 100,0 µiu/ml [miu/l]). Alternativamente, diluir um volume de amostra com 4 volumes de calibrador Access HYPERsensitive htsh Calibrator S0 (zero) ou diluente de amostras A Access Sample Diluent A. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. Para o teste Fast htsh: As amostras podem ser medidas dentro do intervalo de indicação compreendido entre o limite de sensibilidade funcional (clínica) e o valor mais alto do calibrador. Se uma amostra contém uma quantidade menor que sensibilidade funcional para o ensaio, registar os resultados como menores que aquele valor. Valores de 0,1 µiu/ml com CVs inter-ensaio (inter-execução) 20% são considerados uma demonstração de sensibilidade funcional de segunda geração. 9,10 Se uma amostra contém uma quantidade maior que o valor estabelecido do calibrador mais alto Access HYPERsensitive htsh Calibrator (S5), registar os resultados como maiores que aquele valor (por ex., > 100,0 µiu/ml [miu/l]). Alternativamente, diluir um volume de amostra com 4 volumes de calibrador Access HYPERsensitive htsh Calibrator S0 (zero) ou diluente de amostras A Access Sample Diluent A. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. 2. Nos ensaios que utilizam anticorpos, existe a possibilidade de interferência dos anticorpos heterófilos contidos na amostra do doente. Os doentes que estão regularmente em contacto com animais ou que tenham sido submetidos a imunoterapia ou a técnicas de diagnóstico que utilizam imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas podem produzir anticorpos, por ex. HAMA, que interferem com os imunoensaios. Para além disso, outros anticorpos heterófilos, tais como os anticorpos humanos anti-cabra, podem estar presentes nas amostras dos doentes. 14,15 Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errados. Os resultados de doentes suspeitos de ter estes anticorpos devem ser avaliados com cuidado. 3. Os resultados do htsh devem ser interpretados baseando-se no quadro clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. 4. Avalie os níveis de htsh cuidadosamente quando o resultado da htsh não corresponde ao estado aparente da função tiroideia. 16,17,18 5. Este ensaio não foi validado para testar níveis de htsh no soro de recém-nascidos. 1. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios intervalos de referência para garantir uma representação adequada de populações específicas. 2. As concentrações de TSH humana foram medidas em 217 amostras de soro humano provenientes de indivíduos do sexo masculino e feminino aparentemente sadios (perfis de tiróide normal) utilizando o ensaio Access HYPERsensitive htsh. A faixa não-paramétrica Página 5

das concentrações de htsh foi de 0,34 5,60 µiu/ml (miu/l). Os testes HYPERsensitive htsh e Fast htsh possuem os mesmos intervalos de referência. 3. No estudo descrito acima, os valores de TSH humana < 0,34 µiu/ml (miu/l) seriam indicativos de hipertiroidismo, enquanto os valores > 5,60 µiu/ml (miu/l) indicariam hipotiroidismo. A avaliação do estado da tiróide não deve depender dos resultados dum único teste. A avaliação completa do estado da tiróide deve incluir outros testes da função tiroideia, incluindo a avaliação dos auto-anticorpos da tiróide (útil no diagnóstico da tiroidite auto-imune) e a avaliação clínica do médico. Características específicas de desempenho do teste HYPERsensitive htsh HYPERsensitive htsh Comparação de métodos Uma comparação dos valores htsh obtidos com o ensaio Access HYPERsensitive htsh do sistema de imunoensaio Access e com um kit de ensaio imunoenzimático disponível no mercado forneceu os seguintes dados estatísticos aplicando os cálculos Deming: 19 n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) 154 0,011 79,22 0,208 0,943 0,994 61 0,011 1,00 0,028 0,868 0,980 Uma comparação de 150 amostras emparelhadas de soro e plasma (heparina) usando o ensaio Access HYPERsensitive htsh no sistema de Imunoensaio Access forneceu os seguintes dados estatísticos: n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) 150 0,006 33,80-0,067 1,008 1,00 da diluição (linearidade) Diluições múltiplas de três amostras contendo vários níveis de htsh com o calibrador Access HYPERsensitive htsh Calibrator S0 (zero) forneceram os seguintes dados: Amostra 1 Pura N/A 0,239 N/A 1/2 0,120 0,119 99,2 1/3,5 0,068 0,063 92,6 1/5 0,048 0,048 100,0 1/7,5 0,032 0,033 103,1 1/10 0,024 0,025 104,2 1/20 0,012 0,011 91,7 média em% 98,5 Access HYPERsensitive htsh 386931C 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 6

Amostra 2 Pura N/A 3,33 N/A 1/2 1,66 1,68 101,2 1/3,5 0,95 0,96 101,1 1/5 0,67 0,67 100,0 1/7,5 0,44 0,45 102,3 1/10 0,33 0,31 93,9 1/20 0,17 0,17 100,0 média em% 99,8 Amostra 3 Pura N/A 72,95 N/A 1/2 36,48 34,81 95,4 1/3,5 20,84 20,77 99,6 1/5 14,59 14,30 98,0 1/7,5 9,73 9,68 99,6 1/10 7,30 7,17 98,2 1/20 3,65 3,77 103,3 média em% 99,0 Provas de recuperação A adição de quatro níveis diferentes de htsh a duas amostras de doentes com baixos valores de htsh forneceram os seguintes dados: Amostra 1 Pura N/A 0,43 N/A Eutiroidismo 1,43 1,46 102,6 Eutiroidismo 5,43 5,86 107,9 Hipotiroidismo 15,43 16,40 106,3 Hipotiroidismo 80,43 80,36 99,9 média em% 104,2 Amostra 2 Pura N/A 0,99 N/A Eutiroidismo 1,99 1,91 95,7 Eutiroidismo 5,99 6,39 106,6 Hipotiroidismo 15,99 16,10 100,7 Hipotiroidismo 80,99 78,39 96,8 média em% 100,0 Página 7

Imprecisão O seguinte estudo descreve a precisão do ensaio htsh. Estes dados são analisados através da análise da variância (ANOVA). 20,21 Um estudo realizado utilizando controlos disponíveis no mercado, com um equipamento só e durante um ciclo de calibração, incluindo dois ensaios por dia, três replicados por ensaio, no decorrer de dez dias, forneceu os seguintes dados sobre a precisão: Controlo do soro humano Média geral (n=60) Intra-execução Inter-execução Imprecisão total Ultrabaixo 0,027 5,83 8,88 10,62 Baixo 1,00 3,12 3,86 4,96 Médio 8,18 2,53 3,78 4,55 Alto 28,59 2,49 2,76 3,72 Especificidade analítica / Interferências Amostras contendo até a 5 9 g/dl (50 90 g/l) de albumina, até a 10 mg/dl (171 µmol/l) de bilirrubina, amostras lipémicas contendo o equivalente a 1800 mg/dl (20,32 mmol/l) de trioleína e amostras hemolisadas contendo até a 500 mg/dl (5 g/l) de hemoglobina não afectam a concentração do htsh testado. A tabela seguinte descreve a reactividade cruzada do ensaio com substâncias com estrutura semelhante a do htsh. Reagentes cruzados foram injectados no HYPERsensitive htsh calibrator S3 com uma dose = 4,0 µiu/ml. Substância Analito adicionado (miu/ml) Reatividade cruzada hlh 3.000 0,01 hfsh 1.000 0,09 hcg 1.000.000 Não detectável h β-tsh 200-0,8 h α-tsh 200 5,63 Sensibilidade analítica O nível mínimo detectável de htsh distinguível de zero (calibrador Access HYPERsensitive htsh Calibrator S0) com 95% de confiança é 0,003 µiu/ml (miu/l). Este valor é determinado através do processamento duma curva de calibração completa de seis pontos, controlos e 10 replicados do calibrador zero em testes múltiplos. O valor de sensibilidade analítica é interpolado a partir da curva no ponto que representa dois desvios padrão do sinal médio medido no calibrador zero. Sensibilidade Funcional A literatura sugere que a sensibilidade funcional (clínica) para os ensaios htsh seja definida em termos de precisão. Valores de 0,01 0,02 µiu/ml com CVs inter-ensaio (inter-execução) 20% são considerados uma demonstração de sensibilidade funcional de Terceira Geração. 9,10 Um estudo realizado utilizando pools de soros humanos, executado com um único instrumento em três ciclos de calibração, com dois lotes diferentes de reagentes, incluindo dois replicados por ensaio, em 20 execuções, forneceu os seguintes dados sobre a precisão: Access HYPERsensitive htsh 386931C 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 8

Pool de Soro Humano Ultrabaixo Média geral (n=40) Intra-execução Inter-execução A sensibilidade funcional do CV de 20% inter-execução foi obtida a 0,015 µiu/ml. Imprecisão total Pool A 0,006 40,8 39,6 56,9 Pool B 0,028 12,3 13,0 17,9 Pool C 0,048 10,0 7,3 12,4 Pool D 0,071 3,8 5,0 6,3 Pool E 0,084 4,8 4,4 6,5 Características específicas de desempenho do teste Fast htsh Fast htsh Comparação de métodos Uma comparação de valores de htsh obtidos com o teste Access HYPERsensitive htsh e o teste Access Fast htsh no sistema de Imunoensaio Access forneceu os seguintes dados estatísticos aplicando os cálculos de Deming: 19 n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) 132 0 68,65-0,067 1,019 1,00 29 0 1,01 0,013 0,970 1,00 Uma comparação de 30 amostras emparelhadas de soro e plasma (heparina) usando o ensaio Access Fast htsh no sistema de Imunoensaio Access forneceu os seguintes dados estatísticos: n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) 30 0,076 5,98-0,003 1,023 1,00 da diluição (linearidade) Diluições múltiplas de três amostras contendo vários níveis de htsh com o calibrador Access HYPERsensitive htsh Calibrator S0 (zero) forneceram os seguintes dados: Amostra 1 Pura N/A 1,532 N/A 1/2 0,766 0,788 102,8 1/3,5 0,437 0,437 100,0 1/5 0,307 0,329 107,1 1/7,5 0,203 0,214 105,2 1/10 0,154 0,155 101,1 1/20 0,077 0,075 97,9 média em% 102,4 Amostra 2 Pura N/A 6,86 N/A 1/2 3,43 3,54 103,3 1/3,5 1,95 2,05 104,6 1/5 1,37 1,38 100,3 Página 9

Amostra 2 1/7,5 0,91 0,90 98,5 1/10 0,69 0,66 95,9 1/20 0,34 0,36 104,3 média em% 101,1 Amostra 3 Provas de recuperação Consultar a secção sobre o desempenho do teste HYPERsensitive htsh. Pura N/A 77,95 N/A 1/2 38,97 39,40 101,1 1/3,5 22,22 22,85 102,9 1/5 15,59 16,96 108,8 1/7,5 10,33 10,11 97,9 1/10 7,79 8,12 104,2 1/20 3,90 3,89 99,7 média em% 102,4 Imprecisão O seguinte estudo descreve a precisão do ensaio de htsh obtida com o teste Fast htsh. Estes dados são analisados através da análise da variância (ANOVA). 20,21 Um estudo realizado utilizando pools de soros humanos, executado com um único instrumento em três ciclos de calibração, com dois lotes diferentes de reagentes, incluindo dois replicados por ensaio, em 20 execuções, forneceu os seguintes dados sobre a precisão: Amostra Média geral (n=40) Intra-execução Inter-execução Especificidade analítica / Interferências Consultar a secção sobre o desempenho do teste HYPERsensitive htsh. Imprecisão total Ultrabaixo 0,058 5,56 3,02 6,33 Baixo 0,48 4,30 3,99 5,86 Médio 4,655 3,85 3,68 5,33 Alto 28,295 5,08 5,59 7,55 Sensibilidade analítica O nível mínimo detectável de htsh distinguível de zero (calibrador Access HYPERsensitive htsh Calibrator S0) com 95% de confiança é < 0.01 µiu/ml (miu/l). Este valor é determinado através do processamento duma curva de calibração completa de seis pontos, controlos e 10 replicados do calibrador zero em testes múltiplos. O valor de sensibilidade analítica é interpolado a partir da curva no ponto que representa dois desvios padrão do sinal médio medido no calibrador zero. Sensibilidade Funcional A literatura sugere que a sensibilidade funcional (clínica) para os ensaios htsh seja definida em termos de precisão. Valores de 0,1 µiu/ml com CVs inter-ensaio (inter-execução) 20% são considerados uma demonstração de sensibilidade funcional de segunda geração. 9,10 Um estudo realizado utilizando pools de soros humanos, executado com um único instrumento em três ciclos de calibração, com dois lotes diferentes de reagentes, incluindo dois replicados por ensaio, em 20 execuções, forneceu os seguintes dados sobre a precisão: Access HYPERsensitive htsh 386931C 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 10

Controlo do soro humano Média geral (n=40) Intra-execução Inter-execução A sensibilidade funcional efectiva com um CV inter-execução de 20% foi obtida a 0,030 µiu/ml. Imprecisão total Pool A 0,011 23,0 30,0 37,8 Pool B 0,032 9,4 12,9 16,0 Pool C 0,054 7,7 10,5 13,0 Pool D 0,074 5,2 7,2 8,9 Pool E 0,090 4,0 4,7 6,1 Página 11

evmboëéåëáíáîé=üqpe=`^if_o^qlop PPUOR Finalidade do produto Resumo e explicação do produto Padronização Informações sobre o produto Os calibradores Access HYPERsensitive htsh Calibrators (matriz BSA) são utilizados para calibrar o ensaio Access HYPERsensitive htsh para a determinação quantitativa dos níveis de htsh no soro e no plasma humanos utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. A calibração dum ensaio quantitativo é o processo pelo qual as amostras com concentrações conhecidas de analito (por ex., calibradores de ensaio) são testadas como amostras de doentes a fim de medir a sua resposta. A relação matemática entre as respostas medidas e as concentrações conhecidas de analito define a curva de calibração. Esta relação matemática, ou curva de calibração, é utilizada para converter as medições URL (Unidade Relativa de Luz) de amostras de doentes em concentrações quantitativas específicas de analito. A substância a ser medida (analito) nos calibradores Access HYPERsensitive htsh Calibrators tem como referência por comparação com uma série de calibradores de referência primária padronizados de acordo com a 2ª Preparação de Referência Internacional 80/558 da OMS. 23 O processo de padronização baseia-se na norma EN ISO 17511. Os valores atribuídos foram estabelecidos usando amostras representativas deste lote de calibrador e são específicos para as metodologias de ensaio dos reagentes Access. Os valores atribuídos por outras metodologias podem ser diferentes. Tais diferenças, se presentes, podem ser causadas por desvios entre os métodos. Access HYPERsensitive htsh Calibrators Nº Cat. 33825: S0 S5, 4,0 ml/recipiente Utilizado tanto para o teste HYPERsensitive htsh, como para o teste Fast htsh. Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta quando armazenado a 2 10 C. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. Não foram observados efeitos de matriz com os calibradores baseados em soro não humano. Consultar o cartão de calibração ou as etiquetas dos recipientes para as concentrações exactas. Access HYPERsensitive htsh 386931C 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 12

. S0: Matriz tamponada de albumina sérica bovina (BSA) com surfactante, < 0,1% de azida sódica e 0,5% de ProClin** 300. Contém 0,0 µiu/ml (miu/l) de htsh. S1, S2,S3, S4, S5: Cartões de calibração: Aproximadamente 0,1; 0,5; 4,0; 10,0 e 100,0 µiu/ml (miu/l) de htsh, respectivamente, em matriz BSA tamponada com surfactante, < 0,1% de azida sódica e 0,5% de ProClin 300. 2 Cartões de calibração: São fornecidos um cartão de calibração para o ensaio Access HYPERsensitive htsh e um cartão de calibração diferente para o ensaio Access Fast htsh. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. O antigénio usado para a preparação do reagente é um derivado da hipófise humana. Manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. 22 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 11 Xi. Irritante: 0.5% ProClin 300 R 43: Pode causar uma sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Detalhes da calibração Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Para executar os testes HYPERsensistive htsh e Fast htsh são necessárias curvas de calibração diferentes. Cada teste tem um cartão de calibração separado e deve ser calibrado de acordo com ele. O mesmo conjunto de calibradores é utilizado para ambos os ensaios. Os calibradores Access HYPERsensitive htsh Calibrators são fornecidos em seis níveis - zero e aproximadamente 0,1, 0,5, 4,0, 10,0, e 100,0 µiu/ml - preparados por gravimetria a partir de TSH humano e matriz BSA tamponada. Os dados de calibração do ensaio são válidos por 28 dias. Os calibradores são analisados em duplicado. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. Página 13

. p^jmib=afirbkq=^ UNVMU Finalidade do produto Resumo e explicação do produto Informações sobre o produto O diluente de amostras A Access Sample Diluent A é utilizado juntamente com os ensaios Access para diluir as amostras dos doentes contendo concentrações de analito maiores que o calibrador S5 específico para aquele analito. O nível de analito nas amostras dos doentes podem exceder os níveis do calibrador S5 específico. Se for necessário um valor quantitativo, será preciso diluir a amostras a fim de determinar a concentração de analito. Access Sample Diluent A Nº Cat. 81908: 4 ml/recipiente Fornecido pronto para utilizar. Deixar o conteúdo repousar à temperatura ambiente por 10 minutos. Misturar invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta do recipiente quando armazenado a 2 10 C. Diluente: Matriz BSA tamponada com surfactante, < 0,1% de azida sódica, 0,5% de ProClin 300. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 11 Xi. Irritante: ProClin 300 0.5% R 43: Pode causar uma sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo analítico compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor do calibrador mais alto do ensaio específico. Se uma amostra contém uma quantidade de analito maior que o valor estabelecido do calibrador S5, diluir a amostra seguindo as instruções de diluição do ensaio específico contidas no folheto do kit sob Limitações do Procedimento na secção reagentes. Consultar os respectivos manuais Access HYPERsensitive htsh 386931C 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 14

de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. Limitações do procedimento Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação no reagente, rejeitar o recipiente. Página 15

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Fabricado por: Beckman Coulter, Inc. 4300 N. Harbor Blvd. Fullerton, CA 92835 U.S.A. Beckman Coulter Ireland Inc. Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland 353 91 774068 Impresso nos Estados Unidos da América Fabricado nos Estados Unidos da América Revisado em Fevereiro 2005 Página 17