Disciplina: Microbiologia Geral Noções Básicas em Microscopia Óptica Os microrganismos são pequenos demais para serem vistos a olho nú; Deve-se observá-los através de um microscópio. Latim Micro Pequeno MICROSCÓPIO Grego Scopos Olhar Instrumentos de microscopia Comerciante alemão e cientista Antony Van Leeuwenhoek (século XVII) foi o primeiro a observar microrganismos através de lentes de aumento Localização da amostra Lentes Como selecionar, medir e contar os espécimes que iremos estudar? Como utilizar o sistema métrico para medir os microrganismos Unidades de Medida A unidade-padrão de comprimento no sistema métrico é o Metro (m) Neste sistema as unidades estão relacionadas uma às outras por fatores de 10: 1metro = 10 decímetros (dm), ou 100 centímetros (cm) ou 1000 milímetros (mm) Como os microrganismos e seus componentes são muito pequenos eles são medidos em unidades ainda menores que não são familiares na nossa vida diária. Ex: Um Micrômetro = 1 um = 0,000001 m (10-6 m). Micro: indica que a unidade após ele deve ser dividida por 1 milhão ou 10 6 Um Nanômetro = 1 nm = 0,000000001 m (10-9 m). Dimensões dos Microrganismos Os procariotos (bactérias e arqueas): Variam entre 300 nm e 1 um. Os eucariotos (fungos, algas e protozoários) constituem o grupo mais heterogêneo: Variam entre 10 um a 100 um Os vírus, cuja a organização estrutural não corresponde a uma célula: Variam de 27 nm até 300 nm de diâmetro 1
Dimensões dos Microrganismos Olho nu, enxerga estruturas com diâmetro de 0,2 nm Desse modo, é necessário a utilização de um microscópio para a visualização de microrganismos Microscopia óptica: Uso de qualquer microscópio que use luz para observar espécimes Microscópio óptico Composto (MO): Tem uma série de lentes e utiliza a luz visível como fonte de iluminação A luz passa da base do microscópio através do espécime e alcança seu olho através da TRANSILUMINAÇÃO Base ou Pé É a peça que liga a base até a parte superior do microscópio e onde se deve segurar o microscópio para ser transportado. Braço ou coluna Oculares É a peça que liga a base até a parte superior do microscópio e onde se deve segurar o microscópio para ser transportado Aumenta a imagem do objeto após o aumento já proporcionado pela objetiva. É através desta lente que o observador vê a imagem do objeto (por isso o nome ocular, uma vez que o olho do observador está colocado a frente dela 2
Canhão Revólver Parte mais superior do microscópio, contém um conjunto de espelhos que projetam a imagem em direção às oculares nele encaixadas Peça encontrada abaixo do canhão na qual se inserem várias lentes objetivas São lentes que projetam uma imagem aumentada do objeto nas oculares. A objetiva de 100x é também chamada objetiva de imersão (utilizada com óleo especial, que permite maior refração da luz para dentro da objetiva, corrigindo a pouca luminosidade nas observações feitas em grandes aumentos). Após o uso, o óleo é removido com xilol, éter ou benzina, embebido em algodão. Objetivas É uma placa de metal com um orifício no centro, por onde passam os raios luminosos. O objeto que vai ser observado é colocado sobre uma lâmina de vidro e esta, sobre a platina, exatamente em cima do orifício. Mesa ou Platina Condensador Diafragma Situado entre a platina e a base, converge os raios luminosos provindos da lâmpada e projeta-os como um cone de luz sobre o material que está sendo examinado. Fica acima do receptáculo do filtro, se liga a uma alavanca que permite sua abertura ou fechamento, levando ao controle da passagem total ou parcial da luz. 3
Fonte de luz Parafusos Macrométrico e micrométrico Normalmente uma lâmpada ou, em modelos mais antigos, um espelho, que se apóia na base do microscópio. O macrométrico permite grandes avanços ou recuos da platina em direção à objetiva. O micrométrico permite pequenos avanços ou recuos. Esse movimento da platina leva à focalização do material observado em diferentes aumentos. Uma série de lentes finamente polidas forma uma imagem claramente focada, que é muitas vezes maior que a amostra em si. Ampliação é obtida: Raios de luz de um iluminador, a fonte de luz; São passados através do condensador que possuem lentes que dirigem os raios de luz através da amostra; Os raios de luz passam para as lentes objetiva, que são aquelas que estão mais próximas da amostra; A imagem da amostra é novamente ampliada pela lente ocular O limite de resolução M.O: aproximadamente 0,5 um Aumento final: até 1200 vezes dependendo do tipo de lentes e condensadores Entretanto, além de ampliar é preciso resolver (distinguir) pequenos detalhes de uma estrutura Resolução: Capacidade que um sistema óptico tem de distinguir objetos separados por pequenas distâncias Limite de resolução: A distância mínima entre dois objetos a partir da qual estes podem ser vistos como entidades individualizadas Poder de resolução: É uma grandeza inversamente proporcional ao limite de resolução. Quanto menor o limite de resolução do microscópio, maior será o seu poder de resolução. Como proceder: 4
Cuidados no uso do microscópio Óptico a) Nunca forçá-lo. Todas as conexões devem funcionar suavemente. Caso contrário, chame o professor; b) As lentes da objetiva nunca devem tocar a lâmina. Portanto, nunca focalizar abaixando o canhão com o parafuso macrométrico olhando para a ocular; c) Não tocar as lentes. Se estiverem sujas, limpe-as com algodão ou lenço de papel que serão fornecidos; d) Limpar sempre a objetiva de imersão após o uso; e) Não esquecer a lâmina no microscópio após o uso; f) Manter a platina sempre limpa e seca. Limpa-la com o guardanapo apropriado. Cuidados no uso do microscópio Óptico g) Não inclinar o microscópio, pois neste curso quase todas as técnicas empregadas exigem que a lâmina seja examinada sempre na posição horizontal; h) Quando o microscópio não estiver em uso, deverá ser coberto; i) Habitue-se não deixar a fonte de luz acesa quando não estiver utilizando o microscópio. 5