Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia Projeto de Extensão Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas Prof. Dr. Gildomar Lima Valasques Junior Doutor em Biotecnologia Jequié 2015
Introdução Diagnóstico micológico: Exame microscópico Visualiza a morfologia Exame em cultivo Isola o micro-organismo para posterior identificação Necessária uma suspeita de diagnóstico Transporte adequado Meio e condições de cultivos adequados Podem apresentar-se como filamentosos ou leveduriforme
Introdução Aspectos gerais do laboratório Área de trabalho Etiquetas de biossegurança Riscos biológicos Evitar entrada de pessoas desautorizadas Evitar consumo de bebidas e alimentos Recursos humanos Qualificação para o trabalho Treinamento específico
Introdução Aspectos gerais do laboratório Controle de qualidade Equipamentos com registro de uso Vidraria sempre lima e estéril Reagentes sempre dentro da validade e nos locais corretos Meios de cultura armazenados de maneira correta e validados quanto a esterilidade Livro de registro Cuidados com amostras biológicas
Raspado de pelo, pele e unha Preparação para a coleta Identificar o recipiente Separar os materiais de uso: Pele: Lâmina, bisturi, tesoura, álcool etc. Assepsia com álcool a 70% Raspar os bordos inflamados Colher a amostra em 2 lâminas de microscopia ou placa de petri
Raspado de pelo, pele e unha Pele Método de porto Adicionar fita colante transparente à lesão Pressionar levemente Retirar a fita Observar os aspectos das colônias ao microscópio
Raspado de pelo, pele e unha Unha Assepsia com álcool a 70% Cortar a unha até o limite da lesão Coletar o material subungueal com lâminas estéreis Encaminhar ao laboratório Esculpidor de Lecron
Raspado de pelo, pele e unha Pêlo Não necessita assepsia Selecionar os pelos infectados (mínimo de 15) Remover com uma pinça estéril Colocar em recipiente limpo, seco e estéril
Semeadura para pele, unha e pêlo Usar Ágar sabouraud com clorafenicol inclinado Suspeita de pitiríase vesicolor acrescentar azeite de oliva Com uma pinça de platina em L Transferir o material para o tubo Incubar a 30 C por 4 semanas
Raspado de pelo, pele e unha Exame direto KOH 10-20% sobre uma lâmina de microscopia Depositar um fragmento do material e colocar a lamínula Aguardar a digestão (30min) Observar no microscópio (40X) Hifas regulares e septadas Hifas escuras Organismos leveduriformes Nódulos compostos por fungos ligados ao pêlo
Raspado de pelo, pele e unha Cultura Positivo para Levedura
Raspado de pelo, pele e unha Cultura Positivo para fungo filamentoso
Materiais de fragmento Coleta Identificar o recipiente Biópsia realizada pelo médico Semeadura Meio de cultura específico para a suspeita a depender do local do material obtido Fragmentar o objeto com bisturi estéril Incubar a 30 C e observar por 4 a 12 semanas Suspeita de Histoplasmose
Materiais de fragmento Exame direto Colocar uma gota de soro fisiológico na lâmina Esfregar um ou mais fragmentos na lâmina Colocar a lamínula Observar no microscópio (40X) Organismos leveduriformes Hifas septadas de cor castanha ou marron Hifas claras sem septo
Materiais de fragmento Coloração de gram Levedura é gram positivo
Materiais de fragmento Realizar cultura Positivo para leveduras Morfologia característica Positivo para fungo filamentoso Morfologia característica
Fungo de Líquor Coleta: Realizado pelo clínico Semeadura Cultivo em ágar niger para identificação de criptococos Teste de fenoloxidase
Fungo de Líquor Semeadura Técnica de filtração em membrana
Fungo de Líquor Exame direto Usado quando a disponibilidade de material é baixa Nigrosina Numa lâmina colocar 1g de nigrosina Adicionar uma porção do sedimento do líquor Colocar a lamínula» Positivo para leveduras semelhantes a cryotococcus sp» Negativo
Fungo de Líquor Semeadura Teste de urease
Fungos de materiais líquidos Coleta: Punção de líquido (Pleural, ascítico, pericárdio, sinovial) ou aspirado gástrico Colocar em frasco estéril Semeadura Meio Ágar Sabouraud e BHI inclinado Centrifugar o material Fazer estrias com o precipitado Incubar por 30 dias a 30 C
Fungos de materiais líquidos Exame direto Colocar 1 gota do sedimento Colocar a lamínula Aumentar em 40X Aspectos das leveduras Aspectos morfológicos das hifas Usar Nigrosina se suspeita de Criptococose Coloração de gram Leveduras gram positiva
Fungos de materiais líquidos Cultura Positivo para levedura Positivo para fungo filamentoso
Fungos de abscessos e secreções Coleta Punção de abscessos fechados Local já exposto Lavar com soro fisiológico estéril Coletar com alça microbiológica descartável Coletar o material e passar pra solução salina estéril Refrigerar a 4 C por no máximo 4h
Fungos de abscessos e secreções Coleta Secreção de conduto auditivo externo Secreções oculares Secreções de nariz e seios paranasais Secreções vaginais
Fungos de abscessos e secreções Semeadura Ágar Sabouraud e Ágar BHI Materiais fluidos Centrifugar Realizar estrias com o precipitado Incubar por 4 semanas a 30 C Materiais mucóides (pús) Digerir com acetil-cisteína Aguardar 30min a 24h para digestão Proceder a semeadura
Fungos de abscessos e secreções Cultura Positivo para Levedura Comumente Candida Positivo para fungos filamentosos Comumente aspergillus ou zigomicetos
Fungos de secreções do Trato respiratório Coleta Catarro (pouca representatividade clínica) Broncoscopia Aspiração traqueal Escarro Realizar higiene bucal Gargarejar com água fervida Recolher o escarro em frasco estéril Evitar contaminação com a saliva
Fungos de secreções do Trato respiratório Semeadura Ágar sabouraud Ágar BHI Materiais fluidos devem ser centrifugados Semear o sedimento em estrias Incubar por 14 dias a 12 semanas a 30 C Exame direto 1 gota de solução fisiológica na lâmina Colocar a lamínula Observar no microscópio
Fungos de secreções do Trato respiratório Exame direto com KOH 20%/DMSO 1 gota na lâmina 1 gota do material Colocar a lamínula Esperar 30min Observar no microscópio (40X) Visualização com Nitrogrosina Criptococose Coloração de gram Gram positivo Cultura Levedura (Candida ou criptococcus) ou Fungo Aspergillus
Fungos na urina Coleta Sondagem ou citoscopia Coleta de jato de urina médio Processamento rápido da amostra Semeadura Meio ágar sabouraud em placa de petri Semeadura por esgotamento alça calibrada Infecção Acima de 1000UFC/mL
Fungos de urina Exame direto Colocar 1gota de solução fisiológica sobre a lâmina Colocar 1 ou 2 gotas do sedimento Colocar a lamínula Observar no microscópio Coloração de nigrosina Suspeita de criptococose Coloração de gram Leveduras são gram positivo
Fungos de urina Cultura Candida e criptococcus são os mais isolados Raro encontrar fungos filamentosos Ágar niger
Aspergillus
Trichophyton
Criptococcus
Candida
Rhysopus
Fusarium
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia Projeto de Extensão Diagnóstico laboratorial das infecções fúngicas Prof. Dr. Gildomar Lima Valasques Junior Doutor em Biotecnologia Jequié 2015