CONTROLE DE POPULAÇÕES MICROBIANAS

Transcrição

1 CONTROLE DE POPULAÇÕES MICROBIANAS Prof. Ary Fernandes Junior Departamento de Microbiologia e Imunologia Instituto de Biociências - UNESP Distrito de Rubião Júnior s/n CEP / Botucatu/ SP /Brasil Tel / fax [email protected]

2 Dessecação e Salga

3 Egípcios: Embalsamento

4 Persas: Recipientes de prata e cobre para água

5 Ignaz Phillip Semmelweis ( )

6 Joseph Lister: Técnicas anti-séptica em operações cirúrgicas (uso de fenol para reduzir incidência de infecção)

7 Controle de Populações Microbianas:???? Alguns princípios importantes O agente deve afetar diretamente o microrganismo; O efeito normalmente não é instantâneo (tempo de exposição); Levar em conta o número e natureza dos microrganismos presentes no material.

8 Controle da população microbiana Destruir, inibir ou remover microrganismos Agentes físicos Agentes químicos Microrganismos em números aceitáveis ou ausência dos mesmos

9 Escolha de um método?? Material Objetivos

10 Algumas Definições Esterilização: Destruição de toda e qualquer forma de vida (formas vegetativas, esporos, fungos, vírus, etc) de um material Desinfecção: Destruição de microrganismos patogênicos presentes num material inanimado (Desinfetantes)

11 Anti-sepsia: Destruição de microrganismos patogênicos num tecido vivo (Antissépticos) (Caracteristicas??) Assepsia: Conjunto de medidas para prevenir a entrada de microrganismos num material (vivo ou não) ou reduzir o número dos já presentes (Profilaxia)

12 AGENTES FÍSICOS Calor (Seco e Úmido) -Ponto de Morte Térmica (PMT): Menor temperatura em que todos os microrganismos em uma suspensão líquida serão mortos por calor em 10 minutos -Tempo de Morte Térmica (TMT): Período mínimo de tempo em que todos os microrganismos serão mortos -Tempo de Redução Decimal (TRD ou D): Tempo (minutos) em que 90 % de uma população microbiana em uma determinada temperatura será morta

13 D = 5 min 10 1 D é o tempo, em minutos, em uma determinada temperatura, capaz de causar uma redução em 90% no número de células ou esporos presentes numa suspensão, ou, número de minutos necessários para a curva de sobreviventes atravessar 1 ciclo log.

14 Calor Seco: Oxidação do Protoplasma Flambagem (Bico de Bunsen) Fornos (Forno Pasteur) Incineração

15 Bico de Bunsen

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17 Forno Pasteur

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20 Incineração

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22 Calor Úmido Desnaturação de Proteínas Dissolve lipídeos Maior poder de penetração Mais eficiente

23 Fervura: (100 C/15 min.) (Não destroe Esporos e alguns Vírus (Hepatite A).

24 Autoclavação: Vapor d água sob pressão (121 C/15 ) (Autoclave) Uso para esterilização de materiais (Meios de cultura, instrumento cirúrgicos, vidrarias, etc).

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27 Pasteurização: Eliminar microrganismos patogênicos de substâncias que não suportam temperaturas elevadas. Tipos Lenta (62,8 C/30 min) 5 C. Rápida (71,7 C/15 seg.) 5 C (Reduz contagem entre 97 e 99%) UHT Ultra High Temperature

28 ESQUEMA DE PASTEURIZAÇÃO DO LEITE (1)-Leite Crú; (2)-Bomba; (3)-Água Fria; (4)-Água Quente; (5)-Homogeneizador; (6)- Serpentina de Controle; (7)-Água Superaquecida; (8)-Vapor de Aquecimento; (9)-Leite Pasteurizado

29 Pasteurização: O leite é aquecido a 65ºC e depois resfriado a 0ºC em banho-maria, para eliminar os microorganismos

30 Tindalização (= Esterilização fracionada) (Uso para meios nutritivos) 70 a 100 C/30 min. Incubação 100 o C/30 min 1 º dia Incubar 37 o C/24 h 100 o C/30 min 2 º dia Incubar 37 o C/24 h 100 o C/30 min 3 º dia

31 Baixas Temperaturas (-70 a 196 o C)???? Nitrogênio líquido -196 o C Preserva Freezer -70 o C

32 Filtração: Separa microrganismos de materiais fluídos (Remoção mecânica). Eficiência - Depende da malha do filtro ( 1 m) Ex. : Tampão de algodão até tipos especiais (Berkefeld, Seitz, Ésteres de celulose, etc.)

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34 Câmara de Fluxo Laminar (Filtração e Ultra Violeta)

35 Radiações Não Ionizantes (Ultra-Violeta) Ionizantes (Beta, Gama, Raio X)

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38 UV = 210 a 328 nm (240 a 280 nm) (Absorvida pelo DNA e proteínas) Efeitos Diretos Mutação, Formação de Dímeros de Timina e Inibição de Enzimas; Efeitos Indiretos Formação de O 3 no ar e H 2 O 2 na água. Baixo Poder de Penetração Usos???

39 Radiações Ionizantes (X, e Gama) (Elevado poder de penetração Alimentos embalados) Ioniza macromoléculas Altera composição química da célula Aparelhagem dispendiosa (Uso para substâncias e materiais sensíveis ao calor)

40 Na fonte de cobalto tipo panorâmica, os materiais, já em sua embalagem final, são submetidos à radiação gama

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45 Vibrações Sônicas: Hz Mecanismo: Gases em solução na célula Microbolhas Choques com a parede Lise da célula bacteriana (Cavitação)

46 Microondas Pressão Osmótica Dessecação

47 AGENTES QUÍMICOS Antissépticos, Desinfetantes e Detergentes Agem sobre estruturas da célula. Dificilmente as bactérias tornam-se resistentes. Drogas Antimicrobianas Agem sobre rotas metabólicas e estruturas da célula bacteriana. São os antibióticos e quimioterápicos.

48 Mecanismos de Ação Azitromicina Claritromicina Estreptograminas (Quinopristina/ Dalfopristina) Tigeciclina Síntese de lipídeos Platensimicina Streptomyces platensis

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51 DESNATURAÇÃO DE PROTEÍNAS Álcoois: Etanol (Desinfetante e/ou Antisséptico), Isopropílico (+ eficiente) Soluções aquosas (50 a 70%) são mais eficientes. Espectro de Ação: Gram (+) e (-), BAAR (Fungos, Vírus) (Pouco ativo contra esporos) Tempo de exposição: 10 a 15 min.

52 Fenóis e Derivados Desinfetante: (5%) (Duplofen) Antisséptico : Uso limitado (Hexaclorofeno) Espectro de Ação: Gram ( + ) e ( - ), BAAR. Tempo de exposição: Efeito é imediato.

53 Coeficiente fenólico

54 ALTERAÇÃO NA PERMEABILIDADE DA MEMBRANA CELULAR Detergentes (Surfactantes) Não iônicos: Sem cargas (Só capacidade limpadora) Aniônicos: Carga negativa ( Elevadas concentrações) Catiônicos: Carga positiva (Quaternários de Amônio) Espectro de Ação: Gram ( + ) e ( - ) Tempo de exposição: 10 a 30 min.

55 Produto com atividade antimicrobiana e de detergência. É formulado a partir do princípio ativo Cloreto de Alquil Dimetil Benzil Amônio, que lhe confere a ação antimicrobiana e o Nonil Fenol Etoxilado (Tensoativo não iônico), que lhe confere a ação de detergência.

56 INATIVAÇÃO DE ENZIMAS Agem sobre grupamentos sulfidrilas livres (R-SH) Oxidam Grupamentos Sulfidrilas: R-SH -2H R-SH R-S-S-R H 2 O 2 (Ação Antisséptica), Iodo (Antisséptico (PVPI), Iodoforos, Cloro (Antisséptico - Clorohexidina), Sanitizador (Hipoclorito), KMnO 4 (Antisséptico (1:1000) Espectro de Ação: Gram ( + ) e ( - ), BAAR (Pouco ativos sobre esporos) Tempo de exposição: Efeito imediato

57 O princípio ativo do PVPI (polivinilpirrolidona-iodo) é o iodo que com suas propriedades germicidas amplamente conhecidas, reduz a flora bacteriana em curto espaço de tempo

58 R-SH R-SH Substituem Grupamentos Sulfidrilas: Cl R-S + Hg Hg + 2 HCl R-S Cl Metais Pesados: Mertiolate, Mercúrio Cromo, Prata - Prata coloidal, Nitrato de prata (AgNO3) (oftalmia gonocócica) (1%), Argirol (Proteinato de prata) Espectro de Ação: Gram ( + ) e ( - ) Tempo de exposição: Só agem enquanto em contato

59 AGENTES ALQUILANTES Substituem átomos de hidrogênio em radicais (R-NH 2, OH, R-SH, R-COOH) Formaldeído Usado na forma gasosa (Fumegação) Glutaraldeído Solução Aquosa (Glutarex) Espectro de Ação: Gram (+) e (-), BAAR e esporos. Tempo de exposição: Curto sobre formas vegetativas Prolongado sobre esporos Óxido de Etileno Gás Tóxico e Explosivo.

60 UM BOM DESINFETANTE. Espectro de ação amplo, Ação rápida e irreversível Perda mínima de potência por ação do ambiente, Estabilidade em sua composição química, Não provocar danos ao homem e animais durante aplicação, Tolerado por materiais, Fácil aplicação, Econômico.

61 Lavar as mãos ainda continua sendo uma das soluções para os problemas enfrentados pela Microbiologia Clínica

62 MUITO OBRIGADO