Magna Suzana Alexandre-Moreira João X. de Araújo Junior Lídia Moreira Lima Ana Luisa Palhares de Miranda Carlos Alberto M. Fraga Eliezer J.

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1 REUIÃ TEMÁTICA Inflamação Planejamento, síntese e avaliação farmacológica de novos protótipos anti-inflamatórios, desenhados como inibidores seletivos de PGS-2, a partir do safrol. Magna Suzana Alexandre-Moreira João X. de Araújo Junior Lídia Moreira Lima Ana Luisa Palhares de Miranda Carlos Alberto M. Fraga Eliezer J. Barreiro LASSBio UFRJ Rio de Janeiro - RJ Lab. de Farmacologia e Imunidade LAFI - ICBS UFAL Maceió - AL Lab. Pesquisas Recurso aturais IQ, Farmácia UFAL Maceió-AL 5-6 de junho 2007 Merlin Copacabana otel Rio de Janeiro - RJ

2 S C 3 LASSBio 360 (Lages et al., 1998) S C 3 oxa-homologação manutenção do sistema 5-benziloxibenzo[d] [1,3]dioxola LASSBio 435 transposição de farmacóforos S C 3 GF S C 3 Matéria-prima LASSBio 435 (Silva, MSc Thesis, 2000) GF= S 2 C 3 S 2 2 C 3 bioisosterismo não clássico S C 3 safrol cotea pretiosa Piper longum 2 C 3

3 GF C 3 GF= S 2 C 3 S 2 bioisosterismo não 2 clássico 2 C 3 S C 3 S C 3 C 3 S C 3 C 3 Gênese dos novos derivados diaril-éteres desenhados como inibidores seletivos da PGS-2

4 Screening das atividades analgésica e antinflamatória 15 compostos da série Modelos experimentais: contorção abdominal induzida ácido acético em camundongos e edema de pata de rato induzido por Cg. Dose 300 μmol/kg ; via oral W Y 2 W = 2 W = 2 S Y = S 2 C 3 Y = LASSBio 591 LASSBio 562 LASSBio 686

5 ATIVIDADE ATICICEPTIVA Tabela 1. Efeito de protótipos inibidores seletivos de PGS-2 estruturalmente relacionados ao nimensulido, em ensaio de hiperalgesia induzido por ácido acético. SUBSTÂCIA DSE (μmol/kg) a CTRÇÕES % IIBIÇÃ b Controle-Goma ± 2, imesulido ,3 ± 2,7 40,5 Celecoxib ,2 ± 2,7 48,5 LASSBio 591 LASSBio 686 LASSBio ,7 ± 2,7 44,7 ± 2,3 45,5 ± 3,5 37,7 40,7 48,2 a =número de animais; b % de inibição obtido pela comparação com o grupo controle veículo p<0.05 (teste t Student). Resultados expressos em média + EPM (erro padrão da média). o ensaio de hiperalgesia induzido por formalina, LASSBio 591 (100 μmol/kg) inibiu de forma estatisticamente significativa a fase inflamatória (23,6%). Celecoxib e imesulido inibiram a fase inflamatória em 47% e 58%, respectivamente.

6 ATIVIDADE ATIIFLAMATÓRIA Tabela 2. Potência e eficácia dos derivados LASSBio 591, 686, 562 e Celecoxib no edema de pata de rato induzido por carragenina (3ª hora). SUBSTÂCIA imesulido Celecoxib LASSBio 591 LASSBio 686 LASSBio 562 DI 50 24,2 μmol/kg 87,7 μmol/kg 144,5 μmol/kg 153,4 μmol/kg 130,3 μmol/kg EFEIT MÁXIM 66% 35% 33% 37% 25% Substância BT imesulido Celecoxib LASSBio 591 LASSBio 686 LASSBio 562 % Atividade Sequestrante Radicalar 82,7 0,0 0,0 87,9 87,3 77,1 Avaliação do potencial tóxico das substâncias pela análise macroscópica dos estômagos destes animais quanto a indução de irritação ou ulcerações na parede do estômago, após o tratamento ão foram observados efeitos gastrotóxicos até a maior dose empregada (600 μmol/kg).

7 ATIVIDADE ATIIFLAMATÓRIA IIBIÇÃ DA PRDUÇÃ DE PGE2 I VIV (EM MDEL DE AIR PUC): A inibição da produção de prostaglandinas pode ser um indício de atividade mediada via inibição da enzima PGS-2. LASSBio 591, 686 e 562 foram avaliadas quanto a inibição da produção de PGE2 em modelo de air pouch em ratos, com subseqüente dosagem de PGE2 no exsudato inflamatório. Apenas LASSBio 591 inibiu a produção de PGE2 no exsudato inflamatório. % de PGE Controle Positivo Celecoxib 100 μmol/kg Celecoxib 300 μmol/kg imensulido 300 μmol/kg LASBBio μmol/kg LASBBio μmol/kg LASSBio μmol/kg LASSBio μmol/kg LASSBio μmol/kg LASSBio μmol/kg 0 Dose μmol/kg

8 ATIVIDADE ATIIFLAMATÓRIA AVALIAÇÃ DA ATIVIDADE ATIIFLAMATÓRIA EM MDEL DE MIGRAÇÃ CELULAR: Modelo de pleurisia induzida por carragenina em ratos, onde avaliamos os parâmetros de migração celular e formação de exsudato. LASSBio 591 inibiu tanto o volume de exsudato quanto a migração celular, demonstrando sua capacidade de modular também os processos celulares da inflamação. Volume do Exsudato (ml) Salina Cg L591 o Total de Células por Cavidade (x 10 6 ) Salina Cg L591

9 ATIVIDADE ATIPIRÉTICA: A febre foi induzida pela administração (i.p.) de LPS (50 µg/ml; i.p.) em camundongos. LASSBio 591 foi administrado por via i.p. na dose de 300 μmol/kg, apresentou efeito antipirético significativo até uma hora após sua administração. 1 Veículo Goma ΔTretal ( C) LASSBio 591 Dipirona Tempo (h)

10 AGREGAÇÃ PLAQUETÁRIA E PRDUÇÃ DE PGE 2 E TXB 2 EM SAGUE TTAL UMA % Inibição da Produção de PGE2 e TXB2 em Sangue umano Conc 1 μm Conc 10 μm Conc 100 μm Conc 500 μm 0 Celecoxib imes LASSBio 591 Celecoxib imes LASSBio 591 PGE 2 (CX-2) TXB 2 (CX-1) LASSBio 591 foi mais potente em inibir a produção de PGE2 via CX-2 do que a produção de TXB2 via CX-1. LASSBio 591 só foi capaz de inibir a agregação na concentração de 300 μm, enquanto nimesulido e celecoxib inibiram a partir de 100 μm e 10μM, respectivamente.

11 ATIVIDADE ATIIFLAMATÓRIA AVALIAÇÃ EM MDEL DE IFLAMAÇÃ CRÔICA: Artrite induzida por Adjuvante. % de inibição do edema Indução da síndrome imensulido (100 μmol/kg) LASSBio 591(100 μmol/kg) Início de Tratamento 87% 40% Dias após a indução da síndrome Efeito de LASSBio 591 no edema de pata de ratos artríticos após 7 dias de tratamento.p<0,05 (Student s t-test).

12 Prancha 1 e 2. istologia do fígado de animais após 22 dias de indução da artrite (grupo controle positivo). Prancha 3. istologia do fígado após tratamento com imensulido (100 μmol/kg). Prancha 4. istologia do fígado após tratamento com LASSBio 591 (100 μmol/kg). Prancha 5. istologia do estômago após tratamento com LASSBio 591 (100 μmol/kg) e nimensulido (100 μmol/kg)

13 AÁLISE ISTLÓGICA Foram avaliados aspectos histológicos dos fígados e estômagos dos animais. Podemos evidenciar que LASSBio 591 foi capaz de inibir a formação de granuloma no fígado (prancha 4) após 7 dias de tratamento, enquanto que o nimemsulido não inibiu a formação de granuloma (prancha 3), apresentando aspectos semelhantes ao animal não tratado (controle positivo) (pranchas 1 e 2). A análise histológica dos estômagos mostram que LASSBio 591 não apresenta gastrotoxicidade quando utilizados em tratamento prolongado (prancha 5). LASSBio 591 controla a reatividade neste órgão; LASSBio 591 mais eficaz em processo inflamatório crônico; LASSBio 591 pode ser apontado como um agente antiinflamatório e ou imunomodulador.

14 ESAI DE TXICIDADE AGUDA DSE 600 e 1200 mg/kg, Via oral (dose única) Durante o período de 7 dias, não foram observadas alterações comportamentais (e.g. catatonia, letargia, movimentação). Registro do peso diário sem alteração Aspecto do pelo normal Consumo de ração e água normais (nenhuma alteração no apetite ou sintomas de abstinência) enhuma anomalia externa foi observada LASSBio 591 não apresentam efeitos tóxicos até a dose de 1200 mg/kg

15 CCLUSÕES LASSBio 591 Protótipo de fármaco antinflamatório: Artrite Ativo por via oral Ausência de toxicidade aparente Mecanismo de ação: Inibição de PGs (em parte) Possibilidade de mecanismo de ação múltiplo Síntese viável METAS E CRGRAMA DE ATIVIDADES PARA 2007 Proteção Intelectual; Ampliar os estudos da atividade antinflamatória, buscando determinar o possível mecanismo de ação; modelagem molecular; Avaliar LASSBio 591 em outros alvos moleculares envolvidos na inflamação, principalmente artrite, como a ação sobre TF-a; Avaliar efeito antioxidante in vitro na peroxidação lipídica e in vivo através de medida de TBARS; Avaliar a atividade imunomoduladora de LASSBio 591 em macrófagos estimulados com LPS e IF-γ e avaliar a produção de mediadores tais como óxido nítrico e citocinas; Avaliar o potencial citotóxico destes compostos em cultura de macrófagos peritoneiais.