Investigação de compostos fenólicos com possível potencial alelopático de folhas de uma árvore invasora de restinga (Terminalia catappa L.

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1 Investigação de compostos fenólicos com possível potencial alelopático de folhas de uma árvore invasora de restinga (Terminalia catappa L.) Erika Guisande Rojas 1, Marcos Paulo Oliveira da Silva ) ; Mara Angelina Galvão Magenta 1 ; Walber Toma 1 1 Universidade Santa Cecília Mestrado em ecologia; 2 Universidade Santa Cecília - Faculdade de Educação Física, Esportes e Farmácia Terminalia catappa L., popularmente conhecida como amendoeira-da-praia, cuca e chapéude-sol, trata-se de uma espécie invasora comumente utilizada para arborização em países de clima tropical e subtropical, principalmente em regiões costeiras devido à sua característica de adaptabilidade em regiões com presença de ventos e salinidade. Dados da literatura apontam que dentre os constituintes presentes nos extratos polares obtidos a partir das folhas estão principalmente os compostos polifenólicos, em especial os taninos. Como subsídios para testar o potencial alelopático dessa espécie em relação a outras espécies vegetais, foi realizado processo extrativo obtendo a fração aquosa a partir das folhas de Terminalia catappa e posteriormente foram realizados estudos fitoquímicos com intuito de investigar a presença de taninos. Para tal, foram realizadas reações com ácido acético 10%, acetato de chumbo 10%, reagente de Stiasny e reação com cloreto férrico 2%. Os resultados apontam positividade para os taninos gálhicos tal como o ácido gálico. Dados da literatura indicam que a existência do ácido gálico aponta para as propriedades alelopáticas causadas pela espécie estudada. Em fase posterior, sementes de espécies vegetais de restinga serão submetidas ao contato com diferentes concentrações da fração aquosa obtida a partir desta espécie com intutito de investigar os efeitos causados em sua germinação por essas substâncias. Palavras-chave Alelopatia, taninos, ácido gálico Investigation of phenolic compounds with allelopathic potential in leaves of a tree invader of restinga (Terminalia catappa L.) Terminalia catappa L., popularly known as amendoeira-da-praia, cuca and chapéu-de-sol, it is an invasive species commonly used for afforestation in countries with tropical and subtropical climates, especially in coastal regions due to its characteristic adaptability in regions with wind and salinity. Literature data indicate that among the constituents present in polar extracts obtained from leaves are especially polyphenolic compounds, especially tannins. As grants to test the allelopathic potential of this species relative to other plant species, extraction process was performed by obtaining the aqueous fraction from the leaves of Terminalia catappa and later studies were performed with phytochemicals order to investigate the presence of tannins. To this end, reactions were performed with 10% acetic acid, 10% lead acetate, Stiasny reagent reaction with ferric chloride and 2%. The results show positivity for gallic tannins such as gallic acid. Literature data indicate that the presence of gallic acid points to allelopathic effects caused by the species studied. At a later stage, seeds of plant species sandbank will be submitted to the contact with different concentrations of the aqueous fraction obtained from this species with objective of the investigate the effects on germination by these substances. UNISANTA BioScience p ; Vol. 1, nº 2 (2012) Página 60

2 Keywords Allelopathy, tannin, gallic acid, INTRODUÇÃO Alelopatia é a capacidade das plantas produzirem substâncias químicas que, liberadas no ambiente de outras, influenciam de forma favorável ou desfavorável o seu desenvolvimento (MOLISH 1937). A Sociedade Internacional de Alelopatia diz que o fenômeno está relacionado aos vários processos do metabolismo secundário produzidos pelas plantas, algas, bactérias e fungos, bem como animais (KHALID et al., 2002) Invasões em sistemas biológicos constituem uma das maiores ameaças para a conservação de ecossistemas, sendo atualmente a segunda causa mundial de perda da diversidade biológica, e estando somente atrás da destruição do habitat pelo homem. A melhor maneira de se evitar ou combater essa ação é impedir novas introduções e ocupação por espécies que já tem histórico de invasão em algum lugar do planeta. A detecção precoce é um fator primordial para a erradicação imediata (POORTER & ZILLER, 2004). Terminalia cattapa L. é uma espécie arbórea originária da Malásia (SANCHES, 2009) pertencente à família Combretaceae, que pode atingir de 25 a 40 metros de altura, é tolerante a ventos e spray marinho. Foi introduzida no Brasil na época da colheita do Pau-Brasil, por ter crescimento rápido, baixa exigência de recursos do solo e por produzir uma ampla sombra. Porém, esta espécie se associa facilmente à vegetação costeira e pode interferir negativamente no crescimento de outras plantas (MOURA et al., 2011). Seus frutos flutuam, podendo ser dispersos por correntes marinhas e são consumidos por aves e por morcegos que também os dispersam (THOMSON & EVANS, 2006). Na restinga de Itaguaré (Parque Estadual Restinga Bertioga, Bertioga, SP) observa-se ocorrência de invasão biológica por essa espécie, nas fisionomias de Praia e Dunas e Escrube (SANCHES et al., 2007, SANCHES 2009). Segundo Santos (2012) os constituintes presentes nos extratos polares das folhas desta planta são principalmente compostos polifenólicos, em especial os taninos. DA SILVA & HIRUMA-LIMA (2012) comprovam mediante cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) a presença desses taninos em plantas dessa espécie cultivadas ao longo da orla das praias da cidade de Santos (SP), tendo como compostos majoritários taninos tais como o ácido gálico e o ácido elágico. É sabido que o tipo e a quantidade de compostos fenólicos se alteram em diferentes condições edáficas (JACOBSON et al., 2005). Assim, este trabalho visou efetuar a investigação dos tipos de taninos encontrados em plantas que estão invadindo a restinga da praia de Itaguaré (Bertioga, SP). Os resultados fornecerão subsídios para o trabalho de investigação sobre o possível potencial alelopático de Terminalia catappa sobre a germinação de plantas de restinga, submetidas ao contato com diferentes concentrações da fração aquosa obtidas a partir das folhas desta espécie, como forma de se detectar distúrbios na resiliência desse ambiente. MATERIAL e MÉTODOS Processo extrativo As folhas de Terminalia catappa foram coletadas na Praia de Itaguaré, Parque Estadual Restinga de Bertioga-SP, no mês de Outubro de 2012 e submetidas ao processo de secagem em estufa a 50ºC por 6 dias consecutivos. Em seguida as mesmas foram trituradas e UNISANTA BioScience p ; Vol. 1, nº 2 (2012) Página 61

3 moídas sendo o pó obtido (114 g) submetido ao processo de maceração com 2 L de etanol absoluto por período de 2 horas. Em seguida o macerado foi levado ao percolador sendo empacotado homogeneamente e a solução foi coletada 48 horas depois. O extrato líquido obtido foi submetido ao rotaevaporador sob pressão reduzida, em temperatura menor que 45 C obtendo-se o extrato bruto etanólico (DA SILVA & HIRUMA-LIMA, 2012). Partição do extrato bruto O extrato bruto etanólico seco foi ressuspendido em MeOH/H 2 O (80:20, v/v) e submetido a partição líquido-líquido com hexano e em seguida com acetato de etila, fornecendo ao final 3 frações com diferentes polaridades: Fração hexânica (FrHex); Fração Acetato de Etila (FrAcEt) e Fração Aquosa (FrAq) (DA SILVA & HIRUMA-LIMA, 2012). Análise fitoquímica da fração aquosa (FrAq) Preparação da Solução Padrão Foram pesados 0,5 g da fração aquosa (FrAq) de Terminalia catappa sendo em seguida diluída em 55 ml de água destilada. Desta solução foram pipetados 0,5 ml sendo posteriormente transferida a um tubo de ensaio (tubo 01) de 5 ml. A coloração observada neste tubo 01 foi considerada como amostra padrão (COSTA, 1970). Reação com acetato de chumbo Em outro tubo de ensaio (tubo 02) de 5 ml foram inseridos 0,5 ml da solução de FrAq de Terminalia catappa. Posteriormente foram adicionados 10 ml de ácido acético 10% e 1 ml de acetato de chumbo 10%. A formação de precipitado demonstra positividade para galhotaninos (COSTA, 1970). Reação de Stiasny Foram separados 20 ml da solução restante de FrAq de Terminalia catappa. Esta solução foi aquecida em banho-maria (100ºC) durante 30 minutos. Em seguida foi adicionado nesta solução aquecida 20 ml do reagente de Stiasny (Formol: Ácido Clorídrico (2:1). A formação de precipitado nesta solução indica a presença de taninos pirocatéquicos (COSTA, 1970). Reação com cloreto férrico 2% A solução de FrAq submetida anteriormente à reação com Stiasny foi filtrada. Em seguida foi adicionada uma gota de cloreto férrico (FeCl3) 2%. A solução convertendo para coloração azul-escurecida indica a presença de galhotaninos (COSTA, 1970). RESULTADOS e DISCUSSÃO Os testes feitos com os reagentes Acetato de Chumbo e Cloreto férrico 2% demostraram positividade indicando que há a presença de galhotaninos tal como o ácido gálico. Quanto ao teste Stiasny, o resultado foi negativo demonstrando ausência de taninos pirocatéquicos tais como catequina e epicatequina. (Tab.1) Tabela 1.Tipos de taninos encontrados no extrato de Terminalia catappa. REAGENTE CRITÉRIOS PARA TIPOS DE TANINOS RESULTADOS POSITIVIDADE Acetato de Chumbo Formação de Precipitado Galhotaninos Positivo Stiasny Formação de Precipitado Taninos Pirocatéquicos Negativo Cloreto Férrico 2% Coloração Azul-Escuro Galhotaninos Positivo Com base em trabalhos investigativos do efeito do ácido gálico sobre a germinação de sementes ou desenvolvimento de plântulas de espécies nativas (PESSANHA et al., 2010, UNISANTA BioScience p ; Vol. 1, nº 2 (2012) Página 62

4 SOUZA FILHO et al., 2006) somado à presença de galhotaninos, tal como o ácido gálico na FrAq de Terminalia catappa aponta para a hipótese da existência de efeito alelopático causado por essa espécie. Figura 1:.Análise fitoquímica qualitativa a partir da FrAq de Terminalia catappa A liberação de compostos do metabolismo secundário das plantas no meio ambiente pode interferir drasticamente em seu equilíbrio. ALMEIDA (1991) afirma que a libertação pode ocorrer por volatização, lixiviação ou por decomposição dos tecidos vegetais e exsudação do sistema radicular. WOODSON (1983) caracteriza o ácido gálico como um metabólito secundário especial, de ocorrência ampla no Reino Vegetal, o qual apresenta diversas atividades biológicas; dentre elas é confirmada sua atividade alelopática em outras plantas (SOUZA et al., 2006; ZHAO-UI LI et al., 2010); De acordo com RIZVI & RIZVI (1992) os aleloquímicos podem afetar: 1-estruturas citológicas e ultra-estruturais; 2-hormônios, tanto alterando suas concentrações quanto o balanço entre os diferentes hormônios; 3-membranas e sua permeabilidade; 4- absorção de minerais; 5-movimento dos estômatos, síntese de pigmentos e fotossíntese; 6- respiração; 7-síntese de proteínas; 8-atividade enzimática; 9- relações hídricas econdução; 10- material genético, induzindo alterações no DNA e RNA. Todas estas hipóteses poderão ser comprovadas após testes alelopáticos nas mais variadas concentrações da FrAq de Terminalia catappa. CONCLUSÃO A presença de galhotaninos tal como o ácido gálico na FrAq de Terminalia catappa pode ser considerado um indicador do possível potencial alelopático desta espécia devendo-se efetuar, em fase posterior, testes de germinação e desenvolvimento de plantas de espécies de restinga para estipular os efeitos causados por essa substância nas mais variadas concentrações. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALMEIDA, F.S. de (1991). Efeitos alelopáticos de resíduos vegetais. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasília, v.26, n.2, p , COSTA, A.F. (1970). Farmacognosia. 2ª Edição, Volume III, 1970[s.n]. DA SILVA, L.P.; HIRUMA-LIMA, C.A. (2012). Avaliação dos mecanismos de ação envolvidos nas atividades antiulcerogênica e cicatrizante do extrato etanólico obtido a partir das folhas de Terminalia catappa L. (COMBRETACEAE). Dissertação apresentada ao Departamento de Farmacologia do Instituto de Biociências de Botucatu da Universidade UNISANTA BioScience p ; Vol. 1, nº 2 (2012) Página 63

5 Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, como requisito para a obtenção do Titulo de Mestre em Ciências Biológicas (AC: Farmacologia). Botucatu, SP, JACOBSON, et al. Influência de fatores edáficos na produção de fenóis totais e taninos de duas espécies de Barbatimão (Stryphnodendron sp.) Pesquisa Agropecuária Tropical, vol. 35, núm. 3, 2005, pp Universidade Federal de Goiás Goiânia, Brasil. KHALID, S.; AHMAD, T. e SHAD, R. A. et al. Use of Allelopathy in Agriculture. Asian Journal of Plant de Sciences, v.1, n. 3, p: , MOLISH, H. Der einfluss einer pflanze auf die andere-al lelopathie. Jena_Fischer, Berlin.[s.n] PESSANHA, A. C., SANTOS, L. M., FREITAS, S. P & HUZIWARA. Efeito alelopático de extrato de Schinus terebenthifolius em Brachiaria decumbens. XXVII Congresso Brasileiro da Ciência das Plantas Daninhas Centro de Convenções - Ribeirão Preto SP. POORTER, M; ZILLER, S.R. (2004). Biological contamination in protected areas: the need to act and turn the tide of invasive aliens species. IV Congresso de Unidades de Conservação Anais: RIZVI, S.J.H. & RIZVI, V(1992.) Explotation of allelochemicals in improving crop productivity. In: RIZVI, S.J.H. & RIZVI, H.(Eds.) Allelopathy: Basic and applied aspects. London, Chapman & Hall, 1992.p SANCHES, J.H. (2009) Potencial invasor do Chapéu do Sol (Terminalia catappa L.) em área de restinga. Dissertação (Mestrado em Recursos Florestais) Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Universidade de São Paulo, Piracicaba. SANCHES, J.H., MAGRO, T.C. & SILVA, D.F. (2007). Distribuição espacial da Terminalia catappa L. em área de restinga no Parque Estadual da Serra do Mar, Núcleo Picinguaba, Ubatuba/SP. In: Simpósio brasileiro de sensoriamento remoto. Florianópolis. Anais... São José dos Campos: INPE, Vol. 13, p SOUZA FILHO, A.P.S. ET AL. (2006). Potencial alelopático de Myrcia guianensis. Planta daninha vol.24 no.4 Viçosa Oct./Dec THOMSON, L.A.J.; EVANS, B. Terminalia catappa (tropical almond), ver In: ELEVITCH, C.R. (Ed.). Species profiles for pacific Island agroforestry: permanent agriculture resources (PAR), Disponível em: < Acesso: 30 de Novembro de ZHAO-HUI LI, QIANG,W., XIAO,R., CUN-DE PAN and DE-AN JIANG(2010). Phenolics and Plant Allelopathy. Molecules 2010, 15, ; doi: /molecules WOODSON, L. C.(1983). Mol. Pharmacol.( 1983), [S.l.: s.n.], 24, 471. UNISANTA BioScience p ; Vol. 1, nº 2 (2012) Página 64