EFEITO ANTIMICROBIANO DO EXTRATO DA MYRCIARIA CAULIFLORA BERG E MATRICARIA RECUTITA LINN.SOBRE MICRORGANISMOS DO BIOFILME DENTAL.

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1 19 EFEITO ANTIMICROBIANO DO EXTRATO DA MYRCIARIA CAULIFLORA BERG E MATRICARIA RECUTITA LINN.SOBRE MICRORGANISMOS DO BIOFILME DENTAL. Maria Regina Macedo-Costa 1, Ana Carolina Lyra de Albuquerque 2, Andréia Vieira Pereira 3, Denise Nóbrega Diniz 4, Maria do Socorro Vieira Pereira 5, Jozinete Vieira Pereira 6, Luiz Fernando Annunziata Trevisan 7 RESUMO - Para o controle da formação do biofilme dental utiliza-se uma grande variedade de substâncias químicas, visando à redução da adesão bacteriana, inibição do crescimento e proliferação dos microrganismos na superfície do dente. Neste contexto a presente pesquisa objetiva avaliar comparativamente a atividade antimicrobiana in vitro dos extratos da flor da Matricaria recutita Linn. e da folha da Myrciaria cauliflora Berg. sobre microrganismos do biofilme dental, com o digluconato de clorexidina a 0,12%. Todas as linhagens ensaiadas apresentaram-se sensíveis aos extratos estudados. Diante dos resultados alcançados, pode-se afirmar que extrato da Matricaria recutita Linn. e da Myrciaria cauliflora Berg. apresentaram potencial de atividade antimicrobiana in vitro, sobre as linhagens de Streptococcus mutans, Streptococcus mitis, Streptococcus sanguinis e Lactobacillus casei. Os resultados obtidos indicam a importante significância clínica de se avaliar meios alternativos e economicamente viáveis para o controle da formação do biofilme dental supragengival e, conseqüentemente da cárie dentária. Palavras-chave: Camomila, jabuticabeira, plantas medicinais, fitoterapia. EFFECT ANTIMICROBIALS OF THE EXTRACT OF Matricaria recutita Linn. E Myrciaria cauliflora Berg. ON MICRORGANISMOS OF THE DENTAL BIOFILME. ABSTRACT- For the control of the formation of biofilm dental it used a great chemical variety of substances, aiming at to the reduction of the bacterial adhesion, inhibition of the growth and proliferation of the microorganisms in the surface of the tooth. In this context the present research came in sensible evaluating the antimicrobial activity comparatively in vitro of extracts of the flower of the Matricaria recutita Linn. e of the leaf of the Myrciaria cauliflora Berg. on microorganisms of dental biofilm, with Clorexidina 0.12%. All the assayed ancestries had been presented sensible to the studied extracts. Ahead of the reached results, it can be affirmed that extract of the Matricaria recutita Linn, and the Myrciaria cauliflora Berg presented potential of 1 Aluno(a) do Programa de Pós-Graduação em Odontologia pela UFRN, Av. Salgado Filho,1787-Lagoa Nova, Natal RN, CEP: mariareginamacedo@yahoo.com.br 2 Aluno(a) do Programa de Pós-Graduação em Odontologia pela UFPB, Av. Cidade Universitária - João Pessoa PB, CEP lina.lyra@gmail.com. 3 Aluno(a) do Programa de Pós-Graduação em Zootecnia pela UFCG. Av. Universitária, s/n, Bairro Santa Cecília, CEP: , Patos-PB. andreiavet@hotmail.com 4 Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas e da Saúde, UEPB. Av. das Baraúnas, 351, Campina Grande /PB, CEP denisend@superig.com.br 5 Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas, UFPB. Av. Cidade Universitária, João Pessoa /PB, CEP vieirapereira@uol.com.br. 6 Unidade acadêmica de Odontologia,UEPB. Av. das Baraúnas 351, Campus Universitário - Bodocongó - Campina Grande- PB, CEP jozinetevieira@hotmail.com. 7 Médico Veterinário, Patos, PB. Rua Prefeito Oscar Torres n. 657 Bairro Santo Antonio CEP: luiztre@msn.com

2 20 antimicrobial activity in vitro, on the ancestries of Streptococcus mutans, Streptococcus mitis, Streptococcus sanguinis and Lactobacillus casei. The gotten results indicate the important clinical significance of if evaluating alternative and economically viable ways for the control of the formation it biofilme dental supragengival and, consequently of the dental caries. Keywords: Camomila, jabuticabeira, plants medicinal, Phytoterapics INTRODUÇÃO A maior parte das doenças que acometem a cavidade bucal são de origem infecciosa. Dependendo de fatores, tais como, a dieta e a desorganização regular do biofilme dental, o tipo de microbiota predominante na cavidade bucal, pode variar. Quando a higiene bucal é deficiente e a utilização da sacarose é frequente, ocorre uma mudança ecológica do biofilme dental para certos organismos patogênicos, podendo resultar tanto em lesões de tecido duro, quanto de tecido mole (Torres, 2000). Frente às limitações dos métodos mecânicos de higiene, agentes antimicrobianos são propostos, com a finalidade de reduzir a adesão bacteriana, inibir o crescimento e proliferação dos microrganismos na superfície do dente, modificar a atividade bioquímica e a ecologia do biofilme dental para uma microbiota menos patogênica (Ignacio; Peres; Cury, 1999). Levando isso em consideração, Batista (1999), recomendou o isolamento do agente responsável pela patologia e a determinação da Concentração Inibitória Mínima das drogas passíveis de utilização. Por mais de três décadas, a clorexidina tem sido considerada o padrão-ouro em comparações com outros agentes químicos em Odontologia devido à sua capacidade de evitar a formação do biofilme dental (Charles, et. al., 2004). A clorexidina possui amplo espectro antimicrobiano, atuando tanto em microrganismos gram-positivos como em gram-negativos, além da substantividade prolongada e contínua, mesmo na presença de sangue e demais fluidos corporais (Rosenthal, et.al., 2004). A ocorrência de fatores indesejáveis como o surgimento de resistência de algumas cepas aos antimicrobianos convencionais e a presença de efeitos tóxicos, ressaltam o interesse em plantas com propriedades terapêuticas que apresentem eficácia significativa e menores efeitos colaterais no combate às afecções bucais. A fitoterapia aplicada à Odontologia vem crescendo com grande potencial no Brasil, uma vez que esse apresenta a maior diversidade vegetal do mundo e uma potencial fonte de moléculas bioativas desconhecidas, ampla sociodiversidade e tecnologia para validar cientificamente este conhecimento (Oliveira et al, 2007). Baseado neste contexto torna-se de grande relevância a realização desse estudo, que teve como objetivo avaliar comparativamente a atividade antimicrobiana in vitro dos extratos de flores de Matricaria recutita Linn. (camomila) e folhas Myrciaria cauliflora Berg. (jabuticabeira) sobre os microrganismos: Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis, Streptococcus sobrinus e Lactobacillus casei. MATERIAL E MÉTODOS Local de experimento A pesquisa foi realizada no Laboratório de Fitomedicamentos e Fitocosméticos na Coordenadoria de Ensino de Ciências do Nordeste (CECINE) da Universidade Federal de Pernambuco e no Laboratório de Genética de Microrganismos do Departamento de Biologia Molecular do Centro de Ciências Exatas e da Natureza/CCEN da Universidade Federal da Paraíba. Coleta e preparo do material botânico A preparação dos extratos de flores de Matricaria recutita Linn. e folhas Myrciaria cauliflora Berg. foi conduzida no Laboratório de Fitomedicamentos e Fitocosméticos na Coordenadoria de Ensino de Ciências do Nordeste (CECINE) da Universidade Federal de Pernambuco UFPE, Recife PE.

3 21 Após a colheita, as amostras das folhas, foram postas para secagem em estufa de ventilação forçada a 40ºC aproximadamente, trituradas manualmente, maceradas, homogeneizadas, determinada a matéria seca, e acondicionadas em reservatório de vidro estéreis até o seu uso. Uma fração de 100 g do material fresco e macerado, foi colocado em um cartucho de papel de filtro, previamente tarado, costurado e submetido a uma extração com álcool etílico puro e com acetona, num sistema Soxhlet (solução hidroalcoólica a 80% [v/v]). Os extratos obtidos, foram concentrados por evaporação, a uma temperatura de 60 (±5) C, através de um Evaporador Rotativo MA 120. Em seguida, os extratos brutos concentrados, foram levados a uma estufa de ventilação forçada à 55 C, por 24 horas, filtrados em cadinho de vidro, de porosidade média, e acondicionados em recipientes previamente esterilizados, em capela de fluxo laminar. Os extratos brutos filtrados foram estocados em ambiente a baixa temperatura (±4 C), até o seu uso. Destas amostras foram determinadas às respectivas densidades e a concentração final do resíduo de extrato bruto de cada amostra. Linhagens bacterianas Foram utilizadas no presente trabalho linhagens bacterianas padronizadas de Streptococcus mitis (ATCC 903), Streptococcus mutans (ATCC 25175), Streptococcus sanguinis (ATCC 15300), Streptococcus sobrinus (ATCC 27609) e Lactobacillus casei (ATCC 9595), obtidas mediante solicitação na Fundação Tropical de Pesquisas e Tecnologia "André Tozello" (Campinas/SP), Instituto Adolfo Lutz/SP e na Fundação Oswaldo Cruz (Rio de Janeiro/RJ), e remetidas em Agar Sangue Inclinado ("slants"), e posteriormente reativadas no Laboratório de Genética de Microrganismos - Departamento de Biologia Molecular/CCEN/UFPB. Determinação da atividade antimicrobiana e antifúngica dos extratos hidroalcoólicos de Matricaria recutita e a Myrciaria cauliflora. A atividade antimicrobiana em placas foi determinada segundo a metodologia proposta por Bauer et al. (1969) e as recomendações do National Commite for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, 2003) para a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos extratos hidroalcoólicos de Matricaria recutita Linn. e a Myrciaria cauliflora Berg., sobre as linhagens bacterianas As linhagens bacterianas foram cultivadas em caldo nutritivo (BHI Brain Heart Infusion DIFCO), incubadas a 37 C por horas em microaerofilia, através do método da chama da vela. Placas de Agar Mueller Hinton (DIFCO) foram preparadas e após 24 horas (controle de esterilidade), foram inundadas com solução salina inoculada com microrganismos do overnight em uma concentração de 10-1 e a seguir, foram confeccionados orifícios padronizados de aproximadamente 6mm de diâmetro. Em cada placa foram confeccionados cinco orifícios que receberam numerações que variavam de 1 a 10 as quais corresponderiam a solução dos extratos diluídos em água destilada (Extrato Bruto até 1:512). Após a colocação de 50µL das substâncias testes, as placas foram incubadas em estufa bacteriológica a 37 C por 24 horas. Cada ensaio foi realizado em duplicata frente a cada linhagem selecionada. O mesmo procedimento foi utilizado para o controle positivo, o digluconato de clorexidina a 0,12% (Periogard, Colgate-Palmolive Company, Nova York, EUA.). Foi considerada como CIM a menor concentração da substância capaz de inibir completamente o crescimento fúngico e bacteriano. Delineamento experimental A avaliação da atividade antimicrobiana da Matricaria recutita e a Myrciaria cauliflora foi realizada em uma fase experimental. Avaliação quantitativa através da diluição em Ágar, sendo determinado a Concentração Inibitória Mínima (CIM).

4 22 RESULTADOS E DISCUSSÃO Os antimicrobianos naturais podem promover um controle do crescimento desordenado da microbiota oral contornando transtornos propiciados por cepas resistentes aos antimicrobianos convencionais (Brooks, 2001). Muitas plantas estão sendo testadas quanto a sua atividade antifúngica, porém pouco se tem registrado pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) no sentindo de efetivar sua comercialização. Carvalho et al. (2008) salienta a necessidade de incentivo e mais investimentos em pesquisa para testar a eficácia e segurança de espécies medicinais brasileiras. O surgimento de terapias alternativas confiáveis e de baixo custo poderia proporcionar uma melhora das condições de saúde bucal de boa parte da população, aliando-se à terapia, informação e estimulação à manutenção da higiene bucal (Jones et al., 2005). Os resultados da Concentração Inibitória Mínima em meio sólido por diâmetro dos halos de inibição em mm do extrato de Matricaria recutita Linn e Myrciaria cauliflora Berg, estão apresentados na tabela 1 e 2. Observa-se que os ambos os extratos apresentaram atividade antibacteriana frente a Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis, e Lactobacillus casei. Dentre as atividades antimicrobianas, vários extratos de Matricaria recutita Linn. têm monstrado in vitro atividade inibitória para diferentes microrganismos principalmente sobre organismos Gram-positivos e Candida Albicans (Schulz; Hansel; Tyler, 2002).Os estudos fitoquímicos da jabuticabeira encontrados na literatura são raros, estando reportada a presença de ácido ascórbico, taninos e glicosídeos cianidínicos e peonidínicos (Reynertson et al., 2006). Os resultados obtidos neste estudo corroboram com os de Albuquerque (2007) que mostraram, in vitro, a atividade antibacteriana para diferentes microrganismos do biofilme dental: Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis, Streptococcus oralis, Streptococcus salivarius e Lactobacillus casei. observando a eficácia tanto do extrato da Matricaria recutita Linn. e a Lippia sidoide Cham., como da associação dessas plantas, onde o extrato de M. recutita Linn. apresentou maior atividade antimicrobiana e antiaderente in vitro sobre os microrganismos testados. Estudo prévio, indicou que as folhas de Myrciaria cauliflora Berg. apresentam um alto teor de compostos fenólicos orientando a avaliação da atividade antimicrobiana desta droga vegetal, visto, inclusive, sua ampla disponibilidade pelo território nacional (Souza, 2007). Carvalho et al. (2009), avaliaram a atividade antimicrobiana do extrato da folha de M. cauliflora Berg. sobre Streptococcus mutans, S. sanguinis e S. sobrinus. O extrato, apresentou potencial ação antimicrobiana sobre as amostras, formando em média halos de inibição variando de 12 a 16 mm de diâmetro. Concluiu-se que o extrato da folha da jabuticabeira produziu uma significante atividade antibacteriana in vitro sobre as bactérias do biofilme dentário. Diniz, 2008 realizou estudos onde avaliou a Concentração Inibitória Mínima em meio sólido do extrato hidroalcoólico da folha e caule da Myrciaria cauliflora Berg, folha do sobre Candida albicans, Candida guilliermondii e Candida krusei, observou-se que todos os extratos estudados formaram halos de inibição que variaram de 9 a 27 mm mostrando que estes extratos têm atividade antifúngica sobre leveduras do gênero Candida avaliadas. Souza (2007) avaliou a composição segundo classes de metabólitos secundários e teor de alguns desses metabólitos. As análises fitoquímicas indicaram a presença de flavonóides e taninos nas folhas e extratos de M. cauliflora, e a análise quantitativa determinou elevado teor de fenóis totais nos mesmos. Os resultados aqui apresentados demonstram que as amostras ensaiadas, extrato bruto e concentrações testadas, são sensíveis aos extratos das espécies vegetais estudadas.

5 23 Tabela1. Concentração Inibitória Mínima (halos de inibição em mm) em meio sólido do extrato hidroalcoólico de Matricaria recutita sobre as linhagens bacterianas. MICRORGANIS MOS DIÂMETRO DOS HALOS (mm) Digluconato de Clorexidina M. recutita EB 1:2 1:4 1:8 1:16 SP 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 S. mutans S. mitis S. sanguinis L. casei *EB- Extrato Bruto SP-Substância Pura Tabela2. Concentração Inibitória Mínima (halos de inibição em mm) em meio sólido do extrato hidroalcoólico de Myrciaria cauliflora sobre as linhagens bacterianas. MICRORGANIS MOS DIÂMETRO DOS HALOS (mm) Digluconato de Clorexidina M. cauliflora EB 1:2 1:4 1:8 1:16 SP 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 S. mutans S. mitis S. sanguinis L. casei *EB- Extrato Bruto SP-Substância Pura CONCLUSÃO Os extratos produziram atividade antibacteriana in vitro sobre as linhagens de Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguinis e Lactobacillus casei. Os resultados obtidos indicam a importante significância clínica e necessidade de se avaliar meios alternativos e economicamente viáveis para o controle da formação do biofilme dental supragengival e, conseqüentemente da cárie dental. REFERÊNCIAS Albuquerque, A. C. L. (2007). Efeito antimicrobiano dos extratos da Matricaria recutita Linn. e Lippia sidoides Cham. Sobre microrganismos do biofilme dental. 120f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Centro de Ciências da Saúde. Universidade Federal da Paraíba/ Universidade Federal da Bahia. João Pessoa- PB.

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