Thamayanthy Ramesh, Aneta Stranc e Anitha Tallam. Este relatório não pode ser reproduzido sem a autorização dos responsáveis pelo Programa.

Transcrição

1 RELATÓRIO STANDARD SCHEME DISTRIBUIÇÃO Nº 254 AMOSTRAS S0545 e S0546 Data do ensaio: fevereiro 2014 Data limite de envio de resultados: 10 de abril de 2014 Data do relatório: 25 de abril de 2014 Preparação de amostras e controlo da qualidade Dados analisados / Relatório elaborado: Relatório autorizado: Relatório traduzido, compilado e verificado: Consultores: Morolake Adedeji, Stephanie Foster, Zak Prior, Thamayanthy Ramesh, Aneta Stranc e Anitha Tallam Heena Shah e Nita Patel Heena Shah e Nita Patel Cristina Belo Correia e Isabel Campos Cunha Mª Isabel Santos e Mª Margarida Saraiva Este relatório não pode ser reproduzido sem a autorização dos responsáveis pelo Programa. POR FAVOR VERIFIQUE NO SEU RELATÓRIO SE O NÚMERO DE IDENTIFICAÇÃO DO LABORATÓRIO ESTÁ CORRECTO INSTITUTO NACIONAL DE SAÚDE DR. RICARDO JORGE, I.P. Programa Nacional de Avaliação Externa da Qualidade Microbiologia de Alimentos Lab. Microbiologia dos Alimentos Lab. Microbiologia dos Alimentos Av. Padre Cruz Rua Alexandre Herculano, Lisboa Porto Telef.: Telef.: /33/00 Fax Fax Cristina.Belo@insa.min-saude.pt Isabel.Cunha@insa.min-saude.pt

2 Informações gerais sobre o Esquema, amostras, controlo de qualidade, entre outras, estão incluídas em A Guide to the use of the PHE Proficiency Testing Schemes for Food and Water Microbiology, disponível em Caso necessite de informação específica sobre avaliação de desempenho, sistema de pontuação, estatística, etc, consulte o documento Guide to Scoring Systems and Statistics used for the PHE Proficiency Testing Schemes for Food and Water Microbiology, também disponível em Controlo da Qualidade FEPTU: Para evidenciar a homogeneidade da amostra são selecionados aleatoriamente do lote 10 frascos (no mínimo) e analisados, em duplicado, para os parâmetros que requerem quantificação; para a deteção dos patogénicos em causa são examinados 10 frascos. Para evidenciar a estabilidade da amostra são selecionados aleatoriamente do lote 9 frascos (no mínimo) e analisados durante o período de distribuição, tanto para a quantificação como para a deteção de patogénicos. Os resultados destes ensaios de controlo de qualidade são obtidos utilizando métodos baseados em normas ISO e estão incluídos nos Resultados Esperados Preliminares, constituindo uma orientação em relação aos valores esperados. Estes Resultados Esperados Preliminares são enviados a todos os participantes, por correio eletrónico. z-scores Orientações gerais Os resultados das contagens dos participantes são convertidos em z-scores, utilizando a seguinte fórmula: Z = (x - X) σ x = resultado do laboratório participante (valor expresso em log 10) X = valor alvo (mediana de consenso dos resultados dos participantes - valor expresso em log 10 ) σ = desvio padrão estabelecido para o ensaio (calculado pelo FEPTU) O valor σ expressa a diferença aceitável entre o resultado individual do laboratório participante e a mediana de consenso dos resultados dos participantes. No Standard Scheme, o valor σ utilizado para calcular os z-scores para todos os parâmetros é 0,35. Embora os participantes devam interpretar os seus z-scores no contexto do seu laboratório, estes podem ser interpretados da seguinte forma: z = a z = -2 a ou +2 a z = <-3.00 ou >+3.00 satisfatório questionável não satisfatório De uma forma geral, recomenda-se que os z-scores que ultrapassem o valor ± 2.0 sejam investigados de forma a esclarecer a causa provável. A PHE recomenda que todos os resultados questionáveis ou não satisfatórios sejam investigados. Os gráficos com os resultados dos participantes são compilados utilizando os procedimentos descritos no Guide to Scoring Systems and Statistics para a Avaliação de desempenho atribuída pela PHE. Os z-scores estão incluídos unicamente nas páginas específicas para cada amostra, sendo as linhas correspondentes deixadas em branco nos casos em que um z-score não é aplicável. Se detetou algum problema nos ensaios, consulte a secção Resolução de problemas na página 22 e solicite uma amostra de repetição. Lembramos que uma identificação incorreta ou incompleta de patogénicos em amostras de alimentos pode ter sérias implicações em saúde pública. Do mesmo modo, os níveis de microrganismos reportados na amostra podem afetar o destino subsequente do produto. A finalidade do sistema de pontuação é chamar a atenção para resultados incorretos ou fora da amplitude esperada (AE). Os participantes que reportem contagens fora da AE, de uma forma esporádica, não deverão ficar excessivamente alarmados, devendo, no entanto esclarecer o motivo do resultado fora dos limites estabelecidos. Os resultados sumariados na folha de avaliação do desempenho incluída neste relatório, fornecem uma indicação mais eficiente relativamente à existência de problemas sistemáticos nos ensaios microbiológicos. Contactos INSA Dr. Ricardo Jorge Cristina Belo Correia - Telef.: Cristina.Belo@insa.min-saude.pt ; Fax: Isabel Campos Cunha Telef.: /33/00 Isabel.Cunha@insa.min-saude.pt; Fax: Acreditação: O PHE Standard EQA Scheme está acreditado pelo United Kingdom Accreditation Service (UKAS) de acordo com a ISO/IEC 17043: Conformity assessment - General requirements for proficiency testing. 1

3 Amostra S0545 Conteúdo da amostra: Bacillus cereus (10³), Staphylococcus aureus (10³), Enterococcus faecalis (10⁴) e Klebsiella oxytoca (10²). Todas as contagens são apresentadas como unidades formadoras de colónias (ufc) por ml de amostra reconstituída. Resultados esperados: Ensaios Resultado esperado Resultado do laboratório PHE score para Avaliação do Desempenho z-score B. cereus presuntivo 9,2x10 2 9,2x10 3 ufc g -1 Estafilococos coagulase-positiva 1,6x10 3 1,6x10 4 ufc g -1 Listeria spp. <10 ufc g -1 L. monocytogenes <10 ufc g -1 Contagem de aeróbios mesófilos (CAM) 7,3x10 3 7,3x10 4 ufc g -1 Coliformes 3,9x10 1 6,3x10 2 ufc g -1 NE - Não examinado Comentários do Desempenho: B. cereus presuntivo Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de B. cereus presuntivo 111 Participantes que enviaram corretamente a presença 109 (98%) Participantes que efetuaram a contagem 111 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 2 Participantes que enviaram resultados altos não mensuráveis 1 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 2,9x10 3 ufc g -1 (3,47 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,02 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 9 (7<AE / 2 >AE) Média dos resultados dos participantes 2,8x10 3 ufc g -1 (3,45 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,14 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ do FEPTU (EN/ISO 7932) 2,8x10 3 ufc g -1 (3,45 log 10) Estafilococos coagulase-positiva Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de estafilococos coagulase-positiva 131 Participantes que enviaram corretamente a presença 128 (98%) Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 3 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 5,0x10 3 ufc g -1 (3,69 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,02 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 12 (9 <AE / 3 >AE) Média dos resultados dos participantes 4,8x10 3 ufc g -1 (3,68 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,16 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ do FEPTU (EN/ISO ) 4,9x10 3 ufc g -1 (3,69 log 10) 2

4 Listeria spp. Total de participantes que enviaram resultados para Listeria spp. 106 Participantes que enviaram corretamente a ausência 102 (96%) Listeria monocytogenes Total de participantes que enviaram resultados para Listeria monocytogenes 120 Participantes que enviaram corretamente a ausência 119 (99%) Contagem de aeróbios mesófilos (CAM) Total de participantes que enviaram resultados para CAM 134 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 2,3x10 4 ufc g -1 (4,36 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,01 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 4 (2 <AE / 2 >AE) Média dos resultados dos participantes 2,3x10 4 ufc g -1 (4,36 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,14 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ da FEPTU 1,3x10 4 ufc g -1 (4,11 log 10) Coliformes Total de participantes que enviaram resultados para coliformes 101 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 7 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 2,0x10 2 ufc g -1 (2,30 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,05 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 13 (7 <AE / 6 >AE) Média dos resultados dos participantes 1,8x10 2 ufc g -1 (2,26 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,38 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ da FEPTU 4,7x10 2 ufc g -1 (2,67 log 10) Total de amostras enviadas 145 Relatórios não devolvidos 5 Relatório devolvido amostra não analisada 2 * Desvio padrão (DP) robusto baseado na mediana dos desvios absolutos relativamente à mediana dos participantes (MAD). O valor do desvio padrão estabelecido ( ) utilizado para cálculo dos z-scores em todos os parâmetros é

5 4

6 5

7 6

8 7

9 8

10 9

11 10

12 Amostra S0546 Conteúdo da amostra: Listeria innocua (10³), Listeria monocytogenes (10³), Enterobacter cloacae (10²), Bacillus circulans (<10) e Staphylococcus xylosus (10²). Todas as contagens são apresentadas como unidades formadoras de colónias (ufc) por ml de amostra reconstituída. Resultados esperados: Ensaios Resultado esperado Resultado do laboratório PHE score para Avaliação do Desempenho z-score B. cereus presuntivo <10 ufc g -1 Estafilococos coagulase-positiva <10 ufc g -1 Listeria spp. 7,3x10 2 7,3x10 3 ufc g -1 L. monocytogenes 3,2x10 2 3,2x10 3 ufc g -1 Contagem de aeróbios mesófilos (CAM) 1,8x10 3 1,8x10 4 ufc g -1 Coliformes 3,4x10 2 3,4x10 3 ufc g -1 NE - Não examinado Comentários do Desempenho: B. cereus presuntivo Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de B. cereus presuntivo 111 Participantes que enviaram corretamente a ausência 109 (98%) Estafilococos coagulase-positiva Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de estafilococos coagulase-positiva 131 Participantes que enviaram corretamente a ausência 114 (87%) Listeria spp. Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de Listeria spp. 104 Participantes que enviaram corretamente a presença 103 (99%) Participantes que efetuaram a contagem 96 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 1 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 2,3x10 3 ufc g -1 (3,36 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,03 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 6 (4 <AE / 2 >AE) Média dos resultados dos participantes 2,3x10 3 ufc g -1 (3,36 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,25 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ do FEPTU (EN/ISO ) 2,9x10 3 ufc g -1 (3,46 log 10) Listeria monocytogenes Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de Listeria monocytogenes 118 Participantes que enviaram corretamente a presença 115 (97%) Participantes que efetuaram a contagem 111 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 2 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 1,0x10 3 ufc g -1 (3,00 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,03 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 11 (7 <AE / 4 >AE) Média dos resultados dos participantes 1,0x10 3 ufc g -1 (3,00 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,25 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ do FEPTU (EN/ISO ) 1,5x10 3 ufc g -1 (3,18 log 10) 11

13 Contagem de aeróbios mesófilos (CAM) Total de participantes que enviaram resultados para CAM 132 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 5,7x10 3 ufc g -1 (3,75 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,02 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 5 (1 <AE / 4 >AE) Média dos resultados dos participantes 5,7x10 3 ufc g -1 (3,75 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,17 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ da FEPTU 7,4x10 3 ufc g -1 (3,87 log 10) Coliformes Total de participantes que enviaram resultados para coliformes 101 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 2 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 1,1x10 3 ufc g -1 (3,03 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,03 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 5 (4 <AE / 1 >AE) Média dos resultados dos participantes 1,1x10 3 ufc g -1 (3,03 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,21 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ da FEPTU 9,0x10 2 ufc g -1 (2,95 log 10) Total de amostras enviadas 145 Relatórios não devolvidos 5 Relatório devolvido amostra não analisada 3 * Desvio padrão (DP) robusto baseado na mediana dos desvios absolutos relativamente à mediana dos participantes (MAD). O valor do desvio padrão estabelecido ( ) utilizado para cálculo dos z-scores em todos os parâmetros é

14 13

15 14

16 15

17 16

18 17

19 18

20 19

21 Avaliação de desempenho A avaliação do desempenho tem por finalidade permitir que os laboratórios identifiquem problemas sistemáticos nos seus ensaios e é efetuada após cada distribuição. É atribuída uma pontuação ( score ) aos resultados reportados para cada amostra, com o objetivo de ajudar os participantes na avaliação do seu desempenho. É atribuída uma pontuação cumulativa ( score ) aos resultados de todos os ensaios de cada participante referente ao desempenho na distribuição em curso e nas cinco anteriores. A pontuação cumulativa dos participantes atribuída a cada um dos ensaios é comparada com a pontuação máxima possível após cada distribuição. O seu laboratório examinou amostras nas últimas 6 distribuições. Análise de patogénicos A sua pontuação total é de um máximo possível de ( %) CAM A sua pontuação total é de um máximo possível de ( %) Organismos indicadores A sua pontuação total é de um máximo possível de ( %) Distribuição Amostra Ensaio Score % Amostra Ensaio Score % S0545 Patogénico S0546 Patogénico S0545 CAM S0546 CAM S0545 Indicador S0546 Indicador S0541 Patogénico S0542 Patogénico S0541 CAM S0542 CAM S0541 Indicador S0542 Indicador S0537 Patogénico S0538 Patogénico S0537 CAM S0538 CAM S0537 Indicador S0538 Indicador S0533 Patogénico S0534 Patogénico S0533 CAM S0534 CAM S0533 Indicador S0534 Indicador S0529 Patogénico S0530 Patogénico S0529 CAM S0530 CAM S0529 Indicador S0530 Indicador S0525 Patogénico S0526 Patogénico S0525 CAM S0526 CAM S0525 Indicador S0526 Indicador Comentário da avaliação do desempenho: Os laboratórios que obtenham menos que 70% da pontuação máxima possível, têm, provavelmente, problemas significativos nos seus ensaios e são aconselhados a a) consultar os comentários específicos dos relatórios b) consultar o website c) contactar os organizadores para aconselhamento 20

22 Comentários específicos Amostra S Estafilococos coagulase-positiva Dezassete participantes (13%) reportaram incorretamente a presença de estafilococos coagulase-positiva nesta amostra. Considerando os participantes que forneceram informação relativa aos meios utilizados: dez referiram que utilizaram Baird-Parker agar (BP) e quatro Rabbit Plasma Fibrinogen agar (RPF). A estirpe de Staphylococcus xylosus presente nesta amostra produz lecitinase pelo que em BP agar as colónias apresentavam um halo transparente. Contudo, em RPF agar o Staphylococcus xylosus produzia colónias negras pequenas sem qualquer halo transparente. Relembram-se os participantes que deverão ser efetuadas provas de confirmação as colónias negras / cinzentas que produzem um halo transparente no meio BP agar. A estirpe de Staphylococcus xylosus incluída nesta amostra era coagulase e DNase negativa. Comentários gerais Os gráficos e tabelas não incluem os dados dos participantes que não forneceram informação relativa aos métodos e condições do ensaio. Encorajamos todos os participantes a reportar estes detalhes. Informam-se os participantes que coluna Count censored values inclui os dados dos laboratórios que reportaram: um valor não mensurável um resultado incorretamente reportado como detetado ou não detetado dados relativos aos métodos mas não reportaram resultados Informam-se os participantes que os PHE Microbiology Services publicaram recentemente o método PHE relativo à Contagem de estafilococos coagulase-positiva (Staphylococcus aureus e outras espécies) em géneros alimentícios. Está disponível em: 21

23 Resolução de Problemas Checklist para Garantia da Qualidade 1. Métodos Utiliza métodos normalizados ou validados, claramente documentados para pesquisa, identificação e contagem? 2. Meios de cultura Os meios de cultura que utiliza permitem um ótimo isolamento dos microrganismos alvo? Tem implementados procedimentos de controlo de qualidade? 3. Equipamento O equipamento utilizado (estufas, frigoríficos, instrumentos de medição, etc.) está calibrado e é monitorizado regularmente? 4. Equipa / Pessoal Todo o pessoal do laboratório está habilitado e familiarizado com todos os procedimentos? 5. Controlo Interno de Qualidade (CIQ) Tem implementados procedimentos adequados para CIQ, assim como linhas de orientação documentadas para tratamento de não conformidades? 6. Boas Práticas de Laboratório (BPL) Todo o pessoal adere de uma forma sistemática às BPL? Se ocorrer contaminação cruzada com amostras de Avaliação Externa da Qualidade (AEQ), o mesmo pode acontecer com as amostras de rotina. 7. Procedimentos administrativos Os procedimentos de numeração e de escrita do seu laboratório são adequados? Se reportar incorretamente resultados AEQ, o mesmo pode acontecer nas amostras de rotina. Resultados Falsos Positivos Os resultados falsos positivos podem ser devidos a contaminação cruzada (a partir de outras amostras ou estirpes de controlo), má identificação de microrganismos presentes na amostra ou erros no registo de resultados. Este tipo de resultados pode originar uma desnecessária eliminação do produto com sérias implicações financeiras. Resultados Falsos Negativos Existem inúmeras causas para os resultados falsos negativos incluindo falhas do equipamento ou meios de cultura, métodos insuficientemente sensíveis, má identificação de microrganismos na amostra, equipa técnica inadequadamente treinada ou erros no registo de resultados. Este tipo de resultados pode ter sérias implicações em saúde pública. Contagens Resultados fora da amplitude esperada (AE) Os resultados fora da amplitude esperada podem ser devidos a problemas com meios de cultura ou condições de incubação, erros na preparação de diluições, amostra reconstituída mantida à temperatura ambiente por um período de tempo superior ao recomendado, erros na contagem de colónias, no cálculo, ou no registo de resultados. Aconselham-se os participantes a investigar as causas destes resultados incorretos, particularmente se estes ocorrerem repetidamente. Tais resultados podem originar uma apreciação errada do alimento sob o ponto de vista microbiológico. Amostras de Repetição Os participantes devem, sempre que possível, determinar a(s) causa(s) dos resultados falsos positivos ou falsos negativos e dos resultados fora da AE e solicitar amostras de repetição de forma a garantir que a causa do erro foi eliminada. As amostras de repetição são livres de encargos e serão enviadas na distribuição seguinte à receção do pedido. Se forem pedidas para envio imediato, terão custos de expedição. Aconselhamento e Comentários Os organizadores do Programa estão disponíveis para ajudar na resolução de questões relacionadas com a análise microbiológica de amostras de alimentos. Quaisquer comentários devem ser dirigidos aos organizadores. Fim do relatório 22