Aneta Stranc e Anitha Tallam. Este relatório não pode ser reproduzido sem a autorização dos responsáveis pelo Programa.

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1 RELATÓRIO STANDARD SCHEME DISTRIBUIÇÃO Nº 260 AMOSTRAS S0557 e S0558 Data do ensaio: setembro 2014 Data limite de envio de resultados: 09 de outubro de 2014 Data do relatório: 31 de outubro de 2014 Preparação de amostras e controlo da qualidade Dados analisados / Relatório elaborado: Relatório autorizado: Relatório traduzido, compilado e verificado: Consultores: Morolake Adedeji, Stephanie Foster, Thamayanthy Ramesh, Aneta Stranc e Anitha Tallam Manchari Rajkumar e Nita Patel Manchari Rajkumar e Nita Patel Cristina Belo Correia e Isabel Campos Cunha Mª Isabel Santos e Mª Margarida Saraiva Este relatório não pode ser reproduzido sem a autorização dos responsáveis pelo Programa. POR FAVOR VERIFIQUE NO SEU RELATÓRIO SE O NÚMERO DE IDENTIFICAÇÃO DO LABORATÓRIO ESTÁ CORRECTO INSTITUTO NACIONAL DE SAÚDE DR. RICARDO JORGE, I.P. Programa Nacional de Avaliação Externa da Qualidade Microbiologia de Alimentos Lab. Microbiologia dos Alimentos Lab. Microbiologia dos Alimentos Av. Padre Cruz Rua Alexandre Herculano, Lisboa Porto Telef.: Telef.: /33/00 Fax Fax Cristina.Belo@insa.min-saude.pt Isabel.Cunha@insa.min-saude.pt

2 Informações gerais sobre o Esquema, amostras, controlo de qualidade, entre outras, estão incluídas em A Guide to the use of the PHE Proficiency Testing Schemes for Food and Water Microbiology, disponível em Caso necessite de informação específica sobre avaliação de desempenho, sistema de pontuação, estatística, etc, consulte o documento Guide to Scoring Systems and Statistics used for the PHE Proficiency Testing Schemes for Food and Water Microbiology, também disponível em Controlo da Qualidade FEPTU: Para evidenciar a homogeneidade da amostra são selecionados aleatoriamente do lote 10 frascos (no mínimo) e analisados, em duplicado, para os parâmetros que requerem quantificação; para a deteção dos patogénicos em causa são examinados 10 frascos. Para evidenciar a estabilidade da amostra são selecionados aleatoriamente do lote 9 frascos (no mínimo) e analisados durante o período de distribuição, tanto para a quantificação como para a deteção de patogénicos. Os resultados destes ensaios de controlo de qualidade são obtidos utilizando métodos baseados em normas ISO e estão incluídos nos Resultados Esperados Preliminares, constituindo uma orientação em relação aos valores esperados. Estes Resultados Esperados Preliminares são enviados a todos os participantes, por correio eletrónico. z-scores Orientações gerais Os resultados das contagens dos participantes são convertidos em z-scores, utilizando a seguinte fórmula: Z = (x - X) σ x = resultado do laboratório participante (valor expresso em log 10) X = valor alvo (mediana de consenso dos resultados dos participantes - valor expresso em log 10 ) σ = desvio padrão estabelecido para o ensaio (calculado pelo FEPTU) O valor σ expressa a diferença aceitável entre o resultado individual do laboratório participante e a mediana de consenso dos resultados dos participantes. No Standard Scheme, o valor σ utilizado para calcular os z-scores para todos os parâmetros é 0,35. Embora os participantes devam interpretar os seus z-scores no contexto do seu laboratório, estes podem ser interpretados da seguinte forma: z = a z = -2 a ou +2 a z = <-3.00 ou >+3.00 satisfatório questionável não satisfatório De uma forma geral, recomenda-se que os z-scores que ultrapassem o valor ± 2.0 sejam investigados de forma a esclarecer a causa provável. A PHE recomenda que todos os resultados questionáveis ou não satisfatórios sejam investigados. Os gráficos com os resultados dos participantes são compilados utilizando os procedimentos descritos no Guide to Scoring Systems and Statistics para a Avaliação de desempenho atribuída pela PHE. Os z-scores estão incluídos unicamente nas páginas específicas para cada amostra, sendo as linhas correspondentes deixadas em branco nos casos em que um z-score não é aplicável. Se detetou algum problema nos ensaios, consulte a secção Resolução de problemas na página 27 e solicite uma amostra de repetição. Lembramos que uma identificação incorreta ou incompleta de patogénicos em amostras de alimentos pode ter sérias implicações em saúde pública. Do mesmo modo, os níveis de microrganismos reportados na amostra podem afetar o destino subsequente do produto. A finalidade do sistema de pontuação é chamar a atenção para resultados incorretos ou fora da amplitude esperada (AE). Os participantes que reportem contagens fora da AE, de uma forma esporádica, não deverão ficar excessivamente alarmados, devendo, no entanto esclarecer o motivo do resultado fora dos limites estabelecidos. Os resultados sumariados na folha de avaliação do desempenho incluída neste relatório, fornecem uma indicação mais eficiente relativamente à existência de problemas sistemáticos nos ensaios microbiológicos. Contactos INSA Dr. Ricardo Jorge Cristina Belo Correia - Telef.: Cristina.Belo@insa.min-saude.pt ; Fax: Isabel Campos Cunha Telef.: /33/00 Isabel.Cunha@insa.min-saude.pt; Fax: Acreditação: O PHE Standard EQA Scheme está acreditado pelo United Kingdom Accreditation Service (UKAS) de acordo com a ISO/IEC 17043: Conformity assessment - General requirements for proficiency testing. 1

3 Amostra S0557 Conteúdo da amostra: Staphylococcus aureus (10 2 ) (estirpe selvagem ), Listeria innocua (10²) (estirpe selvagem ), Listeria monocytogenes (10²) (estirpe selvagem ) e Citrobacter braakii (10²) (estirpe selvagem ). Todas as contagens são apresentadas como unidades formadoras de colónias (ufc) por ml de amostra reconstituída. Resultados esperados: Ensaios Resultado esperado Resultado do laboratório PHE score para Avaliação do Desempenho z-score Estafilococos coagulase-positiva 1,7x10 2 1,7x10 3 ufc g -1 Listeria spp. 8,2x10 1 8,2x10 2 ufc g -1 L. monocytogenes 2,9x10 1 3,5x10 2 ufc g -1 Salmonella spp. Contagem de aeróbios mesófilos (CAM) Não detetada em 25g 4,1x10 2 4,1x10 3 ufc g -1 Coliformes 4,9x10 1 5,9x10 2 ufc g -1 NE - Não examinado; N/A - Não Aplicável Comentários do Desempenho: Estafilococos coagulase-positiva Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de estafilococos coagulase-positiva 199 Participantes que enviaram corretamente a presença 199 (100%) Participantes que efetuaram a contagem 198 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 1 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 5,5x10 2 ufc g -1 (2,74 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,01 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 10 (6 <AE / 4 >AE) Média dos resultados dos participantes 5,6x10 2 ufc g -1 (2,74 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,14 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ do FEPTU (EN/ISO ) 5,4x10 2 ufc g -1 (2,73 log 10) Listeria spp. Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de Listeria spp. 147 Participantes que enviaram corretamente a presença 145 (99%) Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 3 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 2,6x10 2 ufc g -1 (2,41 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,04 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 25 (12 <AE / 13 >AE) Média dos resultados dos participantes 2,6x10 2 ufc g -1 (2,41 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,36 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ do FEPTU (EN/ISO ) 3,7x10 2 ufc g -1 (2,57 log 10) Listeria monocytogenes Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de Listeria monocytogenes 184 Participantes que enviaram corretamente a presença 175 (95%) Participantes que efetuaram a contagem 169 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 9 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 1,1x10 2 ufc g -1 (2,04 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,03 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 23 (13 <AE / 10 >AE) Média dos resultados dos participantes 1,1x10 2 ufc g -1 (2,04 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,34 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ do FEPTU (EN/ISO ) 1,2x10 2 ufc g -1 (2,08 log 10) 2

4 Salmonella spp. Total de participantes que enviaram resultados para Salmonella spp. 207 Participantes que enviaram corretamente a ausência 205 (99%) Contagem de aeróbios mesófilos (CAM) Total de participantes que enviaram resultados para CAM 204 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 3 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 1,3x10 3 ufc g -1 (3,11 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,01 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 12 (4 <AE / 8 >AE) Média dos resultados dos participantes 1,3x10 3 ufc g -1 (3,11 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,16 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ da FEPTU 1,2x10 3 ufc g -1 (3,08 log 10) Coliformes Total de participantes que enviaram resultados para coliformes 151 Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 4 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 1,8x10 2 ufc g -1 (2,27 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,03 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 23 (13 <AE / 10 >AE) Média dos resultados dos participantes 1,8x10 2 ufc g -1 (2,27 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,30 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ da FEPTU 2,0x10 2 ufc g -1 (2,30 log 10) Total de amostras enviadas 215 Relatórios não devolvidos 2 Relatório devolvido amostra não analisada 1 * Desvio padrão (DP) robusto baseado na mediana dos desvios absolutos relativamente à mediana dos participantes (MAD). O valor do desvio padrão estabelecido ( ) utilizado para cálculo dos z-scores em todos os parâmetros é

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14 Amostra S0558 Conteúdo da amostra: Listeria seeligeri (10 4 ) (estirpe selvagem ), Salmonella Pensacola 1,9,12 : m,t ; [1,2] (10 2 ) (estirpe selvagem ), Enterococcus faecium (10 2 ) (estirpe selvagem ) e Pseudomonas putida (10 4 ) (estirpe selvagem ). Todas as contagens são apresentadas como unidades formadoras de colónias (ufc) por ml de amostra reconstituída. Resultados esperados: Ensaios Resultado esperado Resultado do laboratório PHE score para Avaliação do Desempenho z-score Estafilococos coagulase-positiva <10 ufc g -1 Listeria spp. 1,5x10 3 6,1x10 4 ufc g -1 L. monocytogenes <10 ufc g -1 Salmonella spp. Contagem de aeróbios mesófilos (CAM) Detetada em 25g 1,0x10 4 1,0x10 5 ufc g -1 Coliformes <10 ufc g -1 NE - Não examinado; N/A - Não Aplicável Comentários do Desempenho: Estafilococos coagulase-positiva Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de estafilococos coagulase-positiva 199 Participantes que enviaram corretamente a ausência 197 (99%) Listeria spp. Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de Listeria spp. 144 Participantes que enviaram corretamente a presença 128 (89%) Participantes que enviaram resultados baixos não mensuráveis 13 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 1,9x10 4 ufc g -1 (4,28 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,04 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 19 (12 <AE / 7 >AE) Média dos resultados dos participantes 1,7x10 4 ufc g -1 (4,22 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,40 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ do FEPTU (EN/ISO ) 2,4x10 4 ufc g -1 (4,38 log 10) Listeria monocytogenes Total de participantes que enviaram resultados para a contagem de Listeria monocytogenes 183 Participantes que enviaram corretamente a ausência 180 (98%) Salmonella spp. Total de participantes que enviaram resultados para Salmonella spp. 207 Participantes que enviaram corretamente a presença 204 (99%) 13

15 Contagem de aeróbios mesófilos (CAM) Total de participantes que enviaram resultados para CAM 204 Valor alvo (mediana dos resultados dos participantes) 3,2x10 4 ufc g -1 (4,51 log 10) Incerteza do valor alvo (Ux) 0,02 Nº de contagens fora da amplitude esperada (AE) 19 (11 <AE / 8 >AE) Média dos resultados dos participantes 3,2x10 4 ufc g -1 (4,51 log 10) *Desvio padrão dos resultados dos participantes 0,22 log 10 ufc g -1 Mediana dos resultados do CQ da FEPTU 2,9x10 4 ufc g -1 (4,46 log 10) Coliformes Total de participantes que enviaram resultados para coliformes 148 Participantes que enviaram corretamente a ausência Não aplicável (Ver Comentários específicos pág. 24) Total de amostras enviadas 215 Relatórios não devolvidos 2 Relatório devolvido amostra não analisada 2 * Desvio padrão (DP) robusto baseado na mediana dos desvios absolutos relativamente à mediana dos participantes (MAD). O valor do desvio padrão estabelecido ( ) utilizado para cálculo dos z-scores em todos os parâmetros é

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23 Avaliação de desempenho A avaliação do desempenho tem por finalidade permitir que os laboratórios identifiquem problemas sistemáticos nos seus ensaios e é efetuada após cada distribuição. É atribuída uma pontuação ( score ) aos resultados reportados para cada amostra, com o objetivo de ajudar os participantes na avaliação do seu desempenho. É atribuída uma pontuação cumulativa ( score ) aos resultados de todos os ensaios de cada participante referente ao desempenho na distribuição em curso e nas cinco anteriores. A pontuação cumulativa dos participantes atribuída a cada um dos ensaios é comparada com a pontuação máxima possível após cada distribuição. O seu laboratório examinou amostras nas últimas 6 distribuições. Análise de patogénicos A sua pontuação total é de um máximo possível de ( %) CAM A sua pontuação total é de um máximo possível de ( %) Organismos indicadores A sua pontuação total é de um máximo possível de ( %) Distribuição Amostra Ensaio Score % Amostra Ensaio Score % S0557 Patogénico S0558 Patogénico S0557 CAM S0558 CAM S0557 Indicador S0558 Indicador S0553 Patogénico S0554 Patogénico S0553 CAM S0554 CAM S0553 Indicador S0554 Indicador S0549 Patogénico S0550 Patogénico S0549 CAM S0550 CAM S0549 Indicador S0550 Indicador S0545 Patogénico S0546 Patogénico S0545 CAM S0546 CAM S0545 Indicador S0546 Indicador S0541 Patogénico S0542 Patogénico S0541 CAM S0542 CAM S0541 Indicador S0542 Indicador S0537 Patogénico S0538 Patogénico S0537 CAM S0538 CAM S0537 Indicador S0538 Indicador Comentário da avaliação do desempenho: Os laboratórios que obtenham menos que 70% da pontuação máxima possível, têm, provavelmente, problemas significativos nos seus ensaios e são aconselhados a a) consultar os comentários específicos dos relatórios b) consultar o website c) contactar os organizadores para aconselhamento 22

24 Comentários gerais métodos Os gráficos e tabelas com informação relativa aos métodos e condições do ensaio utilizados pelos laboratórios não incluem os dados dos participantes que não forneceram essa informação. Encorajamos todos os participantes a reportar estes detalhes. Comentários gerais tabelas referentes aos métodos e condições do ensaio Caso um determinado método seja reportado por menos de dez laboratórios, não são apresentados os resultados relativos à mediana, desvio padrão robusto e amplitude reportada nas tabelas respetivas. Informam-se os participantes que: a coluna Count censored values incluída nas tabelas contempla os dados dos laboratórios que reportaram: um valor não mensurável um resultado incorretamente reportado como detetado ou não detetado relativamente à deteção de patogénicos, os dados apresentados nas tabelas referentes ao método específico utilizado evidenciam apenas as situações em que pelo menos cinco ou mais laboratórios tenham reportado resultados para esse método. A apresentação dos dados com informação relativa aos métodos utilizados pelos laboratórios tem algumas limitações e procura identificar tendências mais do que avaliar detalhes específicos dos métodos. 23

25 Comentários específicos Amostra S0558 Coliformes (parâmetro não pontuado) A ISO 4832: 2006 Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the enumeration of coliforms Colony-count technique, define coliforme como bacteria which, at the specified temperature (i.e. 30 C or 37 C, as agreed) form characteristic colonies in crystal violet neutral red bile lactose agar, and which in the confirmation test cause fermentation of lactose with the production of gas under the test conditions specified in this International Standard. 45% (67/148) dos participantes que efetuaram este ensaio reportaram a presença de coliformes nesta amostra. No Gráfico 1 podem visualizar-se os resultados reportados versus método utilizado (quando esta informação foi fornecida). Gráfico 1 Resultados reportados para coliformes (Amostra S0558) Conteúdo da amostra: Listeria seeligeri, Salmonella Pensacola, Enterococcus faecium e Pseudomonas putida. Esta amostra não continha coliformes, contudo, a estirpe de Salmonella Pensacola presente formou colónias no meio VRBA (Figura 1). Figura 1 Salmonella Pensacola em VRBA, 37 ºC / h 24

26 A ISO 4832: 2006 recomenda a contagem das colónias violáceas que tenham um diâmetro de pelo menos 0,5 mm. Estas são consideradas as colónias típicas de coliformes e não requerem confirmação. A norma requer, adicionalmente, a contagem e confirmação das colónias atípicas, por exemplo, com diâmetro inferior ao referido. O teste de confirmação em Brilliant green lactose bile broth (como recomendado na ISO 4832: 2006) das colónias do VRBA referidas na figura 1, efetuado no Laboratório da FEPTU, confirmou não serem coliformes (Figura 2). Figura 2 Confirmação em Brilliant green lactose bile broth das colónias de VRBA 37 ºC / h (Fig. 1) A Tabela 1 resume os métodos e meios de cultura utilizados pelos laboratórios participantes na quantificação de coliformes (quando esta informação foi fornecida) e correspondente resultado reportado. A análise destes dados sugere que os laboratórios que não efetuaram a confirmação das colónias do VRBA podem ter reportado, incorretamente, um resultado positivo para coliformes. No entanto, a informação referente aos testes de confirmação não foi solicitada aos participantes nesta distribuição. 25

27 Não foi atribuída pontuação a este parâmetro, nesta amostra, por estar presente uma estirpe atípica. A amostra foi enviada com o objetivo de lembrar aos participantes da importância de estar atento a microrganismos não usuais que poderão encontrar na rotina laboratorial, assim como da necessidade de confirmar as colónias atípicas. No caso de reportarem resultados presuntivos, os laboratórios devem referir esse facto. Amostra S0558 Listeria spp. O desvio padrão dos resultados dos participantes para este parâmetro, nesta amostra, foi 0,40 log 10 ufc g -1. A amostra continha Listeria seeligeri. No Laboratório da FEPTU foram observados dois tipos de colónias no meio ALOA; ambos confirmaram como Listeria seeligeri. 26

28 Resolução de Problemas Checklist para Garantia da Qualidade 1. Métodos Utiliza métodos normalizados ou validados, claramente documentados para pesquisa, identificação e contagem? 2. Meios de cultura Os meios de cultura que utiliza permitem um ótimo isolamento dos microrganismos alvo? Tem implementados procedimentos de controlo de qualidade? 3. Equipamento O equipamento utilizado (estufas, frigoríficos, instrumentos de medição, etc.) está calibrado e é monitorizado regularmente? 4. Equipa / Pessoal Todo o pessoal do laboratório está habilitado e familiarizado com todos os procedimentos? 5. Controlo Interno de Qualidade (CIQ) Tem implementados procedimentos adequados para CIQ, assim como linhas de orientação documentadas para tratamento de não conformidades? 6. Boas Práticas de Laboratório (BPL) Todo o pessoal adere de uma forma sistemática às BPL? Se ocorrer contaminação cruzada com amostras de Avaliação Externa da Qualidade (AEQ), o mesmo pode acontecer com as amostras de rotina. 7. Procedimentos administrativos Os procedimentos de numeração e de escrita do seu laboratório são adequados? Se reportar incorretamente resultados AEQ, o mesmo pode acontecer nas amostras de rotina. Resultados Falsos Positivos Os resultados falsos positivos podem ser devidos a contaminação cruzada (a partir de outras amostras ou estirpes de controlo), má identificação de microrganismos presentes na amostra ou erros no registo de resultados. Este tipo de resultados pode originar uma desnecessária eliminação do produto com sérias implicações financeiras. Resultados Falsos Negativos Existem inúmeras causas para os resultados falsos negativos incluindo falhas do equipamento ou meios de cultura, métodos insuficientemente sensíveis, má identificação de microrganismos na amostra, equipa técnica inadequadamente treinada ou erros no registo de resultados. Este tipo de resultados pode ter sérias implicações em saúde pública. Contagens Resultados fora da amplitude esperada (AE) Os resultados fora da amplitude esperada podem ser devidos a problemas com meios de cultura ou condições de incubação, erros na preparação de diluições, amostra reconstituída mantida à temperatura ambiente por um período de tempo superior ao recomendado, erros na contagem de colónias, no cálculo, ou no registo de resultados. Aconselham-se os participantes a investigar as causas destes resultados incorretos, particularmente se estes ocorrerem repetidamente. Tais resultados podem originar uma apreciação errada do alimento sob o ponto de vista microbiológico. Amostras de Repetição Os participantes devem, sempre que possível, determinar a(s) causa(s) dos resultados falsos positivos ou falsos negativos e dos resultados fora da AE e solicitar amostras de repetição de forma a garantir que a causa do erro foi eliminada. As amostras de repetição são livres de encargos e serão enviadas na distribuição seguinte à receção do pedido. Se forem pedidas para envio imediato, terão custos de expedição. Aconselhamento e Comentários Os organizadores do Programa estão disponíveis para ajudar na resolução de questões relacionadas com a análise microbiológica de amostras de alimentos. Quaisquer comentários devem ser dirigidos aos organizadores. Fim do relatório 27