Oficina Analítica. Determinação de Escherichia coli e Coliformes termotolerantes. 1 Copyright year IDEXX Laboratories

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1 Oficina Analítica Determinação de Escherichia coli e Coliformes termotolerantes 1 Copyright year IDEXX Laboratories

2 Legislação

3 ANEXO 20 DA PORTARIA DE CONSOLIDAÇÃO N 5 Dispõe sobre os procedimentos de controle e de vigilância da qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade. Parâmetros: Coliformes Totais e E-coli Heterotroficas Cryptosporidium e Giardia 3 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 3

4 RESOLUÇÃO No 357, DE 17 DE MARÇO DE 2005 complemento CONAMA 274 Dispõe sobre a classificação dos corpos de água e diretrizes ambientais para o seu enquadramento, bem como estabelece as condições e padrões de lançamento de efluentes, e dá outras providências. Parâmetros: Coliformes Termotolerantes ou E-coli ou Enterococcus 4 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 4

5 Resolução RDC nº 275, de 22 de setembro de 2005 Regulamento técnico de características microbiológicas para água mineral natural e água natural Parâmetros: Coliformes Totais E-coli Enterococcus Pseudomonas auruginosa Clostridium perfringens 5 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 5

6 MAPA - Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (Mapa) é responsável pela gestão das políticas públicas de estímulo à agropecuária, pelo fomento do agronegócio e pela regulação e normatização de serviços vinculados ao setor. Parâmetros: Coliformes Totais e E-coli Enterococcus Pseudomonas auruginosa Clostridium perfringens 6 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 6

7 Aprovações

8 Aprovações Association of Official analytical Chemists United States Environmental Protection Agency International World Health Organization U.S. Food and Drug Administration International Standard Organization (Method ) Organizatio Standard Methods for the Examination of Water International Bottled Water Association ns and European Bottled Water Association 8 Copyright year IDEXX Laboratories Wastewater The United States 2012 Pharmacopeia IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 8 American Society for Testing and Materials US Department of Defense

9 Acreditação ISO ISO / IEC acreditação baseiase uma avaliação completa dos sistemas de gestão de qualidade ISO 11133: 2014 refere-se ao teste de preparação, produção, armazenamento e desempenho dos meios de cultura para alimentos, ração animal e água. 9 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 9

10 Standard Methods IDEXX Water são os únicos testes comerciais no Standard Coliform/E. coli Method Colilert, Colilert 18 and Colisure Enterococcus Method Enterolert Quantification Method Quanti-Tray and Quanti-Tray /2000 Heterotrophic Plate Count Method SimPlate *Pseudalert em processo de revisão para publicação 10 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 10

11 11 Copyright year IDEXX Laboratories METODOS ATUAIS PARA O CONTROLE DE COLIFORMES EM AGUA

12 BIOINDICADORES virus, bacterias, parásitos, cianobacterias QUALIDADES DE UM BIOINDICADOR Se encontram em abundancia Resistente as condições ambientais Fácil determinação 12 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 12

15 Coliformes fecais(termotolerantes) : Representantes É um sub-set de coliformes totais Definidos como bacterias que crescem a uma temperatura de 44.5 C (+/- 0.2 C) Consistem das seguintes bacterias coliformes: E. coli K. pnuemoniae Enterobacter spp. 15 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 15

17 METODOS ATUAIS FILTRAÇÃO POR MEMBRANA TUBOS MULTIPLOS ENZIMATICOS Todos os procedimentos atuais para a detecção de coliformes e E. coli em agua se definem de acordo com o método utilizado Detecção de enzimas (β-d- galactosidase e β-d- glucuronidase Fermentação da lactose, a produção de gás, a reação de indol, Tolerância térmica (fecal) 17 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 17

18 Fermentação por Tubos Múltiplos (MTF) Método tradicional de fermentação da Lactose Preparação de meios: Incubar LTB (caldo de lauril triptosa ) até 48 horas a 35 C Teste presuntiva para Coliformes Confirmação em BGLB (caldo Bilis Verde Brillante) 48 horas a 35 C Coliformes totais Confirmação com meio de cultura EC (+mug) 24 horas a 44.5 C E.Coli Leitura dos resultados: Limite de quantificação : 1600 Turbidez Produção de gás Extensivo Controle de Qualidade 18 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 18

19 Filtração por Membrana (FM) M-Endo Resultado presuntivo en 24±2 h Resultados confirmados en 3-4 días Faixa máxima Quantificação : 80 coliformes totais Leitura de Resultados: interpretação subjetiva crescimento confluente colónias sobrepondo Extensivo Controle de Qualidade 19 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 19

20 20 Copyright year IDEXX Laboratories TECNOLOGIA DO SUBSTRATO DEFINIDO

21 SUSTRATO DEFINIDO Colilert Colilert utiliza a Tecnologia do Substrato Definido (DST ) para detectar simultaneamente coliformes totais e E. coli. Para os coliformes crescerem no Colilert, eles usam β-galactosidase para metabolizar ONPG e alterá-lo de incolor para amarelo. E. coli utiliza β-glucuronidase para metabolizar o MUG e criar fluorescência. Como a maioria dos não-coliformes não possuem estas enzimas, eles são incapazes de crescer e interferir. 21 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 21

22 Materiais necessários Reagente Colilert Frasco com ou sem tiossulfato de sódio Estufa regulada a 35 C Lâmpada UV de 365 nm e 6 W de potência Comparador colorimétrico (opcional) 22 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 22

24 LEITURA POSITIVO para E. Coli a amotra emite fluorescencia Amostra incolor NEGATIVO. POSITIVO para Coliformes totais a amostra fica amarelo 24 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 24

25 Quantificação

28 Quanti-Tray 51 MPN Table No wells MPN per 95% 95% giving 100ml Lower Upper positive sample Confidenc Confidenc reaction e Limit e Limit 0 < > infinity 28 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 28

30 Quanti-Tray 2000 MPN Table No of large No of small MPN per 95% Lower 95% Upper wells giving wells giving 100ml Confidence Confidence positive positive sample Limit Limit reaction reaction Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 30

31 Colilert-18 Protocolo especifico para analise de termotolerante, método com incubação em 44.5ºC Ensaio para realização de balneabilidade (água salobra) Ensaio realizado em apenas 18h 31 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 31

32 Colisure Kit para analise de coliformes e e-coli Visualização em CPRG-MUG, Mudança do positivo para magenta. Resultado em 24 a 48h 32 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 32

33 Validade e Armazenamento dos KITS Colilert 12 meses de fabricação ( Brasil chega com 9 meses) Coliter meses de fabricação ( Brasil chega com 13 meses) Colisure - 12 meses de fabricação ( Brasil chega com 9 meses) Temperatura de Armazenamento - 2 a 25 C 33 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 33

34 QC Kit para controle de Qualidade Realize as etapas seguintes à temperatura ambiente: Etapa1: Retire os frascos da caixa. Deixe a temperatura ambiente por 15 minutos. Etapa 2: Abra um frasco e transfira de forma asséptica o disco colorido, localizado sobre o tampão de algodão, para um frasco contendo 200mL de água estéril, não tamponada e sem oxidantes. Identifique a amostra (A, B, C). Eventualmente é possível que o disco grude no frasco. Se isto ocorrer, utilize pinças estéreis para remover o disco com cuidado. Etapa 3: Agite a amostra e deixe repousar por 15 minutos. O disco deve dissolver-se completamente. Após ser dissolvido, misture invertendo o frasco por 10 vezes. Etapa 4: Realize a análise (determinação quantitativa) em duplicata no período de 30 minutos após hidratação conforme seus procedimentos de rotina. Repita as etapas para os demais frascos. 34 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 34

35 Perguntas frequentes o Quais são as condições de armazenamento recomendadas para os testes de microbiologia IDEXX-QC? o Os testes de microbiologia IDEXX-QC devem ser armazenados fechados 10ºC ou menos. o Qual é a vida útil dos testes de microbiologia IDEXX-QC? o Consulte o certificado de análise para saber qual a vida útil do produto. o Os controles de CQ são rastreáveis ou são fornecidos por um fabricante aprovado para cumprir a norma NELAC? o Estas duas opções aplicam-se aos controles de CQ. 35 Copyright year IDEXX Laboratories 2012 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved. 35

38 Contato: Patrícia Gonçalves Vinksnaitis Tel: (11)