PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 1 Modalidade: Com solicitação de bolsas e/ou recursos Trâmite Atual: Manifestação da CPEU Identificação Projeto Institucionalizado a quem pertence: Não se aplica Ano Base: 2013 Título: Coordenador: Unidade: Departamento / Seção: Investigação da Síndrome do Cromossomo X Frágil em Indivíduos com Deficiência Intelectual Atendidos na APAE de Ilha Solteira, SP FLÁVIA CRISTINA RODRIGUES LISONI Faculdade de Engenharia DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA E ZOOTECNIA Telefone: 18-37431934 Email: lisoni@bio.feis.unesp.br Outras Instituições: Local de realização: FEIS Início: 02/01/2013 Término: 31/12/2013 Área Temática 1: Área Temática 2: Grande Área: Linha Programática: Saúde Educação Ciências Biológicas e Fisiológicas Atenção Integral à Criança Palavras-Chave: Síndrome do cromossomo X frágil, Anexo Projeto APAE para PROEX.doc Descrição Projeto de Pesquisa
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 2 Estrutura Metodologia: Extração de DNA de leucócitos O DNA genômico de cada indivíduo será obtido a partir de leucócitos de amostra de sangue venoso periférico, segundo a técnica descrita por Miller e colaboradores (1988), com modificações. Será coletado em tubos vacutainer com EDTA um volume de 5mL de sangue periférico. Em um tubo de polipropileno de 15mL serão adicionados 3,5mL de ficoll paque e 5mL de sangue periférico, este último, transferido com pipeta Pasteur descartável, pela parede do tubo. O material será, então, centrifugado por 30 minutos a 3500 rpm. O sobrenadante (plasma) será retirado e desprezado. O anel de leucócitos será transferido com pipeta Pasteur descartável para outro tubo e o volume de 15mL será completado com PBS 1X. Nova centrifugação será realizada a 3500rpm por 12 minutos. O sobrenadante será retirado com pipeta Pasteur descartável; o pellet será ressuspendido e novamente completado o volume de 15mL com PBS 1X. O material será centrifugado a 3500rpm por 12 minutos e o sobrenadante recolhido com pipeta Pasteur descartável. O pellet de leucócitos será ressuspendido, e em seguida serão adicionados 1mL de PBS 1X, 3mL de Lysis Buffer, 0,2mL de SDS 10%, 50uL de proteinase K (20mg/mL) e 40uL de RNAse (20mg/mL). O material será agitado e incubado a 37 C overnight. Ao pellet de leucócitos será acrescentado 1mL de NaCl 6M saturado. O material será novamente agitado e centrifugado a 3500 rpm por 15 minutos. Com pipeta Pasteur, o sobrenadante será transferido para um novo tubo de 15mL e completado com 10mL de etanol absoluto gelado, para precipitação do DNA. O tubo será invertido delicadamente até a visualização do DNA precipitado, em forma de fios brnacos enovelados. O DNA será, então pescado e colocado em tubo de 1,5mL com 500uL de etanol 70% gelado. O material será ccentrifugado a 14.000rpm por três minutos, o etanol 70% será descartado e o tubo deixado em repouso por 15 minutos. O DNA, em seguida, será diluído em água estéril e incubado a 37 C por três a quatro dias para diluição. Após esse período, o material será dividido em alíquotas e estocado a 0 C. A estimativa da concentração será realizada através de leitura em espectrofotômetro. Investigação de mutações no gene FMR-1 A investigação do polimorfismo de repetições de trinucleotídeos, presente no gene FMR-1, responsável pela Síndrome do Cromossomo X Frágil, será realizado segundo a técnica descrita por Haddad e colaboradores (1996), com modificações. Tal técnica consiste na amplificação da região do gene que contém as repetições CGG, por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). O protocolo se baseia no fato de que as mutações completas sofrerão amplificação sob as condições da técnica indicativa da presença ou ausência da mutação. Após a PCR será aplicado em gel de poliacrilamida. Resultados Esperados: O Projeto pretende quantificar os alunos da APAE de Ilha Solteira, SP, avaliar quantos já tem diagnóstico clínico feito por um geneticista, quantos ainda não foram diagnosticados e estão lá apenas como diagnóstico de deficiência intelectual, além de buscar conhecer a etiologia de algumas síndromes para elucidação dessas. O projeto também visa a realização de uma avaliação molecular, pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), no qual os alunos com deficiência intelectual sem diagnóstico também poderão ter esse diagnóstico, investigando a presença de mutação no gene FMR1. Assim, poderemos ajudá-los a serem encaminhados para grandes centros para um aconselhamento genético mais preciso e focar o tratamento que melhoraria a qualidade de vida desses alunos com deficiência intelectual. Cronograma de Atividades: PLANO DE TRABALHO / CRONOGRAMA DE EXECUÇÃO
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 3 A n á l i s e m o l e c u l a r ( P C R ) X A n á l i s e d e d a d o s X E l a b o r a ç ã o d e r e l a t ó r i o s Release para Mídia: O Projeto pretende quantificar os alunos da APAE de Ilha Solteira, SP, avaliar quantos já tem diagnóstico clínico feito por um geneticista, quantos ainda não foram diagnosticados e estão lá apenas como diagnóstico de deficiência intelectual, além de buscar conhecer a etiologia de algumas síndromes para elucidação dessas. O projeto também visa a realização de uma avaliação molecular, pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), no qual os alunos com deficiência intelectual sem diagnóstico também poderão ter esse diagnóstico, investigando a presença de mutação no gene FMR1. Assim, poderemos ajudá-los a serem encaminhados para grandes centros para um aconselhamento genético mais preciso e focar o tratamento que melhoraria a qualidade de vida desses alunos com deficiência intelectual.
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 4 Característica do Projeto Participação de Alunos Apenas um aluno participará deste projeto com bolsa e outros 3 alunos como voluntários neste projeto de extensão. Nível de Exequibilidade O projeto é exequível na Instituição pois temos todos os componentes para que ele ocorra, mas para alcançarmos o objetivo de fazermos essa tecnologia de biologia molecular em 40 alunos matriculados na APAE de Ilha Solteira solicitamos verba para a compra de reagentes, mas se este for negado conseguiremos fazer a tecnologia para apenas 20 indivíduos. Visibilidade para a Universidade Pretende-se realizar a divulgação deste trabalho por meio de confecção de artigos que serão enviados a revistas especializadas na área de saúde e ainda por divulgação, apresentando trabalhos em eventos científicos. Também é de interesse para a Universidade a realização de projetos que envolvam alunos da APAE, pois tem um caráter de parceria entre a Universidade e a Prefeitura Local. Indicadores de Impacto Interno (no âmbito da Universidade) Esse projeto tem como objetivo propiciar a complementação da formação do aluno de Ciências Biológicas, por meio da aplicação prática na comunidade. Assim o impacto do projeto nas atividades de ensino e formação seria realizando palestras, simpósios e debates interferindo na formação da comunidade acadêmica. Indicadores de Impacto Externo (fora do âmbito da Universidade) O impacto do projeto na realidade da comunidade externa envolvida seria melhorando as condições de vida da comunidade em questão, alunos matriculados na APAE, construindo estratégias para futuras transformações. Articulação com Ensino e Pesquisa Esse projeto se articula com o ensino de genética devido a exemplos práticos que podemos ver na própria APAE, não vista antes apenas nos livros e também se articula com a pesquisa, pois podemos com o sangue dos alunos matriculados na APAE, fazermos técnicas de biologia molecular, como extração de DNA, reação em cadeia da polimerase (PCR) e ainda eletroforese em gel de poliacrilamida, gerando publicações científicas.
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 5 Importância na Formação do Aluno A extensão possibilita ao aluno uma formação mais completa, já que interage com a sociedade neste projeto, contribuindo para a sua formação técnica relacionado com problemas que um dia poderá se deparar e apenas com o ensino ele não conseguiria. Então, esse projeto possibilitará uma formação integral do aluno de Ciências Biológicas frente aos desafios profissionais e não apenas acadêmico. Potencial para geração de produtos Com este projeto seremos capazes de publicação de artigos em boas revistas e participação em eventos com apresentação de resumos. Mérito do Projeto Caracterização do Projeto como extensão Esse projeto de extensão tem caráter educativo, científico e tecnológico envolvendo docentes e discentes (bolsista e voluntários), sendo desenvolvido junto à comunidade em um período de um ano. Mérito do Projeto Coerência entre os objetivos e a fundamentação teórica A base teórica de genética e biologia molecular dão suporte à ação extensionista e ao tema tratado neste projeto de extensão. Os objetivos deste projeto de extensão estão coerentes com a fundamentação teórica dentro do contexto de que a comunidade usufruirá dos resultados como a melhora de qualidade de vida dos matriculados na APAE.
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 6 Produção Científica Organização de livros Nacionais Organização de livros Internacionais Livros publicados Nacionais Livros publicados Internacionais Capítulos publicados Nacionais Capítulos publicados Internacionais Artigos publicados em periódicos Nacionais Artigos publicados em periódicos Internacionais
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 7 Resumo em Eventos Nacionais Resumo em Eventos Internacionais Resumo Expandido em Eventos Nacionais Resumo Expandido em Eventos Internacionais Apresentação de Trabalhos em Eventos - oral Nacional Apresentação de Trabalhos em Eventos - pôster Internacional Textos em jornais Nacionais (especificar jornal e data) Textos em jornais Internacionais (especificar jornal e data) Textos em revistas Nacionais (especificar revista e data)
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 8 Textos em revistas Internacionais (especificar revista e data) TCC(s) Monografias Dissertações Teses Bolsas de Iniciação Científica (IC)/Agência Material Audiovisual
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 9 Participantes Nome Email Participante Função FLÁVIA CRISTINA RODRIGUES LISONI lisoni@bio.feis.unesp.br Docente Coordenador Jose Paulo Artencio Junior jose01050@aluno.feis.unesp.br Aluno Voluntário Solicitação Bolsas - PROEX Bolsas solicitadas: 1 Atividades previstas: O aluno levantará os dados referentes a etiologia, perante os prontuários. O aluno também extrairá o DNA dos matriculados na APAE escolhidos e fará a PCR nessas amostras. O aluno ainda avaliará e interpretará os resultados. Público-Alvo Quantidade Característica 1 Característica 2 Característica 3 40 deficientes mentais - -
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 10 Detalhes dos Participantes Nome : Tipo Participante: Função: Nível Acadêmico: Unidade Universitária: Departamento / Seção: FLÁVIA CRISTINA RODRIGUES LISONI Docente Coordenador Pós-Doutorado Faculdade de Engenharia DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA E ZOOTECNIA Data Início: 02/01/2013 Data Fim: 31/12/2013 Carga Horária Semanal: 4 Atividade Prevista: Coordenar os alunos e orientá-los nas tecnologias de biologia molecular Observação: Nome : Tipo Participante: Função: Nível Acadêmico: Jose Paulo Artencio Junior Aluno Voluntário Graduando Unidade Universitária: Departamento / Seção: Data Início: 02/01/2013 Data Fim: 31/12/2013 Carga Horária Semanal: 8 Atividade Prevista: Observação: O aluno levantará os dados referentes a etiologia, perante os prontuários. O aluno também extrairá o DNA dos matriculados na APAE escolhidos e fará a PCR nessas amostras. O aluno ainda avaliará e interpretará os resultados.
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 11 Recursos Solicitados à PROEX Tipo Recurso Descrição Quantidade Valor Unitário R$ Total R$ Material de consumo materiais descartáveis, 1 3.000,00 3.000,00 Total: R$ 3.000,00 Captado Governamental Total: R$ 0,00 Captado Não Governamental Total: R$ 0,00 Total de Recursos: R$ 3.000,00
PROEX - Projeto de Extensão Universitária Página 12 Parecer Local Departamento Parecer do Relator Concluído em: 16/08/2012 Trata-se de atividade exequível, com metodologia adequada e participação de alunos da graduação, visando identificar anomalia genética para melhor orientação no tratamento dos efeitos da mesma. Serão aplicadas técnicas e conhecimentos gerados pela pesquisa, ensinados em aula e que serão utilizados na prática, complementando o aprendizado dos alunos e prestando seviços à comunidade. Se possível, sugiro relacionar todos os quatro alunos colaboradores, ao invés de apenas um, como está no projeto. Concluído em: Manifestação 21/08/2012 Informamos que o atendimento da sugestão do relator só será possível após o início do Projeto de Extensão, quando ocorrerá a seleção dos alunos colaboradores. Aprovado "Ad referendum". Situação Aprovado Data da análise 21/08/2012 CPEU Parecer do Relator Concluído em: 26/09/2012 Verifica-se que o projeto está bem redigido e trata-se de um assunto atual e que poderá, mediante os resultados obtidos, trazer importantes informações para a orientação de encaminhamento médico e melhoria da qualidade de vida dos participantes. Os resultados obtidos, após sua divulgação, também servirão de referência para estudos semelhantes em outras localidades com presença desta entidade de assistência. Haverá envolvimento de alunos e o projeto também possui cunho científico e didático. Por entendermos que há envolvimento de alunos, docentes, Universidade, Unidade Assistencial e Sociedade, consideramos o projeto de extenção e a solictação de bolsa e ajuda financeira, está dentro da necessidade para a execução do projeto. Sendo assim, somos de parecer favorável a aprovação do mesmo. Apenas alertamos, por envolver seres humanos, provavelmente há a necessidade do parecer da comissão de ética.