CARACTERIZAÇÃO DE COMPOSTOS FENÓLICOS EM RESÍDUO DE FRUTAS E HORTALIÇAS POR UPLC-MS Mônica C. P. dos Santos; Mariana P. Seljan ; Mariana S. L. Ferreira; Luiz C. Cameron; Édira C. B. de A. Gonçalves.
Introdução Caracterização Estabilidade Potencial antioxidante Carotenoides e fenólicos Figura 1. Esquema das matérias-primas utilizadas para elaboração da FFH (MARTINS et al., 2011). Figura 2. Fluxograma de elaboração da FFH (FERREIRA et al., 2015) Figura 3. Farinha de frutas e hortaliças (FFH). Fonte: Acervo próprio. 2
Objetivo geral Caracterizar os compostos fenólicos extraídos de resíduo de frutas e hortaliças por UPLC- MS, visando a obtenção de um ingrediente funcional. 3
Pesar 2g de FFH Transferir para frasco âmbar Solventes(v/v): Etanol:água (100:0) Etanol:Água (75:25) Etanol:Água (50:50) Etanol:Água (25:75) Etanol:Água (0:100) Triplicata *1h, 6h e 24h. 30 extratos UPLC-MS Adicionar 30 ml do extrator Incubar à 20ºC ou 40 C ± 0.2ºC com agitação constante* Centrifugar Filtrar Remoção do solvente à vácuo Filtrar Reconstituído UPLC-MS Figura 11. Fluxograma da extração convencional. 4
Metodologia Resíduo de frutas e hortaliças Fenólicos Atividade antioxidante Fenólicos totais UPLC-QTOF-MS (Progenesis)* DPPH Figura 12. Fluxograma das análises realizadas em subproduto de frutas e hortaliças. 5
Atividade antioxidante - DPPH (umol Trolox.g-1) Compostos fenólicos (mg.g-1) 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 A1 B1 C1 D1 E1 F1 G1 H1 I1 J1 K1 L1 M1 N1 P1 A2 B2 C2 D2 E2 F2 G2 H2 I2 J2 K2 L2 M2 N2 P2 Extratos 35 30 25 20 15 10 5 0 A1 B1 C1 D1 E1 F1 G1 H1 I1 J1 K1 L1 M1 N1 P1 A2 B2 C2 D2 E2 F2 G2 H2 I2 J2 K2 L2 M2 N2 P2 Extratos Figura 13. Fenólicos totais e atividade antioxidante in vitro de extratos de resíduo de frutas e hortaliças. 6
t(corr)[2], p(corr)[2] t(corr)[2], p(corr)[2] t(corr)[2], p(corr)[2] 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 A E0 E25 E50 E75 E100 X variables 14 16 (98%) 42 (literatura) -0.0-0.2 155 (Progenesis) -0.4-0.6-0.8-1.0-1.1-1.0-0.9-0.8-0.7-0.6-0.5-0.4-0.3-0.2-0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 t(corr)[1], p(corr)[1] C Temperatura 20 Temperatura 40 X variables 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2-0.0-0.2-0.4-0.6-0.8-1.0 B EZinf o 2-20160112_FFH_FENOLICOS EXTRACAO CONVENCIONAL EXTRATORES (M1: PCA-X) - 2016-07-29 13:26:38 (UTC-3) 1 HORA 6 HORAS 24 HORAS X variables 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2-0.0-0.2-0.4-0.6-0.8-1.0-1.1-1.0-0.9-0.8-0.7-0.6-0.5-0.4-0.3-0.2-0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 t(corr)[1], p(corr)[1] -1.1-1.0-0.9-0.8-0.7-0.6-0.5-0.4-0.3-0.2-0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 t(corr)[1], p(corr)[1] Figura 6. Gráficos de APC: Extrator (A), Tempo (B) e Temperatura (C). EZinf o 2-20160112_FFH_FENOLICOS EXTRACAO CONVENCIONAL TEMPERATURA (M1: PCA-X) - 2016-07-29 13:31:49 (UTC-3) 7 EZinf o 2-20160112_FFH_FENOLICOS EXTRACAO CONVENCIONAL TEMPO (M1: PCA-X) - 2016-07-29 13:30:17 (UTC-3)
n de extratos onde os compostos foram identificados 40 C n de extratos onde os compostos foram identificados 20ºC 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 C11 C12 C13 C14 C15 C16 C17 C18 C19 C20 C21 C22 C23 C24 C25 Flavonoides C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 C11 C12 C13 C14 C15 C16 C17 C18 C19 C20 C21 C22 C23 C24 C25 Flavonoides 8 Figura 7. Flavonoides identificados em extratos hidroalcoólicos de resíduo de frutas e hortaliças. P N M L K J I H G F E D C B A P N M L K J I H G F E D C B A
Abundância 20 C 40 C 1,00E+07 1,40E+07 9,00E+06 8,00E+06 7,00E+06 6,00E+06 5,00E+06 4,00E+06 3,00E+06 2,00E+06 1,00E+06 0,00E+00 Flavonoides Ácidos fenólicos Compostos fenólicos Outros A1 B1 C1 D1 E1 F1 G1 H1 I1 J1 K1 L1 M1 N1 P1 1,20E+07 1,00E+07 8,00E+06 6,00E+06 4,00E+06 2,00E+06 0,00E+00 Flavonoides Ácidos fenólicos Outros Compostos fenólicos A2 B2 C2 D2 E2 F2 G2 H2 I2 J2 K2 L2 M2 N2 P2 Figura 10. Abundância de compostos fenólicos identificados em subproduto de frutas e hortaliças à 20 C (A) e 40 C (B). 9
Abundância relativa (%) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 A 1h 6h 24h 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 B 20ºC 40ºC Extratores Figura 11. Gráficos de interações extrator tempo (A) e extrator temperatura (B). 10
20 C 40 C Cinarosideo 6-geranilnaringenina Ácido 4-Hidroxi benzaldeído Ácido 4-Hidroxibenzoico Apigenina Didymin Diosmin Hesperidina Kaempferol-3,7- di-β-d-glicopiranosideo Koparin Luteolina 6-C-glucosideo Naringenina Narirutina Neodiosmin Ácido P-Cumarico Ácido Trans-Cafeico 3% 2% 4% 1% 6% 2% Ácido 3,4-dihidroxi-benzoico 4-Hidroxi benzaldeído Ácido 4-Hidroxibenzoico Apigenina Cinarosideo Didimin Hesperidina kaempferol-3,7- di-β-d-glicopiranosideo Koparin Luteolina 6-C-glucosideo Naringenina Naritutina Ácido P-Coumarico Ácido Trans-cafeico 2% 2% 18% E50 E75 1% 0% 16% 17% 7% 0% 2% 0% 4% 2% 2% 1% 0% 4% 2% 3% 4% 2% 46% 45% Figura 12. Abundância relativa dos compostos identificados em extratos à 20ºC e 40 C 11
Conclusão Diversidade de compostos bioativos Potencial funcional Sinergismo Uso como ingrediente funcional Estudos de perfil toxicológico e testes in vivo. 12
Agradecimentos 13
Referências MARTINS, R. C.; CHIAPETTA, S. C.; PAULA, F. D. De; GONÇALVES, É. C. B. a. Avaliação da vida de prateleira de bebida isotônica elaborada com suco concentrado de frutas e hortaliças congeladas por 30 dias. Alimentos e Nutrição, v. 22, n. 44, p. 623 629, 2011. MEIRA, V. M. Efeitos do licopeno na hepatite induzida por concanavalina a em camundongos. 2016. Universdade Federal do Estado do Rio de Janeiro (UNIRIO), 2016. MEYER, A. S.; HEINONEN, M.; FRANKEL, E. N. Antioxidant interactions of catechin, cyanidin, caffeic acid, quercetin, and ellagic acid on human LDL oxidation. Food Chemistry, v. 61, n. 1 2, p. 71 75, 1998. MILLS, E. N..; MADSEN, C.; SHEWRY, P..; WICHERS, H.. Food allergens of plant origin their molecular and evolutionary relationships. Trends in Food Science & Technology, v. 14, n. 4, p. 145 156, 2003. SILVA, M. C.; SOUZA, V. B. de; THOMAZINI, M.; DA SILVA, E. R.; SMANIOTTO, T.; CARVALHO, R. A. de; GENOVESE, M. I.; FAVARO- TRINDADE, C. S. Use of the jabuticaba (Myrciaria cauliflora) depulping residue toproduce a natural pigment powder with functional properties. LWT - Food Science and Technology, v. 55, n. 1, p. 203 209, 2014. Disponível em: <http://dx.doi.org/10.1016/j.lwt.2013.08.026>. SOUZA, V. B. De; FUJITA, A.; THOMAZINI, M.; DA SILVA, E. R.; LUCON, J. F.; GENOVESE, M. I.; FAVARO-TRINDADE, C. S. Functional properties and stability of spray-dried pigments from Bordo grape (Vitis labrusca) winemaking pomace. Food Chemistry, v. 164, p. 380 386, 2014. Disponível em: <http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2014.05.049>. TSAO, R.; YANG, R. Optimization of a new mobile phase to know the complex and real polyphenolic composition: Towards a total phenolic index using high-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography A, v. 1018, n. 1, p. 29 40, 2003. 14