1 AULA PRÁTICA SOBRE MICROSCOPIA PARTE 1 INTRODUÇÃO: O microscópio de luz é um aparelho que destina-se a observação de objetos muito pequenos, difíceis de serem examinados em detalhes a olho nu. O tipo de microscópio mais utilizado nos estudos citológicos é o composto, que é constituído basicamente por duas lentes convergentes. Neste microscópio a luz atravessa o objeto e o conjunto de lentes antes de atingir o olho, formando uma imagem bidimensional. DESCRIÇÃO DO MICROSCÓPIO I. PARTE MECÂNICA Essencialmente, o microscópio compõe-se de um sistema óptico, as lentes, e um sistema mecânico para sustentação das mesmas. 1. Pé ou Base: é o suporte de sustentação do microscópio, peça que sustenta todas as outras. 2. Corpo, Braço ou Estativa: é a peça que liga o pé à parte superior do microscópio. 3. Platina ou Mesa: dispositivo e forma retangular ou arredondado, disposto paralelamente a direção da base e que se destina à recepção de uma lâmina contendo o material para estudo. No centro da platina existe uma abertura à passagem de luz. Fixada à platina, normalmente, encontra-se uma peça denominada charriot, cuja função é movimentar a lâmina no plano horizontal, sobre a mesma. Dois parafusos, dispostos lateralmente à platina, um sobre o outro, promovem a movimentação do charriot. O parafuso mais externo (de menor diâmetro) permite o deslizamento da lâmina da esquerda para direita e vice-versa. O parafuso de diâmetro maior é responsável pelo movimento da presilha que permite o encaixe e fixação da lâmina.lâmina para frente e para trás. Acoplado charriot, há uma p 4. Fonte de luz: apoiada sobre o pé, existe uma fonte própria de luz. Alguns microscópios possuem apenas um espelho para refletir a luz de uma fonte externa. 5. Filtro: é uma peça de vidro colorida (azul, verde, etc...) fixada a um receptáculo, que torna a luz mais apropriada à observação do material. O filtro azul é usado em microscopia de rotina para transforma a luz amarela da lâmpada em luz branca tipo luz solar. 6. Diafragma ou íris: dispositivo colocado superiormente ao filtro regulável mediante uma alavanca, que controla a intensidade do feixe luminoso que atinge o orifício da platina. A regulagem deste diafragma oferece uma imagem com melhor contraste.
7. Revólver ou Tambor: localizado abaixo do canhão encontra-se o revólver que é uma peça na qual se inserem várias lentes objetivas. O revólver possui ranhuras para que o observador possa gira-lo, para as mudanças da objetiva. 8. Canhão: é a parte superior do microscópio, dotada de movimento de rotação, constituída por uma peça semi-esférica, ligada a um tubo. Na extremidade do tubo encontra-se a lente ocular. 9. Parafuso Macrométrico: na parte lateral do braço existem dois parafusos, geralmente encaixadas um sobre o outro. O de maior diâmetro é o parafuso macrométrico, que permite grandes avanços ou recuos da platina em relação a objetiva. 10. Parafuso Micrométrico: esse parafuso permite pequenos avanços ou recuos do parafuso da platina. Apresenta um menor diâmetro, podendo estar próximo ou associado ao microscópio. 11. Trava: junto ao braço pode existir uma alavanca que trava o movimento do parafuso macrométrico em uma determinada posição, impedindo a movimentação da platina e protegendo as objetivas contra possíveis choques. II. PARTE ÓPTICA 1. Condensadoras: consta de um conjunto de lentes situado abaixo da platina que concentra e torna paralelo o feixe luminoso, fornecendo a luz necessária à iluminação uniforme do objeto em estudo. O parafuso do condensador, localizado lateralmente no braço do microscópio, permite a movimentação das lentes condensadoras que devem ser mantidas na posição mais elevada para obtenção de uma iluminação uniforme. 2. Objetivas: o microscópio possui, geralmente, quatro objetivas. Toda objetiva traz gravado o aumento que proporciona (o número superior e em caracteres maiores). O segundo número gravado constitui detalhe de óptica e se refere a abertura numérica da lente. Ex.: A objetiva de 100x tem as seguintes especificações: 100x/0.32 e 160/0.17, significa o número de vezes que esta objetiva amplia o objeto. 0.32 é o valor da abertura numérica; 160 e a distância (mm) a da rosca da objetiva até a ocular e 0.17 é a espessura dada em mm da lamínula que deve ser usada para esta objetiva. 3. Oculares: é a lente superior do microscópio que se encaixa no tubo. Toda ocular traz gravado o aumento que proporciona. BASES ÓPTICAS DA MICROSCOPIA A luz que atravessa as lentes condensadoras é uniformemente espalhada sob a lâmina e atravessa o objeto, incidindo na lente objetiva. Estando o objeto colocado anteriormente ao foco da lente objetiva, formar-se-á, no plano focal da lente ocular, uma imagem real (que pode ser projetada em um anteparo), maior e invertida. 2 2
A luz, ao atravessar a ocular, formará uma imagem virtual, maior e direita com relação à imagem formada pela objetiva. Entretanto, a imagem final do objeto, proporcionada pelo microscópio, será virtual, ampliada e invertida em relação ao mesmo. E o aumento final da imagem é resultado do produto do aumento proporcionado pelas lentes. O processo de formação da imagem no microscópio pode ser comparado ao sistema empregado na projeção de um slide (Fig. 1), no qual, temos a formação de uma imagem real e invertida do objeto original. 3 1 2 3 4 5 6 7 Fig. 1 Esquema do trajeto da luz no processo de formação da imagem em um sistema óptico hipotético (extraída de A Célula Carvalho, H.F. & Recco-Pimentel, S.H., 2007). 1. Fonte de luz. 2. Um sistema de lentes com função de concentrar a luz sobre o objeto (lâmina ou slide), que no caso do microscópio, se chama condensador. 3. O objeto que é atravessado pela luz (material biológico colocado sobre a lâmina, caso do microscópio: ou filme fotográfico, no caso do projetor). 4. Lente objetiva, formando uma imagem real, aumentada e invertida. 5. Uma lente intermediária, situada no plano de formação da imagem, com a função de condensar a luz proveniente desta, sobre a lente ocular, a qual confere o aumento. No caso do projetor de slide, consta de um anteparo para a projeção da imagem. 6. Lente ocular, que forma a imagem final do objeto ao microscópio. Esta imagem é virtual, aumentado e invertida. 7. Olho do observador. 3
4 ATIVIDADES PRÁTICAS 1. A figura 2 é o desenho esquemático de um microscópio de luz mostrando seus diversos componentes. Escreva o nome e a função de cada componente. a) Nomei as estruturas apontadas pelos quadrados numerados: 1. 2. 4
5 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 5
6 b) Nomei as estruturas apontadas pelos círculos numerados: 1. 2. 3. PROCEDIMENTO CORRETO PARA A FOCALIZAÇÃO 1. Destrave o microscópio movimentando a alavanca. Verifique a posição da alavanca quando está travada e destravada. 2. Gire o revólver, encaixando a objetiva panorâmica (4x). Faça isso, olhando lateralmente, para evitar que alguma objetiva toque na platina. Verifique se cada objetiva está realmente encaixada, pelo ruído característico do encaixe. 3. Pegue a lâmina, segurando-a apenas pelas bordas. Verifique se a lamínula está voltada para cima. 4. Abra a presilha e coloque a lâmina sobre a platina, encaixando-a ao charriot. Solte a presilha e verifique se a lâmina está bem encaixada. Centralize o material no orifício da platina. Caso seja necessário, abra o diafragma, movimentando a alavanca correspondente. 5. Acenda a luz do microscópio. 6. Verifique se o diafragma está aberto, olhando lateralmente se há passagem de luz através do orifício da platina. Caso seja necessário, abra o diafragma, movimentando a alavanca correspondente. 6
7 7. Certifique-se se o condensador encontra-se em posição mais elevada. 8. Levante a platina até o seu ponto máximo movimentando o parafuso macrométrico. 9. Olhando através da ocular e utilizando o parafuso macrométrico, abaixe lentamente a platina, até que o material a ser observado possa ser visto. Assim que isto ocorrer, corrija a focalização usando o parafuso micrométrico. 10. Explore o preparado, movimentando os parafusos do charriot com uma das mãos e o parafuso micrométrico com a outra. Coloque sempre o material a ser analisado no centro do campo de observação, antes de passar para a objetiva de aumento imediatamente superior. OBS.: procure observar ao microscópio sempre com os dois olhos abertos. 11. Encaixe a objetiva de pequeno aumento (10x) e faça o ajuste da focalização, utilizando apenas o parafuso micrométrico. Observe o campo atentamente. 12. Selecione uma determinada área do material, centralize-a e encaixe a objetiva de 40x (médio aumento). Faça o ajuste da focalização, utilizando o parafuso micrométrico. 13. Terminando a observação, desligue a luz, gire o revólver para encaixar a objetiva e menor aumento (passando pela objetiva de 10x) e retire a lâmina. OBS.: nunca movimente a platina do microscópio com a objetiva de maior aumento ou de imersão encaixada. 7