Manual do Teste ADVIA Centaur HBsAg 1 / 14. Ensaio para a detecção do antigénio de superfície da Hepatite B

Manual do Teste ADVIA Centaur HBsAg 1 / 14 HBsAg (HBs) Ensaio para a detecção do antigénio de superfície da Hepatite B 0088 Indica informação revisada Resumo do ensaio Conteúdo Aplicação Tipo de amostra Soro, plasma EDTA, plasma heparinizado com lítio ou sódio, plasma-citrato Volume da amostra 100 µl Calibrador HBsAg Sensibilidade e limite do ensaio Coeficiente 0,1 1000 REF Conteúdo Número de testes 03393362 1 embalagem de reagentes primários ReadyPack do ADVIA Centaur 200 Reagente fase sólida e auxiliar HBsAg 1 embalagem auxiliar com reagente Lite HBsAg ADVIA Centaur Cartão da curva de referência HBsAg ADVIA Centaur Cartão da curva de referência Conf ADVIA Centaur 1 frasco de calibrador de nível baixo HBsAg 1 frasco de calibrador de nível alto HBsAg Cartão de valor atribuído ao calibrador HBsAg ADVIA Centaur Para a definição dos símbolos utilizados nos rótulos dos produtos, por favor consulte Para entender os símbolos no Anexo D. O ensaio HBsAg ADVIA Centaur é um imunoensaio de diagnóstico in vitro para a determinação qualitativa do antigénio de superfície da Hepatite B (HBsAg) no soro e plasma humano (EDTA, heparinizado com lítio ou sódio, citrato) através do sistema ADVIA Centaur. O ensaio pode ser utilizado em conjunto com outras informações serológicas e clínicas para diagnosticar indivíduos com Hepatite B aguda ou crónica. O ensaio também pode ser utilizado no rastreio da infecção pela hepatite em mulheres grávidas, para identificar os recém-nascidos em risco de adquirir Hepatite B durante o período perinatal. Materiais necessários mas não fornecidos REF Descrição Conteúdo 03395373 1 solução de lavagem da sonda auxiliar 2 embalagens de reagentes auxiliares Readypack contêm 25 ml por embalagem 03394660 Material de controlo de qualidade do ensaio HBsAg ADVIA Centaur 01137199 (112351) Resumo e explicação do teste Líquido de lavagem ADVIA Centaur Controlo negativo de 2 x 10,0 ml Controlo positivo de 2 x 10,0 ml Cartão do valor previsto 2 x 1500 ml/embalagem O ensaio HBsAg ADVIA Centaur é um imunoensaio quimioluminométrico de partículas magnéticas utilizado para medir a quantidade de antigénios de superfície da Hepatite B no soro e plasma humanos. 03426554 Rev. E, 2005-08 HBs

HBsAg 2 / 14 Manual do Teste ADVIA Centaur O vírus da Hepatite B (VHB) é endémico em todo o mundo, sendo a principal causa de doença no fígado. O VHB transmite-se através do contacto directo com o sangue ou fluidos corporais. As principais formas de transmissão incluem transfusões de sangue, troca de agulhas, contacto directo com ferimentos e exposição perinatal durante o parto. 1,2 O período de incubação médio da infecção provocada pelo VHB é de 6 a 8 semanas (entre 1 a 6 meses). Os sintomas clínicos comuns incluem mal-estar, febre, gastroenterite e icterícia. A infecção pelo VHB pode resultar em Hepatite ictérica típica, hepatite anactérica subclínica, hepatite fulminante ou hepatite crónica ou persistente. Nos adultos, 90 a 95% dos doentes com infecção pelo VHB recuperam completamente da doença aguda, desaparecendo o vírus. Aproximadamente 5 a 10% dos doentes com VHB tornam-se portadores crónicos. Nos recémnascidos infectados pelo VHB, aproximadamente 90% desenvolvem Hepatite B crónica. Estima-se que mais de 300 milhões de pessoas em todo o mundo sejam portadores crónicos do vírus. A infecção pelo VHB, especialmente em casos de infecção crónica, está claramente associada ao desenvolvimento do carcinoma hepatocelular. 1,2,3 O antigénio de superfície da Hepatite B (HBsAg) é um marcador serológico distintivo da Hepatite B aguda ou crónica. O HBsAg é o primeiro antigénio a aparecer após a infecção com o vírus da Hepatite B e é geralmente detectado entre 1 a 10 semanas antes do início dos sintomas clínicos. Os ensaios HBsAg são regularmente utilizados para diagnosticar infecções pelo VHB e para monitorizar o estado de indivíduos infectados, com o intuito de determinar se a infecção desapareceu ou se o doente se tornou num portador crónico do vírus. Nos doentes que recuperam da infecção pelo VHB, os níveis do HBsAg desaparecem entre 3 a 5 meses após o início da infecção. Nos doentes com infecção crónica pelo VHB, os níveis do HBsAg são detectáveis durante toda a vida. Para além disso, os ensaios HBsAg são utilizados para avaliar a eficácia de fármacos anti-víricos através da monitorização dos níveis do HBsAg no soro ou plasma do doente. O rastreio pré-natal do HBsAg tem sido recomendado para que os recémnascidos de mães portadoras do VHB possam obter tratamento profilático. 1,2,4 Princípio do ensaio O ensaio HBsAg ADVIA Centaur é um imunoensaio do tipo sanduíche que utiliza a tecnologia directa, quimioluminométrica. As partículas de latex não-magnéticas são adicionadas a partir do poço auxiliar. O reagente Lite, acondicionado numa embalagem de reagentes auxiliares ReadyPack, contém um anticorpo monoclonal (rato) anti-hbs de captura biotinilado e um anticorpo monoclonal (rato) anti-hbs marcado com éster de acridínio. O HBsAg nos complexos da amostra com os anticorpos e as partículas de latex magnéticas revestidas com streptavidina na fase sólida, capturam os complexos do anticorpo HBsAg. A amostra é incubada simultaneamente com o reagente fase sólida, Lite e auxiliar. Os complexos anticorpo-antigénio formar-se-ão se o antigénio de superfície da Hepatite B estiver presente na amostra. O sistema executa automaticamente os seguintes passos: distribui 100 µl de amostra numa cuvete distribui 120 µl de reagente Lite e incuba durante 5 minutos a 37 C distribui 105 µl de fase sólida e 25 µl de reagente auxiliar e incuba a mistura durante 18 minutos a 37 C separa a fase sólida da mistura e aspira o reagente não ligado lava a cuvete com o líquido de lavagem 1 distribui 300 µl de reagente ácido e de reagente básico para iniciar a reacção quimioluminescente comunica os resultados de acordo com a opção seleccionada, conforme descrito nas instruções de utilização ou no sistema de ajuda online HBs 03426554 Rev. E, 2005-08

Manual do Teste ADVIA Centaur HBsAg 3 / 14 Existe uma relação directa entre a quantidade de actividade do HBsAg presente na amostra do doente e a quantidade de unidades de luz relativas (RLUs) detectada pelo sistema. É determinado um resultado positivo ou negativo de acordo com um valor de cutoff de coeficiente 1,0 estabelecido com os calibradores. Consulte Interpretação de Resultados para uma descrição do cálculo do valor de cutoff. Recolha e manuseamento da amostra O soro, o plasma-edta e o plasma heparinizado com lítio ou sódio ou plasma-citrato são os tipos de amostra recomendados para este ensaio. Não utilize amostras com contaminação microbiana óbvia. O desempenho do ensaio HBsAg ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras inactivadas por calor, ou outros fluidos corporais para além do soro e do plasma tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluidos pleurais. As recomendações gerais que se seguem para o manuseamento e armazenamento de amostras de sangue são fornecidas pelo National Committee for Clinical Laboratory Standards 5 e completadas com estudos adicionais sobre o manuseamento de amostras com a utilização do ensaio HBsAg ADVIA Centaur: Manuseie todas as amostras como potenciais transmissores de doenças. As amostras são processadas através da centrifugação, normalmente seguida por uma separação física do soro ou plasma dos eritrócitos. A etapa de centrifugação pode ocorrer até 24 horas após a colheita. Ao testar 10 amostras nas quais a etapa de centrifugação variou até 24 horas após a colheita, não foram observadas diferenças clínicas significativas. Analise as amostras o mais rapidamente possível após a sua recolha. Armazene as amostras entre 2 a 8 C, caso não sejam imediatamente analisadas. Armazene sempre as amostras vedadas e na vertical entre 2 e 8 C e até um máximo de 7 dias. Armazene os tubos de amostras primários entre 2 a 8 C até 7 dias. Mantenha sempre as amostras vedadas e na vertical. As amostras do tubo primário incluem soro armazenado coagulado, plasma armazenado em eritrócitos empacotados e amostras processadas e armazenadas em tubos de recolha de amostras com barreira de gel. Ao testar 10 amostras que permaneceram nestes tubos primários até 7 dias, não foram observadas diferenças clínicas significativas. Para um período de armazenamento mais longo, congele as amostras, sem eritrócitos, a uma temperatura de -20 C ou inferior. Não guarde as amostras num frigorífico com descongelamento automático. Após terem sido submetidas 10 amostras a 4 ciclos de congelamento/descongelamento, não foram observadas nenhumas diferenças clínicas significativas. Misture bem e centrifugue as amostras descongeladas antes de as utilizar. Embale e coloque as etiquetas nas amostras para envio, de acordo com os regulamentos locais e internacionais aplicáveis respeitantes ao transporte de amostras clínicas e agentes etiológicos. As amostras mantidas à temperatura ambiente durante 2 dias ou arrefecidas durante 7 dias não demonstraram diferenças qualitativas. Armazene as amostras vedadas e na vertical entre 2 a 8 C após a sua chegada. Se o período de envio ultrapassar os 7 dias, envie as amostras congeladas. Antes de colocar as amostras no sistema, verifique o seguinte: As amostras não contêm fibrina ou outras partículas. Remova as partículas através de centrifugação. As amostras não contêm bolhas ou espuma. 03426554 Rev. E, 2005-08 HBs

HBsAg 4 / 14 Manual do Teste ADVIA Centaur Reagentes Armazene os reagentes na vertical entre 2 8 C. Misture todas as embalagens de reagentes primários manualmente antes de os colocar no sistema. Verifique o fundo da embalagem do reagente para se certificar de que todas as partículas se encontram dispersas e novamente suspensas. Para mais informações sobre a preparação dos reagentes para utilização, consulte o Anexo C, Manuseamento de reagentes. Embalagem de reagente Reagente Volume Ingredientes Embalagem de reagentes primários ReadyPack do ADVIA Centaur HBsAg Fase sólida Reagente auxiliar ADVIA Centaur Reagente HBsAg Lite Embalagem de reagentes auxiliares ReadyPack Frascos dos calibradores HBsAg Frascos de material de controlo de qualidade HBsAg* ADVIA Centaur 1 embalagem de reagentes auxiliares ReadyPack* ADVIA Centaur 1* Calibradores 3,0 ml/ frasco Controlos Solução de lavagem da sonda Líquido de lavagem 1 21,0 ml/ Partículas de latex magnéticas embalagem revestidas com streptavidina de reagente em tampão com albumina de sangue bovino, soro caprino, tensioactivo, azida de sódio (< 0,1%) e conservantes 5,0 ml/ Reagente de colina embalagem (~69,8 mg/ml) e partículas de de reagente latex não magnéticas em tampão com azida de sódio (< 0,1%) * Consulte Materiais necessários mas não fornecidos Armazenamento 2 8 C 2 8 C 24,0 ml/ Anticorpo monoclonal (rato) 2 8 C embalagem anti-hbs biotinilado de reagente (~1,0 µg/ml) e um anti-hbsag monoclonal (rato marcado com éster de acridínio (~0,1 µg/ml) em tampão com albumina de sangue bovino, gamaglobulina bovina, soro caprino, IgG de rato, tensioactivo, azida de sódio (< 0,1%) e conservantes 10,0 ml/ frasco 25,0 ml/ embalagem de reagente Calibrador alto: HBsAg 2 8 C humano purificado em tampão com azida de sódio (< 0,1%) calibrador baixo: plasma humano processado normal com azida de sódio (< 0,1%) Plasma humano processado 2 8 C negativo e positivo para o HBsAg com conservantes Estabilidade Até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e Limite de calibração. Até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e limite de calibração. Até à data de validade no rótulo da embalagem. Para a estabilidade de utilização, consulte Estabilidade de utilização e limite de calibração. Até à data de validade no frasco ou 8 horas no equipamento Até à data de validade no frasco ou 8 horas no equipamento Hidróxido de sódio 0,4 N 2 8 C Até à data de validade no rótulo da embalagem. ou 14 dias consecutivos depois de aceder à embalagem de reagentes auxiliares 1500 ml/ Tampão fosfato salino com embalagem azida de sódio (< 0,1%) e tensioactivo 2 25 C Até à data de validade no frasco ou 14 dias no equipamento HBs 03426554 Rev. E, 2005-08

Manual do Teste ADVIA Centaur HBsAg 5 / 14 PRECAUÇÃO: A azida de sódio pode reagir com o cobre e formar azidas metálicas explosivas. Aquando da eliminação, limpe os reagentes com uma grande quantidade de água, por forma a evitar a acumulação de azidas, caso a eliminação para uma conduta de drenagem esteja em conformidade com as normas de segurança e exigências legais. Para utilização de diagnóstico in vitro. Colocação dos reagentes PRECAUÇÃO! RISCO BIOLÓGICO POTENCIAL: Alguns componentes deste produto contêm material de origem humana. Não existe nenhum método de ensaio conhecido que garanta totalmente que os derivados do sangue humano não transmitam agente infecciosos. Todos os produtos produzidos a partir de material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos. Manuseie este produto de acordo com as boas práticas laboratoriais e com as precauções universais. 6-8 O controlo negativo e o calibrador baixo foram ensaiados através de métodos aprovados pela FDA e considerados não reactivos para o antigénio de superfície da Hepatite B (HBsAg), anticorpo da Hepatite C (VHC) e anticorpo do VIH-1/2. O controlo positivo e o calibrador alto contêm plasma humano que é reactivo para o HBsAg. As unidades foram tratadas com um procedimento de inactivação de beta-propiolactona - raios ultra-violeta, contudo, todos os produtos fabricados com material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos. Certifique-se de que o sistema contém embalagens suficientes de reagentes primários e auxiliares. Para obter mais informações sobre a preparação do sistema, consulte as instruções de utilização do sistema ou o sistema de ajuda online. PRECAUÇÃO: Misture todas as embalagens de reagentes primários manualmente antes de os colocar no sistema. Verifique o fundo da embalagem do reagente para se certificar de que todas as partículas se encontram dispersas e novamente suspensas. Para mais informações sobre a preparação dos reagentes para utilização, consulte o Anexo C, Manuseamento de reagentes. Coloque as embalagens de reagentes primários ReadyPack nos compartimentos dos reagentes primários e utilize as setas das embalagens para colocá-las correctamente. O sistema mistura automaticamente as embalagens dos reagentes primários para manter uma suspensão homogénea dos reagentes. Coloque as embalagens dos reagentes auxiliares ReadyPack na entrada do reagente auxiliar. Para obter mais informações sobre como colocar os reagentes, consulte as instruções de utilização do sistema ou o sistema de ajuda online. PRECAUÇÃO: Os calibradores baixo e alto fornecidos neste kit são combinados com a embalagem de reagentes primários ReadyPack. Não misture lotes de calibradores com lotes diferentes de embalagens de reagentes. PRECAUÇÃO: A embalagem de reagentes auxiliares com o reagente Lite fornecida neste kit é combinada com o reagente fase sólida e auxiliar. Não misture os lotes de reagente Lite com lotes diferentes de reagente fase sólida e auxiliar. Estabilidade de utilização e limite de calibração Estabilidade de utilização Limite de calibração 41 dias 21 dias Adicionalmente, o ensaio ADVIA Centaur HBsAg requer uma calibração de dois pontos: ao alterar os números de lote das embalagens dos reagentes primários quando substituir os componentes do sistema quando os resultados do controlo de qualidade estão repetidamente fora dos limites PRECAUÇÃO: Elimine as embalagens dos reagentes no final do limite de estabilidade de utilização. Não utilize os reagentes para além da data de validade. 03426554 Rev. E, 2005-08 HBs

HBsAg 6 / 14 Manual do Teste ADVIA Centaur Calibração da curva de referência Calibração O ensaio HBsAg ADVIA Centaur requer uma calibração da curva de referência quando utilizar um novo número de lote de reagente fase sólida, auxiliar e Lite. Para cada novo número de lote de reagente fase sólida, auxiliar e Lite, utilize o leitor de código de barras ou o teclado para introduzir os valores da curva de referência no sistema. O cartão da curva de referência contém os valores respectivos. Para obter mais informações sobre a introdução dos valores de calibração, consulte as instruções de utilização do sistema ou o sistema de ajuda online. Para a calibração do ensaio HBsAg ADVIA Centaur, utilize os calibradores HBsAg ADVIA Centaur fornecidos com cada kit. Os calibradores fornecidos com este kit são combinados com a embalagem de reagentes primários ReadyPack. Utilização das etiquetas de código de barras NOTA: As etiquetas de código de barras são específicas do número do lote. Não utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de calibradores com qualquer outro lote de calibradores. Utilize as etiquetas de código de barras dos calibradores HBsAg ADVIA Centaur para identificar os tubos das amostras do calibrador baixo e do alto ao executar o ensaio HBsAg ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no tubo da amostra de forma a que os caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no tubo da amostra. Efectuar uma calibração Cada lote de calibradores contém um cartão de valor atribuído ao calibrador para facilitar a introdução dos valores de calibração no sistema. Introduza os valores utilizando um leitor de código de barras ou o teclado. Para obter mais informações sobre a introdução dos valores do calibrador, consulte as instruções de utilização do sistema ou o sistema de ajuda online. NOTA: Este procedimento utiliza volumes do calibrador suficientes para medir cada calibrador em duplicado. 1. Introduza os calibradores na lista de trabalho. 2. Coloque etiquetas de código de barras dos calibradores em dois tubos de amostra: uma para o baixo e outra para o alto. NOTA: Cada gota do frasco do calibrador tem aproximadamente 50 µl. 3. Misture suavemente os calibradores baixo e alto e distribua pelo menos 6 a 7 gotas nos tubos de amostra adequados. 4. Coloque os tubos de amostra num tabuleiro. 5. Coloque o tabuleiro na fila de entrada das amostras. 6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão colocados. 7. Inicie a fila de entrada, se necessário. NOTA: Elimine qualquer quantidade de calibrador que permanecer nos tubos das amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os tubos das amostras quando o conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua calibradores novos. Controlo de qualidade Para o controlo de qualidade do ensaio HBsAg ADVIA Centaur, utilize o material de controlo de qualidade HBsAg ADVIA Centaur. Consulte o cartão de valor previsto para os valores previstos sugeridos, específicos para o número de lote dos controlos positivo e negativo. HBs 03426554 Rev. E, 2005-08

Manual do Teste ADVIA Centaur HBsAg 7 / 14 Utilização das etiquetas de código de barras NOTA: As etiquetas de código de barras dos controlos possuem número do lote específico. Não utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de controlos com qualquer outro lote de controlos. Utilize as etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade HBsAg ADVIA Centaur para identificar os tubos das amostras positivas e negativas ao executar o ensaio HBsAg ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no tubo da amostra de forma a que os caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no tubo da amostra. Efectuar um controlo de qualidade Para obter mais informações sobre a introdução dos valores do controlo de qualidade, consulte as instruções de utilização do sistema ou o sistema de ajuda online. Para monitorizar o desempenho do sistema e as tendências do gráfico, como requisito mínimo, as amostras de controlo de qualidade devem ser ensaiadas em cada turno em que as amostras forem analisadas. As amostras de controlo de qualidade também devem ser ensaiadas ao efectuar uma calibração de dois pontos. Manuseie as amostras de controlo de qualidade da mesma forma que as amostras de doentes. NOTA: Este procedimento utiliza volumes do controlo suficientes para medir cada controlo em duplicado. 1. Introduza as amostras de controlo de qualidade na lista de trabalho. 2. Coloque etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade em dois tubos de amostra: uma para o positivo e outra para o negativo. NOTA: Cada gota do frasco do controlo tem aproximadamente 50 µl. 3. Misture suavemente os materiais de controlo de qualidade e distribua pelo menos 6 a 7 gotas nos tubos de amostra adequados. 4. Coloque os tubos de amostra num tabuleiro. 5. Coloque o tabuleiro na fila de entrada das amostras. 6. Certifique-se que todos os reagentes para o ensaio estão colocados. 7. Inicie a fila de entrada, se necessário. NOTA: Elimine todos os materiais de controlo da qualidade que permaneçam nos tubos das amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os tubos das amostras quando o conteúdo se tiver esgotado. Se necessário, distribua materiais de controlo de qualidade novos. Efectuar uma acção correctiva Se os resultados do controlo de qualidade não coincidirem com os valores esperados ou com os valores estabelecidos pelo laboratório, faça o seguinte: considere os resultados da amostra inválidos e repita os testes dos controlos que não se encontrem dentro dos limites reveja estas instruções para se certificar de que este ensaio foi efectuado de acordo com os procedimentos recomendados pela Bayer HealthCare verifique se os materiais se encontram dentro da validade verifique se a manutenção necessária foi efectuada se necessário, contacte a Bayer HealthCare para obter mais assistência 03426554 Rev. E, 2005-08 HBs

HBsAg 8 / 14 Manual do Teste ADVIA Centaur Volume da amostra Este ensaio requer 100 µl de amostra para uma única determinação. Este volume não inclui o volume não utilizável no recipiente da amostra ou o volume adicional necessário ao efectuar duplicados ou outros testes na mesma amostra. Para obter mais informações sobre o volume mínimo necessário, consulte Requisitos do volume da amostra no Manual de referência ADVIA Centaur. Procedimento do ensaio Para obter mais informações sobre os procedimentos, consulte as instruções de utilização do sistema ou o sistema de ajuda online. PRECAUÇÃO: Não coloque mais do que um tamanho do recipiente da amostra em cada tabuleiro. O indicador do tabuleiro deve estar colocado devidamente para o tamanho do recipiente da amostra. 1. Prepare o recipiente da amostra para cada amostra e coloque etiquetas de códigos de barras nos recipientes das amostras, conforme necessário. 2. Coloque cada recipiente da amostra num tabuleiro e certifique-se que as etiquetas do código de barras estão visíveis. 3. Coloque os tabuleiros na fila de entrada. 4. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão colocados. 5. Inicie a fila de entrada, se necessário. Notas sobre procedimentos Eliminação A eliminação de material perigoso ou biologicamente contaminado deve ser efectuada de acordo com as práticas da sua instituição. Elimine todos os materiais de uma forma segura e aceitável e em conformidade com todas as normas de segurança e exigências locais. Interpretação dos resultados Para obter informações detalhadas sobre a forma como o sistema calcula os resultados, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online. O sistema relata os resultados de HBsAg em Coeficientes e como reactivos ou não reactivos. As amostras com um Coeficiente inferior a 1.0 são consideradas não reactivas (negativas) relativamente a HBsAg. As amostras com um Coeficiente inferior ou idêntico a 1.0 mas inferior ou idêntico a 50 são consideradas reactivas (positivas) relativamente a HBsAg. Recomendamos que o ensaio seja repetido em duplicado. Se dois dos três resultados forem não reactivos (negativos), a amostra é considerada negativa relativamente a HBsAg. Se, pelo menos dois dos três resultados forem reactivos (positivos), a amostra é repetidamente reactiva (positiva) e a presença de HBsAg deve ser confirmada com o ensaio de confirmação ADVIA Centaur HBsAg, ensaios de marcador HBV adicionais ou outro método de confirmação aprovado. HBs 03426554 Rev. E, 2005-08

Manual do Teste ADVIA Centaur HBsAg 9 / 14 Limitações Se a amostra for superior a 50, o espécime é positivo relativamente a HBsAg, não sendo necessário qualquer outro ensaio. NOTA: Quando o ensaio HBsAg ADVIA Centaur é utilizado como um ensaio autónomo (por exemplo, em mulheres grávidas sujeitas a rastreio para identificação de recém-nascidos em risco de contraírem HBV durante o período perinatal), sugere-se que o ensaio de confirmação HBsAg ADVIA Centaur seja utilizado para confirmar o resultado. O cutoff para o ensaio HBsAg ADVIA Centaur foi verificado com base em resultados da sensibilidade relativa e da especificidade gerada a partir dos estudos clínicos e da sensibilidade de seroconversão. Os resultados das amostras são inválidos e têm de ser repetidos se os controlos estiverem fora dos limites. O ensaio HBsAg ADVIA Centaur é limitado para a detecção do HBsAg no soro ou plasma humano (plasma-edta, plasma heparinizado com lítio ou sódio ou plasma-citrato). As características de desempenho do ensaio não foram estabelecidas quando o ensaio HBsAg ADVIA Centaur é utilizado em conjunto com ensaios de outros fabricantes para os marcadores serológicos específicos do VHB. As características de desempenho do ensaio ainda não foram testadas para o teste de recémnascidos. O desempenho do ensaio HBsAg ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras inactivadas por calor, ou outros fluidos corporais para além do soro e do plasma tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluidos pleurais. O desempenho do ensaio não foi estabelecido para populações de doentes imunodeprimidos ou imunodeficientes. Não utilize amostras com contaminação microbiana óbvia. Para efeitos de diagnóstico, os resultados do teste HBsAg ADVIA Centaur devem ser sempre analisados em conjunto com a história médica do doente, exame clínico e outros dados. Reconhece-se que os actuais métodos de detecção do antigénio de superfície da Hepatite B podem não detectar todos os indivíduos potencialmente infectados. Um resultado de teste não-reactivo não exclui a possibilidade de exposição ou infecção por Hepatite B. Um resultado de teste não-reactivo em indivíduos previamente expostos à Hepatite B pode ser devido a níveis de antigénio abaixo do limite de detecção deste teste ou à falta de reactividade do antigénio com os anticorpos deste teste. Os anticorpos heterofílicos no soro humano podem reagir com imunoglobinas reagentes e interferir com os imunoensaios in vitro. 9 Os doentes expostos frequentemente a animais ou a produtos de soro animal podem ter tendência para esta interferência, podendo observar-se valores anómalos. Podem ser necessárias informações adicionais para diagnóstico. Resultados esperados Numa população de 5058 dadores de sangue voluntários e 211 doentes hospitalizados negativos para o VHB, 10 amostras foram repetidamente reactivas com o ensaio HBsAg ADVIA Centaur e 7 destas amostras foram confirmadas como positivas. Numa população de 483 doentes reactivos para o HBsAg, 483 (100%) foram considerados reactivos através do ensaio HBsAg ADVIA Centaur. 03426554 Rev. E, 2005-08 HBs

HBsAg 10 / 14 Manual do Teste ADVIA Centaur Da mesma forma que para todos os ensaios de diagnóstico in vitro, cada laboratório deve determinar o(s) seu(s) próprio(s) limite(s) de referência para a avaliação de diagnóstico dos resultados do doente. 10 Características de desempenho Sensibilidade clínica relativa e especificidade A sensibilidade e especificidade relativas foram determinadas a partir da comparação do desempenho do ensaio HBsAg ADVIA Centaur com um ensaio HBsAg comercialmente disponível em dois locais de avaliação. Foram testados um total de 211 amostras clínicas de rotina, 483 amostras com VHB e 5058 amostras de dadores de sangue voluntários. As amostras com resultados discordantes foram repetidas em duplicado e as amostras repetidas reactivas foram confirmadas através de um teste de neutralização. Foram obtidos os seguintes resultados: Sensibilidade Ensaio HBsAg de referência Ensaio HBsAg ADVIA Centaur Positivo ( Coeficiente 1,00) Negativo (Coeficiente < 1,00) Total Positivo ( Coeficiente 1,00) 481 2 483 Negativo (Coeficiente < 1,00) 0 0 0 Total 481 2 483 Sensibilidade = 100% (483/483), 95% CI (intervalo de confiança) = 99,24 100,00% Especificidade Reacção de amostras de dadores e clínicas com VHB negativas Resultados HBsAg ADVIA Centaur Grupo de doentes Número Testado Negativo Inicial Reactivo Repetido Reactivo Confirmado Positivo Falso Positivo VHB Negativo 211 209 2 2 1 1 Amostras clínicas VHB Negativo 5058 5050 15 8 6 2 Amostras de dadores Total 5269 5259 17 10 7 3 Seis amostras classificadas como VHB negativas, através de um ensaio comercialmente disponível, foram consideradas positivas através do ensaio ADVIA Centaur e do ensaio determinado. Especificidade = 99,94% (5259/5262), 95% CI (intervalo de confiança) = 99,83 99,99% Amostras pré-natais 170 amostras pré-natais negativas para o VHB foram testadas através do ensaio HBsAg ADVIA Centaur e consideradas não reactivas. Reacção cruzada O ensaio HBsAg ADVIA Centaur foi avaliado para potencial reacção cruzada com anticorpos víricos e amostras de situação de doença. Os seguintes resultados foram obtidos através da utilização do ensaio HBsAg ADVIA: HBs 03426554 Rev. E, 2005-08

Manual do Teste ADVIA Centaur HBsAg 11 / 14 Resultados HBsAg ADVIA Centaur Categoria clínica Número testado Negativo Positivo Factor reumatóide 14 14 0 Lúpus eritematoso sistémico (SLE) 11 11 0 Rubéola 10 10 0 Anticorpo anti-nuclear (ANA) 9 8 1* Doença do fígado não vírica 10 9 1 Hepatite alcoólica 2 2 0 VHA 4 4 0 VHC 2 2 0 Parvovírus 6 6 0 Vírus varicela zoster 7 7 0 Gravidez (1º trimestre) 125 125 0 Gravidez (2º trimestre) 20 20 0 Gravidez (3º trimestre) 25 25 0 Multiparidade 10 10 0 HAMA 9 9 0 Frasco da vacina anti-gripe 10 10 0 Toxoplasma IgM 7 7 0 Toxoplasma IgG 8 8 0 CMV 10 10 0 Vírus de Epstein-Barr 5 5 0 Sífilis 10 10 0 Amostras totais 314 312 2 * O espécime ANA positivo não foi confirmado como HBsAg positivo utilizando um ensaio de neutralização HBsAg. Amostras de soro que são... Demonstraram 10% de alterações dos resultados até... hemolizado 500 mg/dl de hemoglobina lipémico 1000 mg/dl de triglicéridos ictérico 40 mg/dl de bilirrubina conjugada ictérico 40 mg/dl de bilirrubina não conjugada proteinémico (elevado) 12 g/dl de proteína total preteinémico (baixo) 3 g/dl de proteína total hiper IgG 6 g/l de imunoglobina G O ensaio de interferência foi determinado de acordo com o Documento NCCLS EP7-P. 11 Painéis de seroconversão O painéis de seroconversão comercialmente disponíveis para doentes com VHB, foram testados com o ensaio HBsAg ADVIA Centaur para determinar a sensibilidade de seroconversão do ensaio. O desempenho do ensaio HBsAg ADVIA Centaur nos painéis de seroconversão coincidiram bastante com o desempenho do ensaio de referência. Foram obtidos os seguintes resultados: Identificação do painel Resultado positivo HBsAg da data da colheita inicial Ensaio de referência vs Ensaio ADVIA Centaur Ensaio de referência Ensaio ADVIA Centaur Diferença nos números (Dias) (Dias) de colheita* PHM 907 50 50 0 PHM 908 20 20 0 PHM 912 42 42 0 PHM 915 33 19 +4 PHM 916 65 65 0 PHM 919 19 19 0 03426554 Rev. E, 2005-08 HBs

HBsAg 12 / 14 Manual do Teste ADVIA Centaur Identificação do painel PHM 922 16 21 1 PHM 926 13 9 +1 PHM 928 14 9 +1 PHM 929 18 18 0 BCP 62433 22 19 +1 BCP 62675 19 19 0 BCP 63568 10 14 1 BCP 62825 29 26 +1 BCP 64121 27 27 0 BCP 63133 36 36 0 BCP 61291 98 112 3 PHM 933 7 7 0 PHM 931 19 19 0 PHM 932 61 50 +1 PHM 930 3 0 +1 * A diferença nos números de colheita é relativa ao ensaio de referência. Por exemplo, um +4 significa que o ensaio de referência necessitou de 4 colheitas adicionais antes da reacção ser determinada, comparativamente ao ponto no qual o ensaio ADVIA Centaur foi confirmado como positivo. Precisão Resultado positivo HBsAg da data da colheita inicial Ensaio de referência vs Ensaio ADVIA Centaur Ensaio de referência Ensaio ADVIA Centaur Diferença nos números (Dias) (Dias) de colheita* A precisão foi determinada através da utilização do estudo de precisão de 20 dias do NCCLS (EP5-A). 12 De acordo com este protocolo, o ensaio foi processado 2 vezes por dia, 20 vezes durante o período de 28 dias (n=80 por amostra) utilizando 1 lote de reagentes. O instrumento foi calibrado no primeiro processamento do dia 1 e novamente calibrado no limite de calibração recomendado. Os resultados do ensaio foram calculados através dos dois pontos de calibração armazenados. Foram obtidos os seguintes resultados: Durante o processamento Entre processamentos Entre as datas Total Tipo de amostra Média (Coeficiente) SD CV(%) SD CV(%) SD CV(%) SD CV(%) Controlo positivo 4,76 0,09 1,9 0,09 1,8 0,09 2,0 0,16 3,3 EDTA K2 0,49 0,05 9,8 0,04 7,4 0,02 3,7 0,06 12,8 EDTA K2 1,86 0,07 3,6 0,00 0,0 0,05 2,6 0,08 4,5 EDTA K2 3,93 0,11 2,7 0,03 0,9 0,09 2,2 0,14 3,6 EDTA K2 19,13 0,37 2,0 0,36 1,9 0,26 1,4 0,58 3,1 Heparina de lítio 0,36 0,04 9,7 0,02 6,6 0,03 7,0 0,05 13,7 Heparina de lítio 1,77 0,08 4,6 0,04 2,1 0,04 2,5 0,10 5,6 Heparina de lítio 3,77 0,08 2,1 0,06 1,6 0,06 1,6 0,11 3,0 Heparina de lítio 16,92 0,30 1,8 0,20 1,2 0,24 1,4 0,43 2,5 Citrato de sódio 0,38 0,04 11,4 0,03 8,3 0,03 8,6 0,06 16,5 Citrato de sódio 1,97 0,05 2,8 0,06 2,9 0,05 2,6 0,09 4,8 Citrato de sódio 3,92 0,12 3,1 0,07 1,7 0,00 0,0 0,14 3,5 Citrato de sódio 17,58 0,27 1,6 0,22 1,2 0,20 1,1 0,40 2,3 Heparina de sódio 0,42 0,05 11,2 0,02 3,8 0,02 5,4 0,05 13,0 Heparina de sódio 2,08 0,10 4,7 0,04 1,8 0,00 0,0 0,10 5,0 Heparina de sódio 3,72 0,10 2,8 0,07 1,9 0,00 0,0 0,13 3,4 Heparina de sódio 19,87 0,39 2,0 0,43 2,2 0,20 1,0 0,62 3,1 Soro 0,56 0,04 7,2 0,01 2,5 0,03 5,5 0,05 9,4 Soro 1,82 0,06 3,2 0,05 2,5 0,04 2,1 0,08 4,6 Soro 3,57 0,07 2,0 0,04 1,2 0,06 1,7 0,10 2,9 Soro 17,07 0,37 2,2 0,34 2,0 0,39 2,3 0,64 3,7 HBs 03426554 Rev. E, 2005-08

Manual do Teste ADVIA Centaur HBsAg 13 / 14 Padronização A padronização do ensaio HBsAg ADVIA Centaur baseia-se no acordo clínico relativo com ensaios HBsAg comercialmente disponíveis. Consulte Características de desempenho. Os valores atribuídos para os calibradores e controlos estão conforme esta padronização. Para além disso, o valor de cutoff do ensaio HBsAg ADVIA Centaur foi verificado com a 1 ª Norma de Referência Internacional da OMS, 80/549-1. A sensibilidade do ensaio foi determinada como sendo 0,066 IU/mL a um valor de cutoff de Coeficiente de 1,0. A sensibilidade clínica do ensaio em dois desvios padrão do valor médio do controlo negativo foi determinada como sendo 0,021 IU/mL. Assistência técnica Referências Para assistência ao cliente, contacte o seu assistente técnico ou distribuidor local. 1. Gitlin N. Hepatitis B: diagnosis, prevention, and treatment. Clinical Chemistry 1997, 43:8(B):1500-1506. 2. Mahoney, FJ. Update on Diagnosis, Management, and Prevention of Hepatitis B Virus Infection. Clinical Microbiology Reviews 1999,12(2):351-366. 3. Juszczyk, J. Clinical course and consequences of Hepatitis B infection. Vaccine 2000, 18:S23-S25. 4. Vivek R. Treatment of hepatitis B. Clin Cornerstone 2001, 3(6):24-36. 5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for handling and processing of blood specimens; second edition; approved guideline. NCCLS Document H18-A2; Wayne (PA):NCCLS;1999 Oct. 40p. 6. Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR 1988;37:377-82, 387-8. 7. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections-second edition; approved guideline. NCCLS Document M29-A2. Wayne (PA):NCCLS; 2001 Dec. 105p. 8. Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR 1910.1030. 9. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988;34:27 33. 10. National Committee for Clinical Laboratory Standards. How to define, determine, and utilize reference intervals in the clinical laboratory; approved guideline. NCCLS Document C28-A. Wayne (PA):NCCLS;1995. 11. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference Testing in Clinical Chemistry; proposed guideline. NCCLS document EP7-P. Wayne (PA):NCCLS;1986. 12. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices second edition; approved guideline. NCCLS Document EP5-A. Wayne (PA):NCCLS;1999. ADVIA Centaur e ReadyPack são marcas registadas da Bayer HealthCare LLC. 2002 Bayer HealthCare LLC. Todos os direitos reservados. US Pats 4,745,181; 4,918,192; 5,110,932; 5,656,426; 5,609,822; 5,788,928 03426554 Rev. E, 2005-08 HBs

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