BOTREL PP; PINTO Efeito do JEB; processamento FIGUEIREDO e FC; do ARAÚJO tempo de ACC. extração 2008. no Efeito teor do de processamento óleo essencial e em do tempo folhas de de extração hortelã-do-campo no teor de óleo essencial em folhas de hortelã-do-campo. Horticultura Brasileira 26: S2160-S2164. EFEITO DO PROCESSAMENTO E DO TEMPO DE EXTRAÇÃO NO TEOR DE ÓLEO ESSENCIAL EM FOLHAS DE HORTELÃ-DO-CAMPO Priscila Pereira Botrel 1 ; José Eduardo Brasil P. Pinto 1 ; Felipe Campos Figueiredo 2 ; Ana Clara Caxito de Araújo 1 1 UFLA - Departamento de Agricultura - Laboratório de Cultura de Tecidos e Plantas Medicinais. Cx Postal 3037, CEP 37.200-000, Lavras MG. botrelpp@bol.com.br; 2 Consultor e pesquisador da CAMPUS Pesquisa, desenvolvimento e consultoria na agropecuária. RESUMO Os óleos essenciais são princípios odoríferos armazenados em células especiais na planta. Observa-se uma grande variabilidade nos tempos de hidrodestilação de óleos essenciais entre as espécies medicinais. Objetivou-se no presente trabalho, avaliar o tipo de processamento e o tempo de extração no teor do óleo essencial de Hyptis marrubioides. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 4x2, com quatro repetições, sendo quatro tempos de hidrodestilação (30, 60, 90 e 120 minutos) e utilização de folhas inteiras e picadas. O óleo essencial foi extraído em aparelho de Clevenger. O teor de óleo essencial na massa fresca foi maior com folhas inteiras com 86 minutos de extração e com a folha picada foi linear. PALAVRAS-CHAVES: Hyptis marrubioides, planta medicinal, hidrodestilação, Lamiaceae. ABSTRACT Effect of processing and extraction time in essential oil content in leaves of field mint Essential oils are odorous principles stored in special plant cells. There is great variability in essential oil hydrodistillation time among medicinal species. The purpose of this work was to evaluate the processing type and extraction time in essential oil content of H. marrubioides. It was used a randomized complete block design with four hydrodistillation time (30, 60, 90 and 120 minutes) and two processing type ( whole and chopped leaf) of H. marrubioides, 4x2 factorial scheme with four replication. The essential oil was obtained by hydrodistillation with Clevenger apparatus. The essential oil content in fresh biomass showed higher in whole leaves with 86 minutes of extraction time and with chopped leaves showed linear. KEYWORDS: Hyptis marrubioides, medicinal plants, hydro-destillation, Lamiaceae. INTODUÇÃO O gênero Hyptis jacq (Lamiaceae) inclui cerca de 300 espécies, de ampla ocorrência na América tropical (Willis, 1973; Harley, 1988). Este gênero apresenta uma grande importância como fonte de constituintes bioativos, possuindo importantes efeitos biológicos, como atividades antimicrobianas, citotóxicas e inseticidas (Kunbnt, et al., 1995). Estas espécies são bastante aromáticas e são freqüentemente usadas no tratamento de infecções gastrointestinais, câimbras e dores, bem como no tratamento de infecções de pele (Corrêa, 1931). Hortic. bras., v. 26, n. 2 (Suplemento - CD Rom), jul-ago. 2008 S2160
Nos últimos anos a extração de óleo essencial tem se destacado na pesquisa científica, com o objetivo de descobrir novos compostos e contribuir para o desenvolvimento de ensaios biológicos e práticas de manejo de plantas medicinais. Porém, dificilmente encontram-se na literatura dados a respeito da influência do tempo de hidrodestilação na extração de óleo essencial. Há uma extensa variabilidade nos tempos de extração variando entre uma hora (Venskutonis, 2003) e oito horas de destilação (Jantan et al., 2003). A composição dos óleos essenciais pode variar em função, dentre outros, de fatores genéticos (Letchamo, 1992), ambientais (Leal et al., 2001) e de métodos de extração (Hawthorne, 1993; Gámiz-Gracia & Castro, 2000; Bernardo-Gil et al., 2002; Bos et al., 2002). O método de hidrodestilação é amplamente utilizado devido a sua praticidade e baixo custo, e os aparelhos tipo Clevenger são hoje os mais utilizados (Who, 1998). O presente trabalho objetivou determinar o tempo de hidrodestilação que proporciona o maior teor de óleo essencial em Hyptis marrubioides, visando otimizar o processo de extração. E também verificar se a fragmentação da folha tem influência neste processo. MATERIAL E MÉTODOS O cultivo das plantas foi realizado em casa de vegetação aclimatizada no Laboratório de Cultura de Tecidos e Plantas Medicinais da UFLA. A propagação de Hyptis marrubioides foi feita por sementes, em bandejas contendo substrato Plantimax, onde permaneceram por 30 dias. Após este período, realizou-se o transplantio das mudas, para 100 vasos plásticos contendo 10 litros de composto orgânico. A colheita de folhas frescas foi realizada 210 dias após o transplantio das mudas, próximo ás sete horas da manhã. Coletou-se apenas folhas do terço superior da planta. Para cada repetição, que foi representada por três plantas colhidas aleatoriamente, utilizou-se uma amostra composta de 40g de massa fresca para a hidrodestilação. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, contendo os quatro tempos de extração (30, 60, 90 e 120 min) e folhas inteiras e picadas, perfazendo um fatorial 4x2, com quatro repetições cada totalizando 32 parcelas. As variáveis analisadas foram submetidas à análise de variância e regressão á nível de 5% de probalidade pelo teste de F, com auxílio do software Sisvar (Ferreira, 2000). A extração do óleo essencial foi realizada pelo método de hidrodestilação em aparelho de Clevenger. Para a purificação do óleo essencial, o hidrolato foi submetido à partição líquidolíquido em funil de separação, realizando-se três lavagens do hidrolato com três porções de 5ml de diclorometano por meia hora cada. As frações orgânicas foram reunidas e secas com sulfato de magnésio anidro, deixando-o agir por meia hora e, posteriormente, o sal foi removido por filtração simples e o solvente foi evaporado à temperatura ambiente sob capela de exaustão de gases. Diante da massa obtida, determinou-se o teor percentual do óleo essencial pela fórmula: T% = Massa do óleo (g) / 40g x 100. RESULTADOS E DISCUSSÃO As análises de regressão mostraram que houve interação dos tempos de extração com o tipo de processamento das folhas (inteiras e picadas). Na Figura 1, podem-se verificar os resultados do teor de óleo essencial para os diferentes tempos de extração utilizando-se folhas inteiras. Hortic. bras., v. 26, n. 2 (Suplemento - CD Rom), jul-ago. 2008 S2161
Observa-se um aumento do teor de óleo essencial á medida que o tempo de extração aumenta, de forma quadrática, até o ponto máximo estimado de 0,066% de óleo essencial no tempo de 86,21 minutos. Á partir desse ponto ocorreu uma redução do teor de óleo. Ehlert et al. (2006), estudando tempos de hidrodestilação na extração de óleo essencial de sete espécies de plantas medicinais, concluiu que, o máximo teor de óleo essencial foi obtido aos 130 minutos de extração para Cymbopogon citratus, 150 minutos para as espécies: Cymbopogon winterianus, Aristolochia sp, Hyptis pectinata e Hyptis fruticosa; 160 minutos para Lippia sidoides e 230 minutos para Eucalyptus globulus. Comparando a Hyptis marrubioides com as espécies do mesmo gênero, Hyptis pectinata e Hyptis fruticosa, observase que existe uma diferença significativa no tempo de extração. Apesar do tempo máximo de extração utilizado em H. marrubioides neste trabalho ser de 120 minutos, observa-se claramente que ao utilizar folhas inteiras de H. marrubioides, houve uma tendência de queda do teor de óleo essencial á partir de 86 minutos de extração, aproximadamente. Com relação aos tempos de extração do óleo, utilizando-se folhas picadas, houve um ajuste linear positivo, onde, para cada minuto adicionado na extração, houve um incremento de 0,000463 % de óleo essencial (Figura 2). Porém, para atingir o teor máximo de 0,06% de óleo essencial, gastou-se aproximadamente 120 minutos de extração, comparado as folhas inteiras (86 minutos), prolongando o tempo de extração. Esse comportamento não era esperado, pois a fragmentação poderia expor as estruturas armazenadoras de óleo essencial e otimizar a extração. Silva et al. (2004), estudando os teores de óleos essenciais de folhas de cidrão (Aloysia triphylla), frescas e secas em diferentes tamanhos de fragmentos verificaram que folhas inteiras secas, frescas inteiras e frescas processadas em liquidificador não apresentaram diferenças no teor de óleo essencial. Porém as folhas secas trituradas em moinho apresentaram o menor rendimento no ensaio. Com este trabalho concluiu-se que o maior teor de óleo foi obtido com folhas inteiras com 86 minutos de extração e que a fragmentação foi linear. AGRADECIMENTOS Á CAPES, CNPq e FAPEMIG pelo fornecimento de bolsas e auxílio financeiro. LITERATURA CITADA BERNARDO-GIL, M; RIBEIRO, MA; ESQUIVEL, MM. 2002. Produção de extratos para a indústria alimentar: uso de fluidos supercríticos. Portugal: Boletim de Biotecnologia, 73, 21 p. BOS, R; KOULMAN, A; WOERDENBAG, HJ; QUAX, WJ; PRAS, N. 2002. Volatile components from Anthriscus sylvestris (L.) Hoffm. Journal of Chromatography 966: 233-238. CORRÊA, MP. 1931. Dicionário das Plantas Úteis e das Exóticas Cultivadas. Imprensa Nacional: Rio de Janeiro. EHLERT, PAD; BLANK, AF; ARRIGONI-BLANK, MF; PAULA, JWA; CAMPOS, DA; ALVIANO, CS. 2006. Tempo de hidrodestilação na extração de óleo essencial de sete espécies de plantas medicinais. Revista Brasileira de Plantas Medicinais 8 (2): 79-80. Hortic. bras., v. 26, n. 2 (Suplemento - CD Rom), jul-ago. 2008 S2162
FERREIRA, DF. Análises estatísticas por meio do Sisvar para Windows versão 4.0. 2000. In: REUNIÃO ANUAL DA REGIÃO BRASILEIRA DA SOCIEDADE INTERNACIONAL DE BIOMETRIA, 45. Anais... São Carlos: UFSCar. p. 255-228. GÁMIZ-GRACIA, L; LUQUE de CASTRO, MD. 2000. Continuous subcritical water extraction of medicinal plant essential oil: comparison with conventional techniques. Talanta 51: 1179-1185. HARLEY, RM. 1988. Evolution and distribution of Eriope (Labiatae) and its relatives in Brasil. In: VANZOLINI, PE; HEYER, WR (eds). Proceedings Patterns. Rio de Janeiro: Academia Brasileira de Ciências. p. 71-80. HAWTHORNE, SB. 1993. Comparison of hydrodistillation and supercritical fluid extraction for the determination of essential oils in aromatic plants. Journal of Chromatography 634: 297-308. JANTAN, I; LING, YE; ROMLI, S. A comparative study of the constituents of the essential oils of three Cinnamomum species from Malaysia. Journal of Essential Oil Research 15: 387-91. KUNBNT, TM; PROBSTLE, A; RIMPLER, H; BAUER, R; HEINRICH, M. 1995. Biological and pharmacological activities and further constituints of Hyptis verticullata. Planta Medica 61(3): 227-232. LEAL, TCAB; FREITAS, SP; SILVA, JF da; CARVALHO, AJC de. 2001. Avaliação do efeito da variação estacional e horário de colheita sobre o teor foliar de óleo essencial de capim-cidreira (Cymbopogon citratus (DC.) Stapf). Revista Ceres 48(278): 445-453. LETCHAMO, W. 1992. A comparative study of camomile yield, essential oil and flavonoids content under two swoning seasons and nitrogen levels. Acta Horticulturae 306: 375-384. SILVA, R; PINTO, JEBP; BERTOLUCCI, SKV; DINIZ, KA. 2004. Teores de óleos essenciais de folhas frescas e secas em diferentes estados de divisão de cidrão (Aloysia triphylla (L Hérit) Britton)). In: CONGRESSO DOS PÓSGRADUANDOS DA UFLA, 8. Anais... Lavras. p. 43. VENSKUTONIS, PR. 2003. Composition os essential oil of sweet flag (Acorus calamus L.) leaves at different growing phases. Journal of Essential Oil Research 15: 313-8. WHO WORLD HEALTH ORGANIZATION. 1998. Quality control methods for medicinal plant materials. Geneve. 115p. WILLIS, JC. 1973. Dictionary of flowering plants and ferns. London: Columbia University Press Hortic. bras., v. 26, n. 2 (Suplemento - CD Rom), jul-ago. 2008 S2163
0,08 0,07 y = -0,053331 + 0,002759x - 0,000016x 2 R 2 = 0,75 A 0,08 0,07 y = 0,004325 + 0,000463x R 2 = 0,99 B Teor de óleo essencial (%) 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 Teor de óleo essencial (%) 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0,01 0 30 60 90 120 Tempos de extração (min) 0 30 60 90 120 Tempo de extração (min) Figura 1. Valores médios do teor de óleo essencial, em porcentagem, (A) extraído da massa fresca de folhas inteiras de H. marrubioides, (B) extraído da massa fresca de folhas picadas de H. marrubioides, nos quatro tempos de extração (30, 60, 90 e 120 min). Hortic. bras., v. 26, n. 2 (Suplemento - CD Rom), jul-ago. 2008 S2164