Introdução ao delineamento experimental

Transcrição

1 Introdução ao delineamento experimental Prof. Dr. Vinicius Campos Disciplina de Bioestatística e Delineamento Experimental Graduação em Biotecnologia - UFPel

2 Abordagens da aula Histórico 2. O Que são experimentos e para que servem 3. Planejamento de experimentos 4. Execução de experimentos 5. Análise e interpretação dos resultados

3 Histórico Empirismo homem pré-histórico

4 Histórico Método Científico Grécia Antiga Filósofos Gregos Revolução Científica Idade Média Isaac Newton Métodos Estatisticos Modernos século XX Métodos atuais - Bioinformática

5 O que é um experimento? Um experimento é um teste feito para validar uma hipótese A experimentação razão pela qual nós estamos onde estamos

6 O que um experimento propicia para o pesquisador Reflita e estude sobre o experimento Publique os resultados Seja critico com seus dados Boa reputação

7 Dolly e Sir Ian Wilmut

8 Planejamento do experimento Um experimento é igual à um crime Nunca será perfeito

9 Planejamento do experimento Mas como driblamos este problema? Definindo objetivos específicos

10 Planejamento do experimento 1. Defina a pergunta Hipótese define o objetivo 2. Esboce o experimento (projeto) Variáveis experimentais Controles Número de amostras e repetições do exp. Estatística 3. Organize o experimento 4. Realize o experimento 5. Colete e analise os dados

11 Erros comuns no planejamento Não pensar sobre a necessidade do exp. Planejar experimentos grandes Esquecer dos controles Não verificar se todos os reagentes estão disponíveis Não verificar se a estrutura do laboratório é suficiente para a execução do experimento Não saber como é feita a coleta e análise dos dados

12 Referencial teórico Buscar leitura sobre experimentos semelhantes/metodologias Buscar protocolos Entrar em contato com pesquisadores Ler poucos artigos no início Artigos em português e depois em inglês Buscar artigos sobre o tema uma vez por semana

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17 Referencial teórico

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19 Referencial teórico

20 Referencial Teórico

21 Controles Controles experimentais Marcador de peso molecular de DNA Controles de tratamento Positivos ou negativos Controles positivos - soro sabidamente contaminado Controles negativos soro sabidamente não-contaminado

22 Controles Intervalos de tempo Expressão gênica em 0, 2, 4, 8, 16 h após o tratamento com IGF-1 em células tumorais em cultivo

23 Controles O que fazer se não der para fazer os controles? Alguns controles podem ser excluídos nesta ordem: 1. Controles de procedimento 2. Duplicatas de controles experimentais Se tiver que excluir outros controles desista do experimento!!!

24 Execução do experimento Cuidados com as normas de cada técnica Rigidez na repetibilidade Use protocolos estabelecidos

25 Execução do experimento - protocolos 1. Obtenha o protocolo 2. Leia o protocolo e veja se ele faz sentido 3. Prepare os reagentes listados no protocolo, verifique e reserve os equipamentos necessários 4. Siga o protocolo exatamente na primeira vez 5. Modifique o protocolo baseado na sua experiência com ele

26 Termos usados na análise dos dados Repetibilidade similaridade de replicação, mensurações de uma técnica ou equipamento; Ex. replicatas de absorbância Reprodutibilidade quanto dois ou mais métodos de mensuração de mesma quantidade concordam; Ex. mensurações realizadas em laboratórios diferentes

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28 Protocolos

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30 Coleta e análise dos dados Coleta dos dados Saiba que tipo de resultado você está coletando!!! Exemplo: Avaliação da produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) em oócitos maturados in vitro Técnica: coloração dos oócitos com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína corante fluorescente Resultado:????

31 Oócitos corados com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína

32 Intensidade de fluorescência dos oócitos corados

33 Análise dos dados Estatística Comparação dos dados Cálculos para testar se a diferença entre os dados é devida ao tratamento ou é meramente ao acaso Importante!!! Conhecer o tipo de dado com o que você está trabalhando Identificar previamente que teste estatístico será usado para comparar o tipo de dados que será obtido

34 Termos usados na análise dos dados Repetibilidade similaridade de replicação, mensurações de uma técnica ou equipamento; Ex. replicatas de absorbância Reprodutibilidade quanto dois ou mais métodos de mensuração de mesma quantidade concordam; Ex. mensurações realizadas em laboratórios diferentes

35 Apresentação dos dados Os dados deverão ser resumidos e organizados para apresentação e futura publicação Em tabelas quando é importante a apresentação dos valores Em gráficos apresentação distribuições, tendências ou relacionamento entre variáveis

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37 Intensidade de fluorescência dos oócitos corados

38 Interpretação de resultados O experimento funcionou? controles Quais são os resultados? - análise O que o experimento significa? - discussão Outros investigadores vão entender o experimento? - pergunte O resultado pode ser repetido? faça novamente

39 O experimento NÃO funciona!!! Checar os equipamentos Checar os reagentes Refaça parte do experimento Refaça todo o experimento Pense em trocar de experimento Geralmente as idéias precedem a tecnologia disponivel!

40 O experimento funciona!!! Escreva e publique os resultados imediatamente!!! Deposite uma patente de invenção!!!

41 Referências

42 Prof. Dr. Vinicius Farias Campos Graduação em Biotecnologia