Efeito Matriz Comparando-se Inclinação das Curvas
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- Rui Delgado Mendonça
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1 Título do Eixo Avaliação da Seletividade do Método Abs_Concentração Abs_Concentração Matriz Água Concentração Calculada Concentração Teórica Concentração Recuperado Concentração Teórica Concentração Recuperado 0,0290 0,0599 0,01 5,04 5,06 0,0290 0,0596 0,01 4,84 5,20 0,0289 0,0595 0,01 5,14 5,16 0,0586 0,1172 0,02 4,96 5,09 0,0586 0,1171 0,02 Amostra com Matriz ( 5 ) 5,00 5,12 0,0585 0,1169 0,02 Amostra sem Matriz ( 5 ) 5,47 5,10 0,0907 0,1763 0,03 4,99 5,15 0,0905 0,1762 0,03 5,47 0,0906 0,1761 0,03 0,1157 0,2928 0,04 0,1157 0,2926 0,04 Média 5,114 Média 5,1257 0,1155 0,2926 0,04 N de Pontos 8 N de Pontos 7 0,1463 0,5821 0,05 Desvio Padrão 0,2351 Desvio Padrão 0,0476 0,1462 0,5819 0,05 0,1461 0,5820 0,05 S 1 2 3,27 0,2933 0,8597 0,09 S 2 2 3,75 0,2933 0,8596 0,09 S_a 3,49 0,2932 0,8594 0,09 0,4404 1,1525 0,14 F_calculado 0,87 0,4403 1,1523 0,14 F_critico 2,77 0,4402 1,1524 0,14 A MATRIZ NÃO TEM EFEITO SOBRE A PRECISÃO, AVALIAR CONDIÇÃO I ( t ) CONDIÇÃO I t_calculado 0,012 t_critico 2,160 NÃO EXISTE SIGNIFICÂNCIA DAS MÉDIAS, AVALIAR PELA CONDIÇÃO I ( t ) CONDIÇÃO II Veef t_calculado t_critico 14,382-0,012 2,145 NÃO EXISTE SIGNIFICÂNCIA DAS MÉDIAS FAIXA DE TRABALHO E FAIXA LINEAR DE TRABALHO 0,6 Efeito Matriz Comparando-se Inclinação das Curvas y = 3,1006x 0,5-1E-06 R² = 0,9999 0,4 0,3 y 0,2 = 8,5654x - 0,0003 R² = 0,9561 0,1 10,0 60,0 110,0 160,0 210,0 260,0 310,0 Coeficiente angulares iguais o que demonstra não haver efeito pela matriz. 1,3 1,2 1,1 1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 Curva_Calibração Curva_Matriz_Água Sinal/Concentração Log Concentração Limite Inferior Limite Superior 3, , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , ,95 1,05-0, , , , ,95 1,05-0, Média_Médias -0, ,50-2,00-1,50-1,00-0,50 0,00 3,220 1,6 1,55 3,200 1,5 3,180 1,45 1,4 3,160 1,35 3,140 1,3 1,25 3,120 1,2 3,100 1,15 1,1 3,080 1,05 3, ,95 3,040 0,9 0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 Série2 Faixa de Trabaho Linear
2 Avaliação : Padrão 1 Padrão 2 Padrão 3 Padrão 4 0,01 0,02 0,03 0,04-0, ,44628E-05 0, , , ,44628E-05 0, , , ,67146E-05 0, , , , , , ,0000 0,0000 0,0001 0,0001 Padrão 5 Padrão 6 Padrão 7 0,05 0,09 0,14-0, ,71808E-05 0, , ,71808E-05 7,19075E-05-0, ,94327E-05 3,96556E-05-0,0002 0,0000 0,0001 0,0001 0,0000 0, Médias_Médias -0, Média_Amplitude 0,0001 n ( Replicatas ) 3 Gráfico Controle Resíduos Média Amostras LIC LSC Média_Média -0, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,030 0,0300 0,025 0,020 0,0250 0,015 0,0200 0,010 0,005 0,000-0, ,0150 0,0100 Limite Inferior de Controle Limite Superior de Controle Médias_Médias_ Resíduos Série4-0,010 0,0050-0,015-0,020-0, , , , , , , ,0000-0,025-0,0050
3 Gráfico de controle Demonstrar evidências de que um processo está operando em estado de controle estatistico e dar sinais da presença de causas especiais, para que seja aplicada ações corretivas apropriadas. LINEARIDADE Corresponde a capacidade do método em fornecer resultados diretamente proporcionais á concentração da substância em exame dentro de uma determinada faixa de aplicacão. 0,5 0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 y = 3,1006x - 1E-06 R² = 0,9999 0,0 0,0 0,0 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 Coeficiente de Correlação ( R 2 ) 0,9999 Correlação entre sinal medido e concentração. Anvisa recomenda coeficiente de 0,99 e INMETRO um valor acima de 0,90 Análise de Variância para teste de Linearidade F_calculado ,68 0,00126 Significância da Regressão F_crítico 4,38 2,96 Falta de ajuste da Regressão Comentários Significância da regressão, foi obtido pela razão entre média quadrática da regressão e dos resíduos Falta de ajuste da regressão foi determinada a partir da razão entres as médias quadráticas da falta de ajuste e do erro puro. Observação Existe Significância Não há Falta de Ajuste Analises de Dispersos Antes de se efetuar a avaliação e interpretação de uma série de dados de resultados obtidos em ensaios ou calibrações, é necessário verificar a existência de valores que possam eventualmente ser considerados dispersos. A calibração analítica ( Curva de calibração ), será avaliada pelos testes Cochran, Dixon e Grubbs. Cochran : comparação de suas variâncias, verificando a variabilidade dos pontos da regressão. É um teste UNILATERAL, isto é, verifica somente o maior valor. Dixon : É eficiente quando se deseja comparar valores individuais, médios ou ainda diferença entre dois resultados, obtido por um mesmo conjunto de dados. É um teste BILATERAL, onde são testado os valores dos extremos, ou seja o maior e menor valor. Esse teste avaliará a presença de "Aberrações" na curva de calibração, testando suas extremidades. Grubbs : Os valores da curva estão dispostos em ordem crescente e serão avaliados independentemente à 5 de acordo com valores tabelados. É considerado disperso e estranho quando valores calculados forem maiores que os tabelados a 1 e 5, quando um valor é avaliado, e também dispersos e estranhos quando forem menores que 1 e 5 tabelados, quando são avaliados dois valores. Resultados obtidos pelos teste para a avalição da curva de calibração. Testes Decisão 1 5 Cochran 0,206 Aceito Aceito Dixon menor valor 0,357 Aceito Aceito maior valor 0,072 Aceito Aceito Grubbs menor valor 0,992 - Aceito maior valor 1,951 - Aceito Conclusão : Os testes de Hipótises, confirma a não existência de Outliers (Dispersões ), portanto a Faixa de trabalho e Linear, são confiaveis no ranger de aplicação. TESTES DE HIPÓTESES Cochran Grubbs DIXON TESTES DE HIPOTESES Teste de Cochran Teste de DIXON ( Outliers) C_Calculado C_tab 5 0,21 0,561 Para Maior Valor Para menor valor 0, , C_tab 1 0,664 Decisão
4 Decisão Aceito Aceito Aceito Valor Crítico 1 5 0,68 0,569 Nº Pontos ( Grupos ) Observaçções 7 3 Teste de Grubs Média Desvio Padrão ( S ) 0,05 0,05 Valor Crítico de G ( 1 ) 2,139 Valor Crítico de G ( 5 ) 2,020 Maior Valor Menor valor Aceito Aceito G_ Calculado di ( x - Xmédia ) Decisão ( 5 ) 0,99 0,04 Aceito 0,78 0,04 Aceito 0,55 0,02 Aceito 0,37 0,02 Aceito 0,15 0,01 Aceito 0,90 0,04 Aceito 1,95 0,09 Aceito SENSIBILIDADE Descreve a quanto a resposta varia com a variação da concentração do analito. Pode ser expressso pela inclinação da curva analítica ( Coeficiente Angular ) Sensibilidade para o método 3,1006 LIMITE DE DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO Limite de Quantificação representa a menor porção da substância que se pode quantificar utilizando um procedimento analítico experimental. Pode ser calculado a partir de avaliações e recuperações em prova em Branco, porém se as respostas não tiverem oscilação ou seja sempre resposta nula, recomenda-se avaliar o LQ recuperando valores ao menor nível possivel e de resposta constante. O método de "Houbax & Vox ", avalia o LD e LQ, construindo uma nova curva de calibração, usando pontos abaixo do limite de concentração utilizado na curva tradicional. Essa nova calibração com pontos abaixo do limite da calibração tradicional obten-se valores de intercepto, Inclinação e Correlação. Calcula-se RSD ( Desvio padrão dos residuos ), comparando-se valores de concentrações calculadas contra concentrações reais. A estatistica recomenda se plotar no eixo X a concentração, mais se percebe varias vantagens plotando a concentração no eixo Y, especialmente ao tratar de condições como limite de Detcção e Incerteza da curva analítica, observa-se que a incerteza da curva analítica é representada pelo valor do RSD. Onde : Para o método os valores são : Limite de Detcção LD = 3 * RSD + Coef. Linear 0,24 Limite de Quantificação LQ = 10 * RSD + Coef. Linear 0,51 RSD ± 0,04 - Avaliação de Exatidão Concentração Teórica Analisada 3,0000 Baixa ( 50 ), Média ( 100 ), Alta ( 150 ) Incerteza ( u ) Concentração Teórica Concentração Recuperada Concentração Teórica Concentração Recuperada 1,452 2,992 1,503 2,996 1,459 2,988 1,5 3,0 Média 1,471 Média 2,992 Nº Pontos 3,000 Nº Pontos 3,000 Desvio Padrão ( s ) 0,028 Desvio Padrão 0,004 CV 1,879 CV 0,134 Quantificação da Incerteza associada á exatidão R_m ( Recuperação média do método ) 0,981 R_m ( Recuperação média do método ) 0,997 u( R_m) 0,0106 u( R_m) 0,0008 Avaliação Extidão do Método t_critico 4,303 t_critico 4,303 t_calculado 1,796 t_calculado 3,423 não apresenta siguinificância diferente de 1 (100 ) não apresenta siguinificância diferente de 1 (100 ) t_calculado 1,466 t_calculado 2,828 Concentração Teórica Concentração Recuperada 4,509 t_critico 4,30
5 4,5 4,573 4,520 COMENTÁRIOS Análise Estatistica avaliação ANOVA, dados obtidos como t_students, teste t, Desvio padrão e CV. Média 4,534 Nº Pontos 3,000 Desvio Padrão 0,034 CV 0,755 Quantificação da Incerteza associada á exatidão R_m ( Recuperação média do método ) 1,008 u( R_m) 0,0044 Avaliação Extidão do Método t_critico 4,303 t_calculado 1,721 não apresenta siguinificância diferente de 1 (100 ) t_calculado 1,405 1,5 3,00 4,50 96,80 99,73 100,20 100,20 99,87 101,62 97,27 99,60 100,44 média média média 98,09 99,73 100,76 Desvio Padrão ( S ) Desvio Padrão ( S ) Desvio Padrão ( S ) 1,84 0,13 0,76 DPR ( CV) DPR ( CV) DPR ( CV) 1,88 0,13 0,75 t_calculado t_calculado t_calculado 1,47 2,83 1,41 t_critico 4,53 Recuperação Unidade VR 101,9 TAXA DE RECUPERÇÃO 100,3 99,3 Conclusão : Exatidão foi obtida a partir de analises de padrões em concentrações conhecidas em replicatas ( 7 ), equivalendo a uma concentração baixa, média e alta da faixa avaliada, concentração de 3, sendo 50, 100 e 150 do valor calculado aproximadamente. De acordo com tratamento estatistico realizado por t_students, verificou-se que t_calculado é inferior ao t_tabelado (critico ), não havendo evidências de ERRO sistemático no método analítico, com nivel de confiança de 95, comprovando que o procedimento ( Método ) é EXATO. > 70 < 120 Avaliação da Precisão Repetitividade ( Faixa Linear Regressão (Concentrações, Baixa, Média, Alta )) Concentração Recuperado Concentração Recuperado 0,998 2,5161 0,991 2,5343 1,016 2,5387 1,000 2,5520 1,00 1,014 2,50 2,5611 1,022 2,5545 1,036 2,5533 Média 1,0 Média 2,5 Nº Pontos 7,00 Nº Pontos 7,00 Desvio Padrão 0,02 Desvio Padrão 0,02 CV () 1,54 CV () Cv () Referência 5,66 Cv () Referência 4,93 Concentração Recuperado Concentração Recuperado 3,4299 4,9697 3,5261 5,0465 3,5594 5,0607 3,5107 5,0726 3,50 5,00 3,5451 5,0971 3,5495 5,0678 3,5720 5,0851 Média 3,5 Média 5,1 Nº Pontos 7,00 Nº Pontos 7,00 Desvio Padrão 0,05 Desvio Padrão 0,04 0,61
6 CV () 1,35 CV () 0,83 Cv () Referência 4,68 Cv () Referência 4,44 Teste Repetitividade ( Padrão Fortificação ) Replicatas Fortificação Resultado Experimental Conc. Recuperada 1 2,00 2,0000 3,90 2 2,00 2,0000 3,97 3 2,00 2,0000 3,94 4 2,00 2,0000 3,98 5 2,00 2,0000 4,02 6 2,00 2,0000 3,89 7 2,00 2,0000 3,92 8 2,00 2,0000 3,92 9 2,00 2,0000 3, ,00 2,0000 3,99 Média 3,9 t_students 4,6 Desvio Padrão 0,0419 2,3 Repetitividade ( t_st*(raiz(2))*s) 0,1342 Coeficiente de variação ( CV ) 1,0624 t_calculado Recuperação 98,7 3,7 PRECISÃO INTERMEDIARIA ( DIAS E ANALISTAS ) Analistas A B C Parâmetros de Validação Concentração Dia ( 1 ) Dia ( 2 ) ANALITO ANALITO 30,900 31,600 31,300 31,400 31,400 31,100 31,100 31,500 31,200 31,200 31,100 31,300 Média 31, ,3500 Desv. Pad ( ± ) 0,1751 0,1871 Cv () 0,5619 0,5968 Totais 187,0 188,1 Variância DENTRO GRUPOS 0,0256 0,0292 Analistas D E F G Parâmetros de Validação Concentração Dia ( 3 ) Dia ( 4 ) ANALITO ANALITO 31,400 0,000 31,200 0,000 31,300 0,000 31,200 0,000 31,100 0,000 31,500 0,000 Média 31,2833 0,0000
7 Desv. Pad ( ± ) 0,1472 0,0000 Cv () 0,4705 #DIV/0! Totais 187,7 0,0 Variância DENTRO GRUPOS 0,0181 0,0000 T Média Geral Soma Yij^ , ,42 SST 4399,760 Sw2 Calculo Variância dentro Grupos 0,0711 0,0625 0,0136 0,0000 0,0178 0,0025 0,0069 0,0000 0,0544 0,0625 0,0003 0,0000 0,0044 0,0225 0,0069 0,0000 0,0011 0,0225 0,0336 0,0000 0,0044 0,0025 0,0469 0,0000 SOMA 0,0256 0,0292 SW2 Calculo Variância média dentro Grupos 0, ,0181 0,0000 Sb2 Calculo variância entre grupos Média Total 7,79 7,84 7,82 Ni 6 0,00 TN 24 SOMA calculo Variância entre Grupos 23,45 SQ/g.l 357, , , ,4150 SOMA 879,865 Fonte SQ ( Soma Quadrática ) gl ( Graus de Liberdade ) MQ - Média Quadrática Entre Grupos 879, ,28822 Dentro dos Grupos 3519, ,99477 Total 4399, F_calculado Valor-P F_Critico 1,6665 0,2062 3,098 Significância Conclusão : De acordo com os dados obtidos, pode-se concluir que o procedimento ( método ) apresenta repetitividade eficiente, visto que o desvio padrão relativo ( DPR, CV, RSD ) é inferior a 5, limite especificado pelo INMETRO. O calculo estatistico t_calculado, é menor que t_tabelado ( critico ), logo podemos afirmar que a 95 de confiança, não há diferenças estatisticamente significativas entre dias e analistas ( Precisão Intermediária ). O método apresenta-se PRECISO intra-corrida e inter-corrida. PH 4,1 44,40 44,61 A 2,91 45,98 44,70 B 2,2 43,20 41,45 C 4,1 44,84 45,40 A 2,91 45,17 44,26 B 2,2 44,28 42,69 C Média 44,81 45,03 42,91 Desv. Pad 0,43 0,74 1,17 Cv() 0,96 1,63 2,74 Totais 179,25 180,11 171,62 T Média Geral Soma Yij^2 530, , ,22 SST 17,242 Ni 4 TN 12 método apresenta PRECISÃO, médias estudadas são Siguinificativamente IGUAIS Avaliação da Robustez Variando O Parâmetro PH DADOS GRUPOS, Sw2 Calculo Variância dentro Grupos 0,1702 0,0410 0,0008 0,3452 0,9073 0,1073 0,0203 0,5891 0,0870 2,1170 1,8906 0,0462 Sw2 SOMA Calculo Variância média dentro Grupos 0,3951
8 0,1393 0,4060 1,0352 Variância DENTRO GRUPOS 0,1393 0,4060 1,0352 Sb2 Calculo variância entre grupos 14, ,01 14,30 Média Total SOMA 44,25 Sb2 calculo Variância entre Grupos 1, , ,21818 MQ 3,640 SQ/g.l Fonte SQ ( Soma Quadrática ) gl ( Graus de Liberdade ) MQ - Média Quadrática Entre Grupos 3, ,81995 Dentro dos Grupos 13, ,51130 Total 17, Significância F_calculado Valor-P F_Critico 1,20 0,344 4,256 Método Apresenta Robustez a Condição Avaliada Avaliação da Robustez Variando O TEMPO Minutos DADOS GRUPOS 60 44,25 44,09 A ,45 43,40 B ,39 43,26 C 60 43,13 45,05 A ,30 44,23 B ,99 44,10 C Média 44,13 43,35 43,19 Desv. Pad 0,79 0,79 0,88 Cv() 1,79 1,83 2,03 Totais 176,52 173,38 172,74 T Média Geral Soma Yij^2 522, , ,83 SST 8,111 Ni 4 TN 12, Calculo Variância dentro Grupos 0,0144 0,0016 1,0000 0,8464 0,0110 0,0030 1,0920 0,7832 0,0420 0,0056 1,4280 0,8372 Sw2 SOMA Calculo Variância média dentro Grupos 0,3790 0,4656 0,4723 0,5782 Variância DENTRO GRUPOS 0,4656 0,4723 0,5782 Sb2 Calculo variância entre grupos 14, ,45 14,40 Média Total SOMA 43,55 calculo Variância entre Grupos 1, , ,54268 MQ 0,682 SQ/g.l Fonte SQ ( Soma Quadrática ) gl ( Graus de Liberdade ) MQ - Média Quadrática Entre Grupos 0, ,34108 Dentro dos Grupos 7, ,82543 Total 8, Significância F_calculado Valor-P F_Critico 0,41 0,673 4,256 Método Apresenta Robustez a Condição Avaliada Avaliação da Robustez Variando O TEMPO
9 Avaliação da Robustez Variando O TEMPO PH DADOS GRUPOS 4,1 44,40 44,61 A 2,91 45,98 44,70 B 2,2 43,20 41,45 C 4,1 44,84 45,40 A 2,91 45,17 44,26 B 2,2 44,28 42,69 C Média 44,81 45,03 42,91 Desv. Pad 0,43 0,74 1,17 Cv() 0,96 1,63 2,74 Totais 179,25 180,11 171,62 T Média Geral Soma Yij^2 530, , ,22 SST 17,242 Ni 4 TN 12, Calculo Variância dentro Grupos 0,1702 0,0410 0,0008 0,3452 0,9073 0,1073 0,0203 0,5891 0,0870 2,1170 1,8906 0,0462 Sw2 MQ SQ/g.l SOMA Calculo Variância média dentro Grupos 0,3951 0,1393 0,4060 1,0352 Variância DENTRO GRUPOS 0,1393 0,4060 1,0352 Sb2 Calculo variância entre grupos 14, ,01 14,30 Média Total SOMA 44,25 calculo Variância entre Grupos 1, , ,21818 MQ 2,730 SQ/g.l Fonte SQ ( Soma Quadrática ) gl ( Graus de Liberdade ) MQ - Média Quadrática Entre Grupos 2, ,36496 Dentro dos Grupos 14, ,61240 Total 17, Significância F_calculado Valor-P F_Critico 0,85 0,460 4,256 Método Apresenta Robustez a Condição Avaliada
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