EFEITO DE DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE BAP E ANA NA PROPAGAÇÃO IN VITRO DA FIGUEIRA (Ficus carica L.) 1

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1 EFEITO DE DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE BAP E ANA NA PROPAGAÇÃO IN VITRO DA FIGUEIRA (Ficus carica L.) 1 GRAZIELLA RIBEIRO BRUM ADRIANO BORTOLOTTI DA SILVA MOACIR PASQUAL 3 RESUMO Objetivou-se com este trabalho estudar a multiplicação in vitro da figueira (Ficus carica L.) Roxo de Valinhos. Utilizaram-se diferentes concentrações de -Benzilaminopurina BAP, ;,5; 1; ; mgl -1, associadas a diferentes concentrações do ácido naftalenoacético - ANA, ;,5;,1;, mgl -1. O meio de cultura utilizado foi o WPM acrescido de 15 gl -1 de sacarose, distribuído em tubos (15 x 5 mm) e autoclavados a 11 C por minutos. A inoculação dos explantes foi efetuada em câmara de fluxo laminar. Após o processo de inoculação, o material foi transferido para sala de crescimento com temperatura de ± 1 C, irradiância de 35µMm - s -1 e fotoperíodo de 1 horas. Após dias, avaliaram-se o comprimento da maior raiz, comprimento das brotações, número total de brotos, número de brotos maiores que 1 cm, peso da matéria fresca da raiz e peso da matéria fresca da parte aérea. Os melhores resultados para comprimento de raízes, comprimento das brotações, número total de brotos e brotos maiores que 1 cm foram observados quando se utilizou BAP na concentração de mgl -1 na ausência de ANA. O aumento da concentração de ANA reduziu o nível de resposta para as características avaliadas. TERMOS PARA INDEXAÇÃO: Propagação in vitro, figo, reguladores de crescimento, Ficus carica. EFFECT OF DIFFERENT CONCENTRATIONS OF BAP AND ANA IN THE FIG (Ficus carica L.) IN VITRO PROPAGATION ABSTRACT The present work intended to evaluate the in vitro multiplication of fig (Ficus carica L.). Different concentrations (;.5; 1; ; mgl -1 ) of - Benzylaminopurine (BAP) were used in combination to four naftaleneacetic acid (NAA) concentrations (;.5;.1;. mgl -1 ). The material was inoculated in half strength WPM salts and 15 g sucrose L -1, distributed into tubes (15 5 mm) and autoclaved at 11 C for minutes. Nodal segments with two buds were aseptically INDEX TERMS: In vitro propropagation, fig, growth regulators, Ficus carica. inoculated in test tubes containing the culture media and transferred to a growth room at 7 ± 1 C and 35 µm m - s - 1 light intensity. Root and aerial part length, total sprouts, number of sprouts larger than 1 mm, and root and aerial part fresh matter weight were evaluated after days. The best results for roots and aerial part length, total sprouts, and number of sprouts larger than 1 mm were observed when BAP was used at mgl -1 in the absence of NAA. INTRODUÇÃO O Brasil é o segundo maior exportador de figo (Ficus carica L.) do mundo, aproximadamente toneladas, perdendo apenas para a Turquia, que exporta cerca de. toneladas. Um dos requisitos para elevada produtividade e longevidade dos pomares é o uso de mudas de alta qualidade. Para que essas mudas sejam produzidas dentro dos padrões exigidos por lei e possuam preços competitivos, é muito importante a otimização do sistema propagativo, aumentando a quantidade, qualidade e velocidade de cres- 1. Parte da dissertação apresentada à UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS, Caixa Postal Lavras, MG, pelo primeiro autor, como um dos requisitos do curso de Mestrado em Agronomia, área de concentração Fitotecnia. Apoio financeiro do CNPq.

2 1. Engenheiro Agrônomo, M.Sc. em Agronomia, área de concentração Fitotecnia da UFLA. 3. Engenheiro Agrônomo, Dr., Professor Titular, UFLA. cimento e desenvolvimento das mudas no viveiro e reduzindo o custo unitário das mesmas. Convencionalmente, a figueira é propagada assexuadamente por estaquia, em que segmentos destacados da planta-mãe são colocados sob condições adequadas e, formando raízes adventícias, originam uma nova planta idêntica àquela que lhe deu origem (Válio, 19). Embora seja uma técnica que pode proporcionar elevados percentuais de enraizamento, a estaquia acarreta intenso uso de mão-de-obra, contribuindo para a elevação do custo da muda, além de disseminar doenças (como vírus, fungos e nematóides), reduzindo a qualidade final da muda. A cultura de tecidos, ou propagação in vitro, pode constituir um método auxiliar na produção eficiente de mudas de figueira com alta qualidade fitossanitária e genética. Essa técnica vem sendo utilizada com sucesso para a obtenção de mudas sadias em grande número de espécies economicamente importantes ou com dificuldade de propagação, realizando avanços importantes nos campos de genética, fisiologia e patologia (Paiva, 199). No entanto, para a cultura da figueira, são escassos os trabalhos realizados in vitro, conhecendo-se mu i- to pouco sobre o comportamento da planta in vitro e ex vitro, seja em viveiro ou no pomar (Guerra & Costa, 19). As auxinas e citocininas são as classes de reguladores de crescimento mais utilizadas na cultura de tecidos. A formação de raiz, parte aérea e calo em cultura de tecidos é regulada pela disponibilidade e interação dessas duas classes de reguladores de crescimento (Skoog & Miller, 1957). A auxina mais usada para estimular a multiplicação em meio de cultura é o ANA (ácido alfa-naftaleno acético). Ela participa na formação e desenvolvimento de raízes adventícias nos caules de segmento vegetativos de plantas. As citocininas, por sua vez, promovem nas plantas divisão, alongamento e diferenciação celular, retardam a senescência das plantas, promovem a quebra da dominância apical e induzem proliferação de gemas axilares. A citocinina mais utilizada é a benzilaminopurina (BAP), que tem se mostrado fundamental para multiplicação da parte aérea e indução de gemas adventícias. Sua concentração e tipo são os fatores que mais influenciam a multiplicação in vitro. Estabeleceu-se o presente trabalho com o objetivo de estudar a multiplicação in vitro da cultivar Roxo de Valinhos. MATERIAL E MÉTODOS O presente trabalho foi realizado no Laboratório de Cultura de Tecidos do Departamento de Agricultura da Universidade Federal de Lavras (UFLA), em Lavras - MG. O meio de cultura utilizado foi o WPM contendo 15 g L -1 de sacarose, 7 g L -1 de ágar (agente solidificante) e o ph foi ajustado para 5,. Para o preparo do meio, foram utilizadas soluções-estoque preparadas com água destilada e armazenadas em frascos de vidro escuro, a uma temperatura próxima de 5 C. Após o preparo, o meio foi autoclavado a 1,5 atm e à temperatura de 1 C, durante minutos. Os tratamentos constaram da adição ao meio de cultura dos reguladores de crescimento BAP, nas concentrações (;,5; 1; ; mg L -1 ), associados às concentrações de ANA, (;,5;,1;, mg L -1 ). Foram distribuídos 15 ml de meio de cultura, contendo os tratamentos, em tubos de ensaio com dimensões de 15 x 5 mm. O manuseio do material vegetal ocorreu em câmara de fluxo laminar. Os explantes foram constituídos de brotações com 1- cm de comprimento, e gemas foram excisadas de plântulas mantidas in vitro, provenientes da cultura de ápices meristemáticos, e inoculadas individualmente em tubos de ensaio. Em seguida, esses tubos foram fechados com tampas plásticas translúcidas e seladas com filme de PVC. Posteriormente, os tubos contendo as plântulas foram colocados em sala de crescimento com irradiância em torno de 35µMm - s -1, ± 1 C e fotoperíodo de 1 horas. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente ao acaso em esquema fatorial 5 x, com quatro repetições, três tubos por parcela, cada tubo contendo um explante. Utilizou-se o programa de análise estatística Sisvar (Ferreira, ) para a obtenção da análise de variância. Os fatores foram analisados por regressão polinomial. Após dias, o experimento foi avaliado, observando-se as seguintes variáveis: comprimento da maior raiz, comprimento das brotações, número total de brotos, número de brotos maiores que 1 cm, peso da matéria fresca da raiz e peso da matéria fresca da parte aérea. RESULTADOS E DISCUSSÃO Na Tabela 1 verifica-se o resumo da análise de variância para os parâmetros avaliados. Observa-se que houve efeito significativo para a interação BAP x ANA em todas as características avaliadas, exceto para peso da matéria fresca das raízes e da parte aérea.

3 15 Os melhores resultados para comprimento da maior raiz foram alcançados quando se adicionou BAP no meio de cultivo, sendo os maiores valores observados com a utilização de a mg L -1 de BAP. A presença de ANA não melhora os resultados. Quando se utilizou,5 mg L -1 de ANA, pode-se observar uma resposta linear crescente no comprimento da maior raiz. Nas concentrações mais elevadas de ANA, o comprimento da maior raiz aumentou até mg L -1 de BAP, decrescendo posteriormente. Valores superiores para o comprimento da maior raiz foram observados na ausência de ANA, demonstrando o efeito inibidor desse fitorregulador nessa variável. Segundo Skoog e Miller (1957), um balanço entre auxinas e citocininas, em que aumentando a concentração de auxinas em relação às citocininas, promoveria a formação de raízes. De maneira geral, as auxinas são as que mais influenciam no processo de enraizamento. No entanto, Nemeth (1979) e Gupta (19) observaram que a adição de citocininas foi favorável para o enraizamento. TABELA 1 Análise de variância para as características comprimento da maior raiz (CR) comprimento de brotações (CB), número total de brotos (NB), número de brotos maiores que 1cm (NB>1cm), peso da matéria fresca da raiz (PFR) e peso da matéria fresca da parte aérea (PFPA). UFLA, Lavras - MG, 1. Fonte de variação GL Quadrados Médios CR CB NB NB>1 PFR 1 PFPA 1 BAP 5 3,** 1,3** 5,** 3,**,9 ns,93 ns ANA,17 ns 13,** 13,** 1,**, ns, ns BAPxANA 11 5,7** 9,15** 15,** 13,7**, ns,7 ns ERRO 59 1,9,,9,79,,1 CV(%) 57,7 17, 7,51 3,,3 7,33 ** significativo a 1% de probabilidade 1 Variável transformada pela equação (X+1)^.5 Nº brotos > 1cm 1 -,5 1 1,5,5 3 3,5 ANA (, mg/l) ANA (,1 mg/l) ANA (,5 mg/l) ANA (, mg/l) Y =,5753+3,1x-,5315x R =,9 Y,5 =,39+1,37x R =,9 Y,1 =,573+,57x-,171x R =,79 Y, =,1971+,939x-,59x R =,97

4 1 FIGURA 1 Comprimento de raízes de plântulas Ficus carica in vitro desenvolvidas em meio WPM contendo diferentes concentrações de BAP e ANA. UFLA, Lavras-MG, 1. Tanto para comprimento da maior raiz, como também para comprimento de brotações, os melhores resul- considerável de brotos. Por esse resultado, sugere-se xina, que, na ausência de BAP, produziu um número tados foram observados, quando se adicionou apenas que nessa concentração ANA estaria estabelecendo um BAP ao meio de cultivo, sendo superiores nas concentrações entre e mg L -1, apresentando média de 7 cm nas dos explantes, o que estaria de acordo com que des- balanço hormonal adequado com as citocininas endóge- de comprimento (Figura ). Quando se utilizou ANA, creveram Skoog & Miller (1957). menor comprimento de brotos foi observado, e à medida Para Pierik (199), um adequado balanço entre auxinas e citocininas estabelece um eficiente controle no que se elevou a concentração de ANA de,1 para, mg L -1, a queda foi mais acentuada. A concentração de crescimento e na diferenciação das culturas in vitro. Segundo Cheema & Sharma (193), o BAP induz a uma alta mg L -1 de BAP na ausência de ANA incrementou não só o comprimento das brotações, como também o da raiz. taxa de multiplicação. Não houve efeito significativo para a concentração de Em trabalho com macieira, Yu i (199) observou,5 mg L 1 de ANA nos diferentes níveis de BAP, e a melhores resultados com a aplicação de 5 mg L -1 de BAP, média do tratamento apresentou brotações com de 1, independente de ANA, comprovando que aquele regulador de crescimento (BAP) deve ser incorporado ao cm de comprimento. Como ocorrido para as duas variáveis anteriormente avaliadas, também para número total de brotos de brotos. meio de cultura para permitir uma taxa de multiplicação (Figura 3) a adição ao meio de cultivo de apenas BAP Estudos com videira, realizados por Peixoto proporcionou os melhores resultados, sendo o maior (199), evidenciaram que o aumento da concentração de número de brotos formados entre as concentrações de ANA reduz o número de brotações. Maior número de e mg L -1. De novo, a presença de ANA não melhora a brotações por explante foi obtido com BAP a 1 mg L -1, na resposta organogênica, exc eto com,1 mg L -1 dessa au- ausência de ANA. Novak & Juvova (193) veri- Comprimento de brotações,5 1 1,5,5 3 3,5 ANA (, mg/l) ANA (,1 mg/l) ANA (, mg/l) Y =,1+,13x-,779x R =,93 Y,1 = 1,979+1,7x-,573x R =,5 Y, =1,357+1,7717x-,x R =,9

5 17 FIGURA Comprimento de brotações de Ficus carica in vitro cultivadas em meio WPM contendo diferentes concentrações de BAP e ANA. UFLA, Lavras-MG, 1. ficaram efeitos prejudiciais da adição do ANA em meio de cultura para regeneração de segmentos nodais de videira. Provavelmente a adição de ANA provocou o desbalanceamento da relação endógena de auxinas e citocininas dos explantes, reduzindo o número de brotações produzidas. O efeito benéfico do BAP na multiplicação das brotações pode ser relacionado com a influência desse regulador de crescimento na divisão celular e na quebra de dormência das gemas axilares, até então inibidas pela dominância apical. A produção de um maior número de brotos com comprimento superior a 1 cm dependeu apenas de BAP no meio de cultivo, com melhores resultados ocorrendo nas concentrações de a mg L -1 (Figura ). Uma vez mais, a adição de ANA ao meio de cultura não melhora significativamente a resposta para essa variável. Observa-se, entretanto, melhora para as concentrações de,1 e, mg L -1 dessa auxina, quando associadas a 1, e,1 mg L -1 de BAP, um acréscimo no número de brotações com comprimento maior que 1 cm, número que cai a partir das referidas concentrações de BAP. Quando se utilizou,5 mg L -1 de ANA combinado com a concentração de, mg L -1 de BAP, atingiu-se a média de brotos por explante, e a partir dessa concentração de citocinina, o número de brotos manteve-se praticamente constante. Observa-se que, dependendo da relação auxina/citocinina, verificam-se diferentes respostas dos explantes. Abbott & Whiteley (197) constataram que a aplicação de ANA ao meio de cultivo pode provocar inibição da multiplicação de brotações, quando em concentrações entre,1-, mg L -1. Nº total debrotos 1 1,5 1 1,5,5 3 3,5 ANA (, mg/l) ANA (,1 mg/l) ANA (,5 mg/l) ANA (, mg/l) Y =,77+,77x-,759x R =,95 Y,5 = 1,7+3,7571x-,31x R =,7 Y,1 = 5,537+,7x-,73x R =,9 Y, =,+,31x-1,119x R =,9 FIGURA 3 Número total de brotos de plântulas de Ficus carica in vitro cultivadas em meio WPM contendo diferentes concentrações de BAP e ANA. UFLA, Lavras-MG, 1.

6 1 Nº brotos > 1cm 1 -,5 1 1,5,5 3 3,5 ANA (, mg/l) ANA (,1 mg/l) ANA (,5 mg/l) ANA (, mg/l) Y = -,155+5,3x-,5x R =,95 Y,5 = -,+,139x-,75x R =, Y,1 = 1,+,39x-,39x R =,5 Y, =,1+,91x-,3x R =,9 FIGURA - Número de brotos maiores que 1 cm plântulas de Ficus carica in vitro cultivadas em meio WPM contendo diferentes concentrações de BAP e ANA. UFLA, Lavras-MG, 1. CONCLUSÕES Para as condições em que o experimento foi conduzido, pode-se concluir que: Segmentos nodais de Ficus carica cultivar Roxo de Valinhos podem ser cultivados in vitro em meio básico WPM contendo 15 g L -1 de sacarose e mg L -1 de BAP, obtendo-se plantas com padrão e qualidade desejáveis para a propagação dessa cultivar de figueira. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ABBOTT, A. J.; WHITELEY, E. Culture of malus tissue in vitro. I. Multiplication of apple plants from is olated shoot apices. Scientia Horticulturae, Amsterdam, v., n., p , 197. CHEEMA, G. S.; SHARMA, D. P. In vitro propagation of apple rootstocks-emla Acta Horticulturae, Wageningen, v. 131, p. 75-, 193. FERREIRA, D. F. Analise estatística por meio do SISVAR (Sistema para análise de variância) para Windows versão.. In: REUNIÃO ANUAL DA REGIÃO BRASILEIRA DA SOCIEDADE INTERNACIONAL DE BIOMETRIA, 5.,, São Carlos. Anais... São Carlos: UFSCar,. p GUERRA, M. P.; COSTA, R. M. B. F. L.da. Micropropagação da figueira Roxo de Valinhos, através da cultura de meristemas. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE FRUTICULTURA, 9., 197, Campinas. Anais... Camp i- nas: Sociedade Brasileira de Fruticultura, 19. v., p GUPTA, P. K. Eradication of mosaic disease and rapid clonal multiplication of bananas and plantains through meristem tip culture. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, Dordrecht, v., p , 19. NEMETH, G. Benzyladenine stimulated rooting in fruit rootstocks culturing in vitro. Zeitschrift fuer Pflanzenphysiologie, v. 95, p , NOVAK, F. J.; JUVOVA, Z. Clonal propagation of grapevine through in vitro axillary bud culture. Scientia Horticulturae, Amsterdam, v. 1, n. 3, p. 31-, Jan. 193.

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