TRATAMENTO DE ENDOMETRITE EM VACAS LEITEIRAS COM OXITETRACICLINA E LAURIL DIETILENO GLICOL ÉTER SULFATO DE SÓDIO INTRA-UTERINO

Transcrição

1 UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA CENTRO DE CIÊNCIAS RURAIS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM MEDICINA VETERINÁRIA TRATAMENTO DE ENDOMETRITE EM VACAS LEITEIRAS COM OXITETRACICLINA E LAURIL DIETILENO GLICOL ÉTER SULFATO DE SÓDIO INTRA-UTERINO DISSERTAÇÃO DE MESTRADO Andréia Molardi Bainy Santa Maria, RS, Brasil 2012

2 TRATAMENTO DE ENDOMETRITE EM VACAS LEITEIRAS COM OXITETRACICLINA E LAURIL DIETILENO GLICOL ÉTER SULFATO DE SÓDIO INTRA-UTERINO por Andréia Molardi Bainy Dissertação apresentada ao Curso de Mestrado do Programa de Pós- Graduação em Medicina Veterinária, Área de Concentração em Fisiopatologia da Reprodução, da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM, RS), como requisito parcial para obtenção do grau de Mestre em Medicina Veterinária Orientador: Prof a. Mara Iolanda Batistella Rubin Co-orientador: Prof Carlos Antonio Mondino Silva Santa Maria, RS, Brasil 2012

3 Universidade Federal de Santa Maria Centro de Ciências Rurais Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária A Comissão Examinadora, abaixo assinada, aprova a Dissertação de Mestrado TRATAMENTO DE ENDOMETRITE EM VACAS LEITEIRAS COM OXITETRACICLINA E LAURIL DIETILENO GLICOL ÉTER SULFATO DE SÓDIO INTRA-UTERINO Elaborada por Andréia Molardi Bainy Como requisito parcial para obtenção do grau de Mestre em Medicina Veterinária COMISSÃO EXAMINADORA Mara Iolanda Batistella Rubin, Dra. (Presidente/ Orientadora) Mari Lourdes Bernardi, Dra (UFRGS) José Laerte Nornberg, Dr. (UFSM) Santa Maria, 23 de Março de 2012

4 AGRADECIMENTOS Aos meus pais, Armando e Margarete e às minhas irmãs pelo amor, dedicação, apoio e incentivo para o meu crescimento pessoal e profissional. Ao meu noivo, Rafael Salles Cabreira, pela paciência durante os dois anos da realização do mestrado, sem dúvida o amor verdadeiro resiste ao tempo e fortalece com distância. À minha orientadora Dra. Mara Rubin e meu co-orientador Dr. Carlos Antônio Mondino Silva por depositarem confiança no meu trabalho, pelos ensinamentos e longas discussões sobre endometrite e reprodução de equinos e bovinos. Ao Dr. Severo Sales de Barros pela disponibilidade e interesse em me ensinar, pelo conhecimento transmitido e importantes sugestões apresentadas. À diretoria e equipe de veterinários da B & M Assessoria em Gado Leiteiro de Cascavel/PR pela concessão da realização de parte do experimento junto aos produtores de leite. Aos proprietários das unidades leiteiras que gentilmente cederam suas propriedades e animais para execução da pesquisa, pelas longas e exaustivas horas de trabalho. Ao Maurício Schneider Oliveira, ao Dr. Carlos Augusto Mallmann e colaboradores do LAMIC/UFSM pela análise das amostras de leite para detecção de oxitetraciclina por cromatografia. À equipe do Embryolab, estagiários e mestrandos Murilo Farias Rodrigues, Ângelo Bertani Giotto, Carlos Eduardo Porciuncula Leonardi, Gilson Antônio Pessoa e Denize da Rosa Fraga, pela amizade e auxílio na realização do projeto de pesquisa. Ao Dr. Luís Felipe Lopes pelo auxílio na análise estatística da pesquisa. As empresas Bayer Saúde Animal e Vetnil por fornecerem os medicamentos para realização da pesquisa. Ao CNPQ pelo apoio através da bolsa de estudos. Muito obrigada!

5 RESUMO Dissertação de Mestrado Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária Universidade Federal de Santa Maria TRATAMENTO DE ENDOMETRITE EM VACAS LEITEIRAS COM OXITETRACICLINA E LAURIL DIETILENO GLICOL ÉTER SULFATO DE SÓDIO INTRA-UTERINO AUTORA: ANDRÉIA MOLARDI BAINY ORIENTADORA: PROFª MARA IOLANDA BATISTELLA RUBIN CO-ORIENTADOR: PROF CARLOS ANTONIO MONDINO SILVA Santa Maria, 23 Março de O uso de antibiótico via intra-uterina (IU) ainda é considerado controverso. Existem poucos estudos que utilizam controles negativos e que avaliam os efeitos dos tratamentos no desempenho reprodutivo. Além disso, não há nenhuma informação científica sobre o uso do agente fluidificador de secreções Lauril dietileno glicol éter sulfato de sódio (LDGESS) em associação com oxitetraciclina (OCT) via intra-uterina (IU). Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência do tratamento intra-uterino com 3 g de OCT (Grupo 1, n = 30, Tetrabac LA, Bayer) ou a associação de OCT com LDGESS (Grupo 2, n = 35, Tergenvet, Vetnil) em comparação aos grupos controles LDGESS (Grupo 3, n = 32) e solução salina (Grupo 4, n = 31). Aleatoriamente, vacas 21 dias pós-parto diagnosticadas por ultrassom (US) e exame vaginal com endometrite leve e moderada foram tratadas. Antes do tratamento (D0) foi realizada citologia e biópsia endometrial e, 14 dias após (D14), esses procedimentos foram repetidos. Amostras de leite de vacas tratadas com OCT foram coletadas a cada 12 h até 7 dias após a infusão e analisadas por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência) e espectrometria de massa. As taxas de cura após tratamento para endometrite diagnosticada por US e exame vaginal para as vacas do grupo 1 e 2 foram de 53% e 66%, respectivamente. Considerando apenas endometrite leve, as taxas de cura foram de 58% e 68% para os grupos 1 e 2, respectivamente (P > 0,05). Não houve diferença entre as taxas de cura para endometrite leve e moderada (P > 0,05). A taxa de cura do grupo 2 para endometrite diagnosticada por US e exame vaginal foi superior aos controles (P > 0,05). Portanto, a associação de oxitetraciclina e o fluidificador de secreções LDGESS foi mais eficaz no tratamento de endometrite diagnosticada por US e exame vaginal; no entanto, o mesmo não foi observado comparando vacas com endometrite na citologia e os graus de biópsia uterina antes e após tratamento. O período de descarte do leite é de 48 horas após o tratamento com 3 g de oxitetraciclina IU. Palavras-chave: fluidificador de secreções, doenças uterinas, resíduo de antibiótico

6 LISTA DE FIGURAS FIGURA 1 - Fisiologia Periparto. Fonte: Sheldon et al. 2009a...13 FIGURA 2 - Sistema de escore para endometrite clínica. Fonte: Sheldon et al FIGURA 3 - Ilustração esquemática dos principais mecanismos no impacto sobre a biologia reprodutiva associada à endometrite em vacas leiteiras de alta produção. Fonte: Sheldon et al. 2009a FIGURA 4 - Ultrassonografia do útero...24 FIGURA 5 - Citologia uterina...26 FIGURA 6 - Fotomicrografias de biopsia endometrial de vacas com endometrite CAPÍTULO 1 FIGURA 1 - Mean and standard deviation of residue of oxytetracycline (ppb) in milk per 12 hours interval milking after infusion of 3g of oxytetracycline intrauterine (n = 345)

7 LISTA DE TABELAS TABLE 1 - Cure rates of the four treatment groups for all and for the two grades of endometritis (n = 128), considering subclinical and clinical endometritis diagnosed by ultrasound and/or vaginoscopy, respectively, before and 14 days after intrauterine treatment TABLE 2 - Cure rates between cows with eutocic and dystocic parturition (DP), retained placenta (RP) and urovagina (URO) by treatment (n = 113) and proportions of animals in each group by treatment (n = 120)..64 TABLE 3 - Cure rates for cytological endometritis diagnosed with cytobrush technique (PMNs 5%) after intrauterine treatment (n = 75) TABLE 4 - Proportions of PMNs in cytobrush technique between Grade 1 and 2 of endometritis diagnosed by ultrasound and/or vaginoscopy 66 TABLE 5 - Proportions of the results of biopsies grades before and after the intrauterine treatment by treatment TABLE 6 - Proportions of cows positive (PMNs 5%) and negative by cytobrush technique and with endometritis by ultrasound, according to biopsy grade...68 TABLE 7 - Pregnancy rates and first service conception rates for cows classified in Grade 1, 2 or 3 in endometrial biopsy...69

8 LISTA DE ABREVIATURAS D0: dia zero, dia do tratamento D14: dia catorze, catorze dias após tratamento D.P.P.: Dias-pós-parto HPLC: Cromatografia Líquida de Alta Eficiência IU: intra-uterino LDGESS: Lauril dietileno glicol éter sulfato de sódio OCT: oxitetraciclina US: ultrassom

9 SUMÁRIO 1- INTRODUÇÃO REVISÃO BIBLIOGRÁFICA Fisiologia periparto Definições de doenças uterinas Fatores de risco para doenças uterinas Prevalência e consequências da endometrite Imunologia uterina Bacteriologia e patogênese das doenças uterinas Diagnóstico de endometrite Tratamento de endometrite Oxitetraciclina e agentes fluidificadores de secreção intrauterinos Resíduos de antibióticos no leite CAPÍTULO I: Manuscrito Abstract Introduction Materials and Methods Results Discussion Conclusion References CONCLUSÕES REFERÊNCIAS... 72

10 1. INTRODUÇÃO A reprodução é um dos pilares principais da produção de leite (LEBLANC, 2008). A incidência de metrite varia entre 10 a 20%, de endometrite clínica ou secreção vaginal purulenta é de aproximadamente 15%, e de endometrite subclínica ou citológica de 15% (LEBLANC et al., 2011). Doenças uterinas são reconhecidas por causarem altas perdas econômicas devido à queda na produção de leite, às menores taxas de concepção, aumento no intervalo parto concepção ou primeiro serviço, aumento no intervalo entre partos e aumento no descarte de vacas por falhas reprodutivas (HUSZENICZA et al., 1999; LEBLANC et al., 2002a; SHELDON et al., 2009a). Em 1986, as perdas econômicas devido à doença uterina foram estimadas em US$ 106 por vaca em lactação nos EUA (BARTLETT et al., 1986) e o custo anual de doença uterina somente nos EUA é estimada em $650 milhões (SHELDON et al. 2009a). Os antibióticos são amplamente utilizados para o tratamento de infecções uterinas. A antibioticoterapia intra-uterina (IU) para tratamento de endometrite tem sido preferida à sistêmica, devido aos antibióticos administrados via intra-uterina alcançarem maior concentração inibitória no lúmen uterino em comparação a administração sistêmica (BRETZLAFF et al., 1983). O uso de oxitetraciclina (OCT) via IU é um tratamento padrão rotineiramente utilizado para tratamento de endometrite em vacas, com taxa de cura estimada em 73% para vacas com endometrite clínica (SHELDON & NOAKES, 1998). No entanto, o tratamento de endometrite ainda é considerado controverso entre os veterinários principalmente no que se refere se o tratamento em si é realmente necessário (GILBERT, 1992). Há poucos trabalhos que utilizam controles negativos e que avaliaram os efeitos dos tratamentos na reprodução subsequente (SHELDON et al. 2009b). Além disso, não há informações científicas sobre o uso do agente fluidificador de secreções, Lauril dietileno glicol éter sulfato de sódio (LDGESS) em associação com a oxitetraciclina via intra-uterina no tratamento de endometrite em vacas. Alternativas que possibilitem um tratamento uterino eficaz aliado a um intervalo para o descarte do leite menor são essenciais para a sustentabilidade da atividade leiteira. A nossa hipótese é que a associação da oxitetraciclina com o fluidificador intra-uterino

11 aumente a taxa de recuperação de vacas com endometrite. Portanto, o objetivo desta pesquisa foi comparar e avaliar as taxas de recuperação das endometrites em vacas após tratamento com 3 g de OCT (Tetrabac LA, Bayer) ou a associação de OCT com LDGESS (Tergenvet, Vetnil) IU. Nesta pesquisa também verificou-se o efeito de ambos sobre o endométrio, bem como o período de detecção de resíduos de antibiótico no leite individual de vacas tratadas com antibiótico via intra-uterina.

12 12 2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA 2.1. Fisiologia periparto O lúmen uterino é estéril antes do parto e se invasão bacteriana ocorrer há reabsorção fetal ou aborto (SEMAMBO et al., 1991; SHELDON et al., 2009a). No período pós-parto, as bactérias podem invadir a cavidade uterina via ascendente através do canal do parto (SHELDON & DOBSON, 2004). A contaminação bacteriana do lúmen uterino é comum e ocorre em 80 a 100% das vacas leiteiras nas duas primeiras semanas pós-parto (FIGURA 1). Há um consenso na literatura de que até 40% dos animais apresentam metrite nas duas primeiras semanas após o parto e que, em 10 a 15% destes animais, a infecção persiste por pelo menos outras três semanas, causando endometrite (GILBERT et al., 1998; LEBLANC et al., 2002a; SHELDON & DOBSON, 2004; SHELDON et al., 2009a). Por várias semanas após o parto, há um ciclo de contaminação bacteriana, limpeza e re-contaminação (GRIFFIN et al., 1974). Em muitos animais a contaminação bacteriana é resolvida pela involução uterina, eliminação do lóquio e pela mobilização do sistema imune (POTTER et al., 2010). A involução uterina e da cérvix varia de 25 a 47 dias (MORROW et al., 1966; HARRISON et al., 1986). Já a involução microscópica completa leva mais tempo que a involução palpável, variando de 42 a 50 dias (MARION & GIER, 1959). A presença de bactérias patogênicas no útero causa inflamação, lesões histológicas no endométrio, atraso na involução uterina e diminui a sobrevivência embrionária (SEMAMBO et al., 1991; BONNETT et al., 1991c; SHELDON et al., 2003). Aproximadamente 40% dos animais ainda apresentam infecção bacteriana três semanas após o parto (SHELDON et al., 2007). Contaminação bacteriana nem sempre implica em doença (SHELDON et al., 2007). Entretanto, a falha do endométrio em eliminar a contaminação bacteriana pode comprometer a função uterina (SHELDON et al., 2009a). O estabelecimento da infecção implica na aderência de organismos patogênicos na mucosa, colonização e penetração do epitélio, e/ou liberação de toxinas bacterianas que levam ao estabelecimento da

13 13 doença uterina (JANEWAY et al., 2001). O desenvolvimento da doença uterina na vaca depende da resposta imune da vaca, das espécies e número (carga, desafio) de bactérias (AZAWI, 2008). Porcentagem de animais Dias após o parto FIGURA 1 - Fisiologia periparto. Quase todas as vacas apresentam bactéria dentro da cavidade uterina durante as duas primeiras semanas pós-parto e doença uterina é comum. Cada marcador ( ) indica o percentual de animais com bactéria isolada da cavidade uterina; dados de quatro diferentes estudos, com animais coletados em diferentes dias entre o parto e 60 dias após (ELLIOTT et al., 1968; GRIFFIN et al., 1974; SHELDON et al., 2002; WILLIAMS et al., 2005). A área colorida representa a proporção de animais com metrite (em azul) no período de duas semanas pós-parto, endometrite (em amarelo) 3-5 semanas após parto e útero com involução fisiológica (em verde). O restante dos animais apresenta endometrite subclínica (em branco). A linha em negrito (em rosa) indica o percentual de animais com lesões histológicas evidentes da inflamação do endométrio (GILBERT et al., 2005). Adaptado de: SHELDON et al. (2009a) Definições de doenças uterinas Metrite é uma reação inflamatória severa que envolve todas as camadas do útero: endométrio, submucosa, muscular e serosa (BONDURANT, 1999). Ocorre no período de 21 dias pós-parto e é mais comum nos 10 primeiros dias após a parição. A metrite é caracterizada pelo aumento do útero e secreção aquosa vermelhoamarronzada a viscosa quase branca purulenta, que frequentemente apresenta odor

14 14 fétido (SHELDON et al., 2006). A severidade da doença está associada aos sinais sistêmicos de infecção como presença de febre (39,5ºC), apatia, diminuição da produção de leite e toxemia (SHELDON et al., 2009a). Recentemente, sugeriu-se diferenciar metrite puerperal ou metrite puerperal tóxica de metrite clínica; ambas ocorrem dentro dos 21 dias pós-parto. O diagnóstico de metrite clínica se baseia na presença de secreção purulenta vaginal e cornos uterinos aumentados de tamanho. No entanto, na metrite clínica não há sinais sistêmicos de infecção que caracterizam, por sua vez, a metrite puerperal ou metrite puerperal tóxica (SHELDON et al., 2006). A endometrite clínica é caracterizada pela presença de secreção vaginal purulenta detectada na vagina dos animais afetados 21 dias ou mais após o parto, mucopurulenta (aproximadamente 50% pus, 50% muco) ou catarral, detectada na vagina 26 ou mais dias pós-parto (LEBLANC et al., 2002a; SHELDON et al., 2006; SHELDON et al., 2009a). Um simples sistema de escore da característica ou odor do muco vaginal (FIGURA 2) é facilmente aplicável para avaliar vacas com endometrite (SHELDON et al., 2006). O escore se relaciona com a presença dos principais patógenos associados com a doença uterina e o prognóstico em relação ao tratamento (SHELDON & NOAKES, 1998; WILLIAMS et al., 2005). Entretanto, estudos mais recentes demonstram baixa concordância entre a presença de secreção vaginal purulenta e endometrite definida por citologia uterina (DUBUC et al., 2010). Isso leva a questionar se a origem de pus da vagina é sempre do útero (LEBLANC et al., 2011). Há dados que indicam que a cervicite existe como uma condição distinta, no entanto, algumas vezes ocorre concomitantemente com endometrite, comprometendo o desempenho reprodutivo (AHMADI et al., 2006). Endometrite subclínica se caracteriza por inflamação do útero, o que resulta em significativa redução do desempenho reprodutivo, na ausência de sinais de endometrite clínica. Doença subclínica é diagnosticada pela medição da proporção de neutrófilos polimorfonucleares (PMNs) presentes em uma amostra coletada por lavagem uterina, pela coleta de material com auxilio de uma escova ginecológica, conhecida como cytobrush, ou pela medição da quantidade do fluído uterino por ultrassonografia transretal (GILBERT, 2004; KASIMANICKAM et al., 2004, 2005a). Considera-se endometrite subclínica quando uma vaca possui mais que 18% de PMNs na citologia uterina coletada dias pós-parto, ou mais que 10% aos dias pós-parto (KASIMANICKAM et al., 2004, SALASEL et al., 2010) ou mais que 5,5% (SANTOS et al., 2009), ou apresente líquido intra-uterino de ecogenicidade

15 15 mista a partir de 21 dias pós-parto na ausência de endometrite clínica (SHELDON et al., 2006). Os neutrófilos constituem a primeira linha de defesa contra organismos patogênicos pós-parto, resultando no aumento da população de PMNs dentro do lúmen uterino (WATSON et al., 1990; BUTT et al., 1993). O risco da vaca não conceber aos 150 dias pós-parto foi 1,9 vezes maior em vacas com 8% de PMNs na citologia uterina (entre 28 e 41 dias pós-parto) que em vacas com menos de 8% de neutrófilos (BARLUND et al., 2008). Entretanto, o percentual de PMNs para definir endometrite subclínica varia de acordo com o período pós-parto em que os animais se encontram. A prevalência de endometrite subclínica depende do ponto de corte do percentual de PMNs utilizado para diagnóstico e do tempo após a parição. Estima-se que 30 a 35% dos animais apresentam endometrite subclínica quatro a nove semanas após parto (LEBLANC, 2008). Dubuc et al. (2010), ao compararem citologia uterina ( 6% PMNs) com exame clínico (secreção vaginal mucopurulenta ou purulenta), sugeriram que a terminologia endometrite clínica é inadequada e que endometrite citológica e clínica podem representar diferentes manifestações da doença no trato reprodutivo. Segundo os autores, as vacas podem ter três diferentes condições de doença uterina: secreção vaginal purulenta apenas, endometrite citológica apenas ou endometrite citológica e secreção vaginal purulenta. Mais estudos, no entanto, devem ser realizados para esclarecer qual a melhor definição. FIGURA 2 - Sistema de escore para endometrite clínica. Muco vaginal característico de cio, grau 0 (claro ou translúcido), 1 (muco contendo flocos de branco ou pus esbranquiçado), 2 (exsudato contendo

16 16 <50% material quase branco ou branco mucopurulento), ou 3 (exsudato contendo 50% de material purulento, usualmente branco ou amarelo ocasionalmente sanguinolento. SHELDON et al. (2006) Fatores de risco para doenças uterinas Em vacas, a endometrite geralmente está associada a problemas no parto, como retenção de placenta (RP), assistência ao parto devido à distocia, natimortalidade, nascimento de machos, angulação vulvar inadequada e primiparidade (MARKUSFELD, 1987; CORREA et al., 1993; KIM & KANG, 2003; HAN & KIM, 2005; POTTER et al., 2010). Esses fatores atrasam a involução uterina, o que acarreta aumento no intervalo parto-concepção e no número de serviços por concepção (SHAMS-ESFANDABADI et al., 2004). Aproximadamente 25-50% das vacas com RP desenvolvem metrite (LEBLANC, 2008). No estudo realizado por LeBlanc et al. (2002b), vacas que tiveram gêmeos, retenção de placenta, ou metrite foram identificadas com maior propensão ao desenvolvimento de endometrite clínica posteriormente. Os fatores de risco para persistência ou recorrência de endometrite pós-parto (após 60 dias pós-parto) são complicações no pós-parto precoce, endometrite moderada ou grave, urovagina e parto no verão (GAUTAM et al., 2010). Infelizmente esses fatores de risco são de difícil intervenção e fatores que podiam ser abordados, como limpeza do ambiente ou animais são muito menos importantes na redução da incidência de doenças uterinas (NOAKES et al., 1991). A administração de ácido livre cristalino de ceftiofur de longa ação via subcutânea na base da orelha (6,6 mg/kg, Excede, Pfizer) 24 h após o parto de vacas com alto risco de desenvolverem doença uterina (vacas que tiveram parto gemelar, distocia ou retenção de placenta), diminuiu a incidência de metrite, principalmente em vacas com histórico de distocia, parto gemelar, mas sem retenção de placenta e reduziu a prevalência de secreção vaginal purulenta aos 35 dias pósparto (DUBUC et al., 2011b). A administração de ceftiofur (2,2 mg/kg por 5 dias) em vacas com retenção de placenta preveniu o desenvolvimento de metrite em comparação a vacas tratadas com 4 mg de ECP ou não tratadas (n = 97) (RISCO & HERNANDEZ, 2003). Esses resultados sugerem que ao diminuir a contaminação

17 17 bacteriana uterina no pós-parto pode-se prevenir o desenvolvimento de doença uterina (DUBUC et al., 2011b) Prevalência e consequências da endometrite A prevalência da endometrite clínica nos rebanhos da América do Norte é variável e depende da técnica utilizada para diagnóstico. LEBLANC et al. (2002b) obtiveram prevalência média de endometrite de 17% variando de 5 a 26% em estudo com vacas em 27 rebanhos com vacas entre 20 e 33 dias pós-parto (d.p.p.) diagnosticadas por exame vaginal. Em vacas examinadas com o dispositivo intravaginal Metricheck 1-8 semanas após o parto, a incidência de endometrite foi de 21%, variando entre os rebanhos de 10 a 31% (MCDOUGALL et al., 2007). A prevalência de endometrite subclínica diagnosticada por citologia uterina foi de 53% e variou de 37 74% entre rebanhos em estudo com 141 vacas com d.p.p. (GILBERT et al., 2005). Já KASIMANICKAM et al. (2004), examinando 215 vacas aos d.p.p. obtiveram 35% de prevalência de endometrite subclínica utilizando para diagnóstico a citologia uterina com >18% de polimorfonucleares (PMNs) na amostra. A prevalência da endometrite clínica em rebanhos criados extensivamente na Argentina foi de 35% em vacas com 18 a 38 d.p.p. (PLONTZKE et al., 2011). Na Irlanda, Mee et al. (2009) realizaram um estudo com vacas identificando prevalência média de endometrite de 29,4%. Nesse estudo, as vacas foram examinadas por ultrassom a partir de 14 d.p.p. A prevalência global de endometrite clínica na segunda visita foi de 18% aos d.p.p. Esta diminuição da prevalência com o aumento do tempo pós-parto está de acordo com outros estudos com rebanhos em sistema de confinamento (GRIFFIN et al 1974;. LEBLANC et al. 2002b; WILLIAMS et al. 2005). No Brasil, os estudos publicados com endometrite em bovinos de leite são escassos. A incidência de endometrite varia de 5,7% a 30% (TORRES & CORDEIRO, 1989; ANDRADE et al., 2005). A baixa prevalência de endometrite no estudo de ANDRADE et al. (2005) pode ser devido ao método de diagnóstico por palpação retal. Estima-se que a prevalência de endometrite em vacas Bos taurus indicus seja de apenas 3,3%. Isso se deve provavelmente a facilidade de parto da vaca zebuína (VALE-FILHO et al, 1986). Portanto, a

18 18 prevalência de endometrite varia grandemente entre os estudos, local e dias pósparto que a vaca se encontra no dia do exame. A endometrite subclínica gera custos altos à produção devido ao aumento nos dias em aberto, concepção menor no primeiro serviço, maior número de inseminações, menor concepção e maior taxa de descarte de vacas por falha na concepção (GILBERT et al., 2005). A endometrite subclínica está associada com baixo desempenho reprodutivo. GILBERT et al. (2005) obteve 26% menor taxa de prenhez em relação às vacas sem endometrite, mediana de dias abertos de 206 dias para as vacas com endometrite e 118 para as vacas sem a doença e a taxa de prenhez ao primeiro serviço foi menor em vacas com endometrite (11 vs 36%). Em outro estudo, vacas com endometrite tiveram menores taxa de prenhez, embora a endometrite não tenha diminuído a produção de leite em vacas multíparas ou primíparas (DUBUC et al., 2011a). A endometrite está associada a lesões teciduais (BONNETT et al., 1993), atraso na involução uterina (MATEUS et al., 2002; SHELDON et al. 2008), longas fases lúteas associadas a maior produção de PGE 2 pelas células endometriais do que de PGF 2 α (HERATH et al., 2009) e alteração dos ciclos ovarianos, como anestro prolongado, função lútea prolongada e cistos ovarianos (HUSZENICZA et al., 1999; OPSOMER et al., 2000; MATEUS et al., 2002; BALOGH et al., 2008). Portanto, as infecções bacterianas, mais especificamente os componentes das bactérias, como o lipopolissacarídeo (LPS), não só alteram a função uterina, como também a função ovariana e dos centros de controle no hipotálamo e hipófise (SHELDON et al., 2009b). As vacas com doença uterina que ovulam têm concentrações baixas de progesterona plasmática periférica, o que pode reduzir ainda mais a possibilidade de concepção associada à endometrite (SHELDON et al., 2009b) Imunologia uterina Vários aspectos da função uterina estão suprimidos nas vacas de leite uma a duas semanas pré-parto até 2-3 semanas pós-parto (KEHRLI et al., 1989; MALLARD et al., 1998). O mecanismo exato do comprometimento da função imune na vaca ainda não está claro, embora a queda de energia peri-parto, vitaminas,

19 19 minerais, balanço energético negativo, mobilização de gordura e proteína corporal, alteração dramática nos níveis de estrogênio e progesterona no final da gestação e grande aumento nos níveis de cortisol no parto parecem contribuir (GOFF & HORST, 1997; INGVARTSEN, 2006, STRATEN et al., 2008, GALVÃO et al., 2009). O útero em condições fisiológicas é capaz de eficientemente eliminar infecção bacteriana, sendo difícil produzir experimentalmente infecção uterina crônica, mesmo por infusão intra-uterina de Arcanobacterium pyogenes (GILBERT & SCHWARK, 1992). O mais importante componente de defesa uterina é não específico e ocorre por fagocitose envolvendo neutrófilos (HUSSAIN, 1989; BONDURANT, 1999). Existem interações de hormônios reprodutivos com a função imune uterina. Muitos autores concordam que altas concentrações de progesterona suprimem a produção de muco cervical, a contratilidade miometrial, a secreção das glândulas uterinas e a atividade fagocitária dos neutrófilos uterinos (FRANK et al. 1983; HUSSAIN, 1989; BONDURANT, 1999), e, portanto, permitem, ambiente para instalação de infecção uterina (LEBLANC, 2008). A PGF 2 α não possui função apenas luteolítica, mas também parece ter ação pró-inflamatória que pode melhorar a função dos neutrófilos (LEWIS, 2004). A função imune uterina parece melhorar sob a influência do estrógeno (FRANK et al., 1983; BONDURANT, 1999). Ainda não está bem esclarecido se o estrogênio provoca aumento na atividade fagocítica bactericida, ou se as melhorias observadas são simplesmente decorrentes da diminuição da progesterona (HUSSAIN, 1989). Os mecanismos associados à infertilidade em animais com endometrite estão descritos na FIGURA 3. O sistema imune inato parece ser a resposta chave para entender esses mecanismos (SHELDON et al., 2009b).

20 FIGURA 3 - Ilustração esquemática dos principais mecanismos no impacto sobre a biologia reprodutiva associada à endometrite em vacas leiteiras de alta produção. (A) infecção uterina com E. coli e A. pyogenes causa danos tecido endometrial. O sistema imunológico inato é alertado por receptores Toll-like (TLRs), detecção de DNA bacteriano e lipopolissacarídeos (LPS) da E. coli, que está ligado a proteína de ligação de LPS (LBP) (BEUTLER, 2004; AKIRA et al., 2006). As células do endométrio secretam citocinas, quimiocinas e peptídeos antimicrobianos (AMPs). Dano endometrial e inflamação reduzem a chance da concepção. (B) As citocinas e quimiocinas direcionam a resposta do sistema imune. As quimiocinas atraem neutrófilos (PMN) e macrófagos (MOS) para eliminar as bactérias. No entanto, a função dos neutrófilos é alterada em vacas de alta produção, principalmente se o animal tem energia metabólica insuficiente. Persistência de neutrófilos no endométrio na ausência de bactérias é a característica principal de endometrite subclínica (KASIMANICKAM et al., 2004; GILBERT et al., 2005). (C) O BoHV-4 pode infectar as células endometriais estromais e epiteliais, causando danos no tecido endometrial (DONOFRIO et al., 2007). (D) As concentrações do hormônio folículo estimulante (FSH) não são afetadas pela doença uterina e ondas foliculares ovarianas surgem nas primeiras semanas após o parto (SHELDON et al., 2002). No entanto, a liberação do hormônio GnRH e luteinizante (LH) pode ser suprimida por LPS, reduzindo a capacidade de ovular o folículo dominante. (E) Vacas com endometrite têm crescimento mais lento dos folículos dominantes no ovário e menores concentrações plasmáticas de estradiol periféricas, assim são menos propensos a ovular (SHELDON et al., 2002). (F) Vacas com endometrite podem ovular, forma-se um corpo lúteo, mas as concentrações de progesterona no plasma periférico são inferiores às fisiológicas em animais férteis (WILLIAMS et al., 2007) e a fase lútea é prolongada. A luteólise é provavelmente interrompida, pois as bactérias mudam a secreção endometrial epitelial de prostaglandinas da série F para E (HERATH et al., 2009). Fonte: SHELDON et al. (2009a,b). 20

21 Bacteriologia e patogênese das doenças uterinas O útero é contaminado com bactérias no período de puerpério precoce (6 horas após o parto a 10 dias após) (ELLIOTT et al, 1968; MILLER et al., 1980). Por 3 a 4 semanas pós-parto, o número de bactérias e a variedade de espécies diminuem substancialmente em vacas saudáveis. O significado da cultura bacteriana do útero pós-parto depende da espécie isolada e do intervalo desde o parto. A contaminação bacteriana do útero é não específica e envolve um grande número de espécies de bactérias (GRIFFIN et al., 1974; SHELDON et al., 2002). Huszenicza et al. (1999) isolaram nos primeiros 10 dias após o parto principalmente Streptococcus spp., Staphylococcus spp. e Bacillus spp. do útero de vacas sem sinais clínicos de metrite puerperal, enquanto diferentes bactérias como Arcanobacterium pyogenes (A.pyogenes), Escherichia coli (E.coli), Fusobacterium necrophorum (F.necrophorum), Prevotella melaninogenicus, Bacteroides spp. e Clostridium, spp. foram detectados no útero de vacas com (endo)metrite (BONDURANT, 1999; HUSZENICZA et al., 1999; MATEUS et al. 2002). A bactéria que está consistentemente associada com inflamação uterina crônica é a Gram positiva e anaeróbica facultativa A. pyogenes (BONDURANT, 1999). O A. pyogenes atua sinergicamente com F. necrophorum, Bacteroides spp. e com Prevotella spp. aumentando a ocorrência e a severidade da doença uterina (FREDRIKSSON et al., 1985; WILLIAMS et al., 2005). A. pyogenes produz um fator de crescimento para F. necrophorum, que, por sua vez, produz uma leucotoxina (SHELDON & DOBSON, 2004; SHELDON et al., 2009a). A infecção do endométrio por E. coli precede a infecção por A. pyogenes e possivelmente por herpesvirus 4 e está associada com a severidade da doença clínica e o impacto na fertilidade (DONOFRIO et al., 2007). E. coli produz uma endotoxina, lipopolissacarideo (LPS), responsável por muitos dos efeitos da bactéria. A prevalência destas bactérias diminui gradativamente ao longo do puerpério. O isolamento do A.pyogenes foi descrito no período entre o 28 o ao 35 o dia pós-parto e está associada com uma drástica diminuição na concepção (HUSZENICZA et al.,1999) e com lesões endometriais severas (BONNETT et al., 1993). O desenvolvimento das doenças uterinas dependente da contaminação bacteriana e dos mecanismos de defesa do animal (SHELDON & DOBSON, 2004).

22 22 É importante diferenciar a contaminação fisiológica do lúmen uterino pós-parto com bactérias e a persistência das bactérias patogênicas com o estabelecimento da doença uterina, que pode ser descrita como infecção uterina (SHELDON, 2004). O número de bactérias patogênicas no útero da vaca pode ser grande o suficiente para ultrapassar os mecanismos de defesa uterina e causar infecções uterinas de risco de vida para a vaca, embora isso seja pouco frequente (SHELDON & DOBSON, 2004). A maioria das infecções uterinas está mais associada a prejuízo no desempenho reprodutivo do que com alta mortalidade (BORSBERRY & DOBSON, 1989). Além disso, inflamação uterina, mesmo na ausência de infecção bacteriana ativa, pode interferir na sobrevivência embrionária, causando infertilidade quando a doença está presente e subfertilidade (BRETZLAFF, 1987; GILBERT, 1995; SHELDON et al., 2009b), mesmo após a resolução da doença, devido à fibrose endometrial resultante da inflamação crônica (CORDEIRO et al., 1989; BONNETT et al., 1993) Diagnóstico de endometrite O momento do exame deve permitir o processo normal de involução, mas também dar tempo para o tratamento e resposta antes do início do período de reprodução. Clinicamente, o desafio é identificar as vacas que estão em risco de comprometimento da fertilidade para administrar o tratamento (LEBLANC, 2008). A palpação retal do útero entre duas a oito semanas pós-parto para detectar atraso na involução uterina ou da cérvix não é uma boa técnica para identificar as vacas com endometrite, pois é uma técnica subjetiva, a involução uterina varia entre as vacas e há pouca associação com o desempenho reprodutivo subsequente (MILLER et al. 1980; KRISTULA & BARTHOLOMEW, 1998; LEBLANC et al., 2002a). A palpação retal identificou corretamente apenas 22% das vacas com infecção uterina, em comparação com cultura uterina (MILLER et al., 1980) e 44% das vacas consideradas sem endometrite por palpação retal no estudo de Leblanc et al. (2002a) foram positivas no exame vaginal. O exame vaginal se baseia na detecção de secreção anormal purulenta ou mucopurulenta na vagina e cérvix (BRETZLAFF, 1987; LEBLANC et al., 2002a). Por

23 23 exame vaginal foi identificado infecção uterina em 59-82% dos casos, com um forte correlação com a presença de A. pyogenes, F. necrophorum e Proteus spp. (MILLER et al, 1980;. DOHMEN et al., 1995; WILLIAMS et al., 2005). Os três métodos utilizados para exame vaginal, como uso de espéculo (método de referência), dispositivo vaginal (Metricheck, Simcro, Nova Zelândia) e método da mão enluvada se mostraram eficientes no diagnóstico de endometrite (PLETICHA et al., 2009). A ultrassonografia é outro método utilizado no diagnóstico de endometrite, pois possibilita verificar a presença de diferentes quantidades de conteúdo no lúmen uterino, as características desse conteúdo, o aspecto do endométrio, além de oferecer a vantagem de um diagnóstico imediato (KASIMANICKAM et al., 2004; BARLUND et al., 2008) (FIGURA 4). Quanto maior a quantidade de fluído presente no lúmen uterino, maior é o grau de contaminação bacteriana e a gravidade dos quadros de infecções puerperais (KASIMANICKAM et al., 2004). A concordância entre a citologia do endométrio e a ultrassonografia é fraca (KASIMANICKAM et al., 2004). Na tentativa de aumentar a capacidade de diagnóstico por ultrassom, Kasimanickam et al. (2004) combinaram os resultados de citologia do endométrio e avaliação ultrassonográfica de líquido no útero e melhoraram a sensibilidade e especificidade da ultrassonografia consideravelmente. Os critérios para diagnóstico de endometrite nas vacas foram determinados com base em seu efeito prejudicial no desempenho reprodutivo subsequente (LEBLANC et al, 2002;. KASIMANICKAM et al, 2004, MCDOUGALL et al, 2007;. RUNCIMAN et al., 2008). Duas abordagens principais têm sido utilizadas para o diagnóstico de endometrite: clínica ou secreção vaginal purulenta e citológica. Endometrite citológica é definida como um aumento proporção (percentual) de polimorfonucleares (PMN) em amostras de citologia endometrial obtidas por escova citológica (KASIMANICKAM et al., 2004) (FIGURA 5), lavagem uterina (GILBERT et al., 2005) ou por histologia de amostras de biópsia (BONNETT et al., 1993). Endometrite citológica foi proposta como teste de referência para diagnóstico de endometrite (KASIMANICKAM et al., 2004; GILBERT et al., 2005; BARLUND et al., 2008). Entretanto, não se sabe se a coleta de amostras por escova citológica (cytobrush) em diferentes locais dos cornos uterinos, ao invés do proposto por KASIMANICKAM et al. (2004) em que a coleta foi feita na porção dorso-caudal do corpo uterino possa trazer resultados diferentes (DUBUC et al., 2010).

24 24 A B FIGURA 4. Ultrassonografia do útero. A) Corte transversal do corno uterino de vaca com endometrite grau I (CGI) B) Corte transversal, vaca com endometrite grau II (CGII). Há pequena quantidade de líquido de ecogenecidade mista (A) ou grande quantidade de líquido ecogênico (B) no lúmen do endométrio (seta). Imagens Ultrassom Honda 6 MHz. Fonte: arquivo pessoal.

25 25 A citologia uterina é um dos métodos mais confiáveis de diagnosticar bovinos com endometrite, além da biópsia endometrial. O risco de não prenhez aos 150 dias foi 1,9 vezes maior em vacas com mais de 8% PMNs por escova cytobrush do que em vacas com menos de 8% PMNs (BARLUND et al., 2008). As vacas com endometrite apresentaram uma taxa de concepção no primeiro serviço inferior a 17,9% e um aumento de 24 dias na mediana de dias em aberto (P < 0,05). Os valores de sensibilidade e especificidade, respectivamente, das técnicas diagnósticas utilizando como critério a citologia por cytobrush foram: exame vaginal (53,9%, 95,4%); lavagem uterina (92,3%, 93,9%); avaliação ecográfica de líquido uterino (30,8%, 92,8%) e avaliação ultrassonográfica da espessura endometrial (3,9%, 89,2%) (BARLUND et al., 2008). Já LeBlanc et al. (2002a) obtiveram uma taxa de sensibilidade do exame vaginal de 20% e especificidade de 88% ao utilizar o diagnóstico de prenhez aos 120 e 150 dias pós-parto como referência. Considerando a presença de bactérias aeróbicas isoladas do útero e a proporção de PMNs acima de 5 e 18%, 17,3 e 28,5% das vacas, respectivamente, foram diagnosticadas falso positivas para endometrite por exame vaginal dias pósparto. (WESTERMANN et al., 2010). Quando a avaliação clínica não é suficiente para detectar anormalidades, podem ser feitas análises laboratoriais a partir da coleta de conteúdo uterino ou biópsias endometriais. A cultura bacteriana, a histopatologia e a citologia são exemplos de exames complementares realizados para detectar causas de subfertilidade em rebanhos com problemas de repetição de estro sem causa aparente, frequentes nos casos de endometrite subclínica (BARLUND et al., 2008). A biópsia endometrial é considerada o método mais confiável de diagnóstico de endometrite. Biópsias do endométrio foram inicialmente realizados em éguas na década de 1960 como uma ferramenta para a investigação de infertilidade (BRANDT & MANNING, 1969). Embora a técnica tenha revolucionado o manejo reprodutivo das éguas e é realizada rotineiramente antes da estação de monta (BRITTON, 1982), a biópsia ainda não ganhou maior aplicação para fins de pesquisa (SCHLAFER, 2007), especialmente em outros animais de importância econômica.

26 26 A B FIGURA 5 Citologia uterina. A) Escova ginecológica adaptada em aplicador de aço inoxidável. B) Lâminas de citologia uterina de vaca com endometrite com grande percentual de neutrófilos (Coloração Panótipo, 400x e 1000x). Fonte: arquivo pessoal.

27 27 Histologicamente a endometrite é definida como presença de células inflamatórias no endométrio (BONDURANT, 1999). A biópsia permite definir o prognóstico para fertilidade da fêmea, ou seja, a capacidade da vaca de levar uma gestação a termo. Pela biópsia endometrial é possível avaliar a inflamação (endometrite crônica, mais comum a infiltração por linfócitos, macrófagos in foci ou difusos), a fibrose e a degeneração cística glandular (KENNEY et al., 1978; BONNETT et al. 1993) (FIGURA 5). Segundo a intensidade do infiltrado inflamatório, avaliado pela quantidade de células mononucleares do exsudato, ela pode ser classificada em discreta, moderada ou acentuada, e segundo a distribuição em focal e difuso. As fibroses, associadas ou não à presença de células inflamatórias também podem ser classificadas em discretas, moderadas ou acentuadas segundo a intensidade da proliferação fibroblástica e produção de colágeno, normalmente ao redor de glândulas ou de agrupamentos de ramos glandulares, os assim chamados ninhos glandulares (CORDEIRO et al., 1989). Quanto maior a severidade da inflamação, fibrose, e alterações glandulares, pior é o prognóstico de fertilidade da vaca. Bonnet et al. (1991) obteve um aproveitamento da técnica de 95%, sendo que 70% das lâminas eram de boa qualidade, utilizando uma pinça de biópsia com boca ou punch de 1 cm de diâmetro. A biópsia endometrial e histopatologia constituem o método ideal de diagnóstico de endometrite, no entanto, o procedimento é invasivo, caro e é raramente utilizada por ser uma técnica muito demorada (ETHERINGTON et al., 1988; GILBERT et al., 2005). Além disso, a biópsia tem sido associada com um efeito prejudicial na fertilidade subsequente (MILLER et al, 1980;. BONNETT et al, 1993), no entanto recentemente se mostrou uma técnica segura no estudo conduzido por CHAPWANYA et al. (2010) ao realizar repetidas biópsias ao dia 15, 30 e 60 d.p.p com uma pinça de biópsia Hauptner equina, obtendo uma taxa de prenhez de 77% após sincronização do estro e inseminação artificial.

28 28 A B FIGURA 6 - Fotomicrografias de biópsia endometrial de vacas com endometrite crônica. A) Folículo linfóide no estrato esponjoso (seta preta), fibrose periglandular (seta branca) (H&E, 400x) B) Infiltrado difuso de células mononucleares no estrato esponjoso e estrato compacto (seta) (H&E, 100x).

29 29 C D FIGURA 6 - Fotomicrografias de biópsia endometrial de vacas com endometrite crônica. C) Fibrose periglandular e dilatação glandular (setas). A luz de uma glândula dilatada apresenta numerosas células inflamatórias (H&E, 100x). D) Fibrose periglandular (seta) (H&E, 400x). Fonte: arquivo pessoal.

30 Tratamento de endometrite O princípio geral do tratamento de endometrite é reduzir a carga de bactérias patogênicas, melhorar as defesas do útero e os mecanismos de reparo e, assim, deter e reverter as alterações inflamatórias que prejudicam a fertilidade (LEBLANC et al., 2002b), ou seja, os tratamentos se baseiam na remoção de material necrótico, administração de antimicrobianos e a indução do estro (LEBLANC et al., 2008). Em função das considerações éticas, em vários estudos nos quais são avaliados tratamentos de endometrite, o número de animais utilizado é pequeno e faltam controles negativos, prejudicando a avaliação do efeito do tratamento na cura da endometrite (LEBLANC et al., 2002b). LeBlanc et al. (2002b) ainda ressaltam que as pesquisas têm utilizado comparações entre diagnósticos antes e após tratamento e que o impacto na reprodução, como taxa de prenhez ou concepção não foram investigadas, o que torna impossível identificar os reais efeitos dos tratamentos. O tratamento de endometrite é considerado controverso entre os veterinários, particularmente no que se refere à terapia e se o tratamento em si realmente é necessário (GILBERT, 1992). Também ainda não está esclarecido se os casos de endometrite subclínica devem ser tratados (KASIMANICKAM et al., 2005b). No entanto, a antibioticoterapia continua sendo amplamente utilizada na profilaxia e no combate as infecções uterinas, seja por meio de infusões intra-uterina (IU) (NEVES et al., 1977), seja pela administração parenteral (MARQUES JUNIOR, 1991; NEVES et al., 1995), ou pela associação dos tratamentos local e sistêmico (RICHARDSON, 1993; NEVES et al., 1995). Todavia, a escolha da substância a ser utilizada na terapia IU deve ser criteriosamente avaliada, pois algumas substâncias promovem irritação com consequente descamação do endométrio (SEGUIN et al., 1974), por exemplo a solução de Lugol e a oxitetraciclina são relatadas como irritantes, podendo causar necrose de coagulação no endométrio (GILBERT & SCHWARK, 1992). A infusão de antimicrobianos no útero visa atingir altas concentrações no local da infecção (GUSTAFSSON, 1984; GILBERT & SCHWARK, 1992). Em contraste à administração sistêmica, a administração IU alcança maior concentração do antibiótico no endométrio, mas pouca penetração nas camadas mais profundas do útero, ou de outros tecidos genitais (MASERA et al., 1980; BRETZLAFF et al., 1983).

31 31 Substâncias notificadas para uso via infusão IU incluem a tetraciclina (THURMOND et al., 1993;. SHELDON & NOAKES, 1998), penicilina (THURMOND et al., 1993), cefapirina (DOHMEN et al, 1995;. MCDOUGALL, 2001; LEBLANC et al., 2002b; KASIMANICKAM et al., 2005b), 125 mg de ceftiofur (GALVAO et al., 2010), cloranfenicol (STEFFAN et al., 1984), solução de Lugol diluída (CALLAHAN & HORSTMAN, 1987), gentamicina, espectinomicina, sulfonamidas, nitrofurasone, iodo e clorexidina (GUSTAFSSON, 1984; GILBERT & SCHWARK, 1992). A maioria dos tratamentos não é indicada para uso IU e em muitos casos, não há informações publicadas sobre os períodos de descarte do leite (KANEENE et al., 1986; DINSMORE et al., 1996). Em ensaios de campo com infusão IU de antibióticos em uma variedade de protocolos para tratamento da endometrite não demostraram qualquer benefício no desempenho reprodutivo maior que o uso de PGF 2 α (STEFFAN et al, 1984;. OLSEN, 1996; SHELDON & NOAKES,1998, KAUFMANN et al., 2010) ou não tratar (STEFFAN et al, 1984; THURMOND et al., 1993). No entanto, alguns estudos demonstraram benefícios do uso do antibiótico intra-uterino na fertilidade subsequente. Vacas com endometrite clínica que receberam cefapirina IU entre 27 e 33 dias pós-parto tiveram um intervalo partoconcepção menor que os animais não tratados (LEBLANC et al., 2002b) Em outro estudo, vacas tratadas com cefapirina IU 41 ±14 d.p.p tiveram 2-3 vezes mais chances de estarem gestantes em relação às vacas não tratadas (MCDOUGALL, 2001). Outra opção ao tratamento intra-uterino é a lavagem uterina com solução salina estéril (SHELDON, 2004). O tratamento pode falhar devido à contaminação contínua do útero por alterações anatômicas do trato genital caudal, degradação do antibiótico no útero por exsudatos ou produção de uma camada de biofilme pelos microorganismos, que impede a ação do antibiótico (LEBLANC, 2010). Biofilmes consistem numa comunidade de diferentes espécies de bactérias, circundadas por uma matriz extracelular, que coexistem numa relação simbiótica (WALKER, 2008). Na maioria dos casos, os habitantes dessa comunidade são considerados da flora fisiológica e servem como um mecanismo protetor que previne a colonização por bactérias patogênicas. Os biofilmes podem conferir resistência aos antibióticos por uma série de mecanismos e, portanto, contribuem para a falha do tratamento com antibiótico (DONLAN & COSTERTON, 2002; SOTO et al., 2006).

32 32 Portanto, mais estudos são necessários para avaliar a real utilidade dos tratamentos com antibióticos. A maioria dos estudos questionando a utilidade IU de antibióticos é quase tão antiga quanto as drogas em si (ULBERG et al., 1952;. ROBERTS, 1956). Em estudo recente avaliando a taxa de cura espontânea das vacas com endometrite, 74,7% das vacas diagnosticadas com endometrite no exame vaginal e palpação retal se recuperaram espontaneamente da endometrite entre os 15 aos 60 dias pós-parto, 25,3% permaneceram com endometrite aos d.p.p e 10,6% das vacas negativas aos d.p.p foram positivas durante os d.p.p. (GAUTAM et al., 2010). Dubuc et al. (2011b) obtiveram 66% de taxa de cura espontânea para endometrite citológica (por citologia uterina) e de 63% para secreção purulenta vaginal de 63% entre o exame 1 (35 d.p.p.) e o exame 2, 21 dias após. Essas taxas de recuperação espontânea são maiores do que a apontada por Steffan et al. (1984) e Sutton et al. (1996), que citam uma taxa de cura espontânea de 33% nas vacas com endometrite clínica Oxitetraciclina e agentes fluidificadores de secreção intra-uterinos As tetraciclinas são conhecidas por terem atividade em condições anaeróbias e são parcialmente inativadas pelo material purulento, células mortas e pelo ph encontrado em úteros com infecção (CAIROLI et al., 1993). A oxitetraciclina é um antibiótico de amplo espectro indicado para o tratamento e controle de infecções causadas por bactérias de crescimento rápido (SHELDON et al., 2004). Sua eficiência antibacteriana contra muitas infecções causadas por bactérias Grampositivas e Gram-negativas é bem documentada (BRETZLAFF, 1986; KONIGSSON et al., 2001). Esse antibiótico também pode ser utilizado pela via IU (SEGUIN et al., 1974; MILLER & BERGT, 1976; SHELDON et al., 2004). A administração IU tem grande utilidade terapêutica, especialmente no tratamento e profilaxia da endometrite puerperal na vaca (CHAUDHERY et al., 1987; MALINOWSK et al., 2004). Essa via de administração da oxitetraciclina produz rapidamente nível terapêutico no endométrio e nas carúnculas de animais saudáveis e doentes (RONCADA et al., 2000; KACZMAROWSKI et al., 2004). Esse fato se deve a sua baixa absorção na corrente sanguínea (RONCADA et al., 2000), assim a ação terapêutica fica limitada em grande parte ao lúmen uterino e ao endométrio.