Pró-Reitoria Acadêmica Escola de Exatas, Arquitetura e Meio Ambiente. Curso de Ciências Biológicas. Curso de Ciências Biológicas

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1 Pró-Reitoria Acadêmica Escola de Exatas, Arquitetura e Meio Ambiente Curso de Ciências Biológicas Trabalho Pró-Reitoria de Conclusão de Graduação de Curso Curso de Ciências Biológicas Projeto de Trabalho de Conclusão de Curso IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE FUNGOS CAUSADORES DE ONICOMICOSE EM PACIENTES ATENDIDOS NA REDE PÚBLICA DE SAÚDE DO DISTRITO FEDERAL TÍTULO Identificação Molecular de Fungos Causadores de Onicomicose Distrito Federal Autor: Leonardo de Sousa Orientadora: Dr a. Rosângela Vieira de Andrade Autor: Leonardo de Sousa Orientadora: Prof a. Dr a. Rosângela Vieira de Andrade Brasília - DF Brasília 2017

2 LEONARDO DE SOUSA TÍTULO: IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE FUNGOS CAUSADORES DE ONICOMICOSE EM PACIENTES ATENDIDOS NA REDE PÚBLICA DE SAÚDE DO DISTRITO FEDERAL Projeto apresentado ao curso de graduação em Ciências Biológicas da Universidade Católica de Brasília, como parte dos requisitos para conclusão do curso superior de Bacharelado em Ciências Biológicas. Orientadora: Prof a. Dr a. Rosângela Vieira de Andrade Brasília DF 2017

3 Monografia de autoria de Leonardo de Sousa, intitulada IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE FUNGOS CAUSADORES DE ONICOMICOSE EM PACIENTES ATENDIDOS NA REDE PÚBLICA DE SAÚDE DO DISTRITO FEDERAL, apresentada como requisito parcial para obtenção do certificado de Bacharel em Ciências Biológicas da Universidade Católica de Brasília no dia 05 de junho de 2017, defendido e aprovado pela banca examinadora abaixo: Prof a. Dr a. Rosângela Vieira de Andrade Orientadora Ciências Biológicas UCB Programa de Pós-graduação em Ciências Genômicas e Biotecnologia - UCB Prof. MSc. Samuel Dias Araújo Júnior Biomedicina UCB Prof a. Dr a. Simoni Campos Dias (Suplente) Ciências Biológicas UCB Programa de Pós-graduação em Ciências Genômicas e Biotecnologia - UCB Brasília DF 2017

4 AGRADECIMENTO Primeiramente agradeço a Jeová Deus, embora por vezes eu tenha questionado e até desqualificado a sua existência; à minha orientadora por sua gentileza e compreensão durante todo o período de desenvolvimento deste trabalho; a cada um de meus professores, que ao longo do curso demonstraram prontidão e me incentivaram; aos meus colegas que de um modo ou de outro fizeram parte da minha vida acadêmica; aos meus familiares pelo apoio e às amizades novas que fiz durante o período em que estive na Universidade.

5 RESUMO Onicomicose é uma infecção fúngica que corresponde a 50% das onicopatias e sua incidência aumentou nas últimas décadas. Seu diagnóstico por meio de técnicas convencionais possui limitações, o que pode interferir no tratamento mais adequado. Sendo assim, este projeto de pesquisa tem como objetivo realizar por meio da técnica PCR a identificação de fungos causadores de onicomicose em pacientes atendidos na Rede Pública de Saúde do Distrito Federal. Para isso, 100 amostras de unhas de pacientes com diagnóstico clínico de onicomicose foram coletadas, tiveram o DNA extraído e quantificado. Todavia, o gene ITS1 e ITS4 de 28 delas foram amplificados por PCR e o DNA amplificado foi purificado das bandas do gel de agarose. Contudo, 22 amostras foram sequenciadas, analisadas e alinhadas com sequências depositadas nas bases de dados online NCBI GenBank, MycoBank, Institut Pasteur FungiBank e International Society for Human and Animal Mycology ITS. Esse alinhamento resultou em 5 amostras cuja identificação apresentou correlação significativa entre os valores de score e e-evalue. Fungos filamentosos não dermatófitos foi o grupo fúngico com o maior número de espécies, seguido por leveduras de Candida. Ao contrário do esperado, nenhuma espécie de dermatófito foi identificada dentre as sequências analisadas. Esses resultados indicam que a PCR é promissora no diagnostico de onicomicose e deve-se pensar na sua associação com os métodos convencionais para validação da identificação. Palavras-chave: Onicomicose. PCR. Alinhamento de sequências.

6 ABSTRACT Onychomycosis is a fungal infection that corresponds to 50% of onicopathies and its incidence has increased in the last decades. Its diagnosis through conventional techniques has limitations, which may interfere in the most appropriate treatment. Therefore, this research project aims to perform, through the PCR technique, the identification of fungi that cause onychomycosis in patients attended in the Public Health Network of the Distrito Federal. For this, 100 nail samples from patients with clinical diagnosis of onychomycosis were collected, the DNA extracted and quantified. However, the ITS1 and ITS4 gene from 28 of them were amplified by PCR and the amplified DNA was purified from the agarose gel bands. However, 22 samples were sequenced, analyzed and aligned with sequences deposited in the online databases NCBI GenBank, MycoBank, Institut Pasteur FungiBank and International Society for Human and Animal Mycology ITS. This alignment resulted in 5 samples whose identification showed a significant correlation between the values of score and e-evalue. Non-dermatophyte filamentous fungi were the fungal group with the highest number of species, followed by yeasts of Candida. Contrary to expectations, no dermatophytes were identified. These results indicate that the PCR is promising in the diagnosis of onychomycosis and its association with conventional methods for validation of identification should be considered. Key words: Onychomycosis. PCR. Sequence alignment.