Hybritech PSA. Atenção

TM Hybritech PSA REF 37200 Atenção Advertência Finalidade do teste Resumo e explicação do teste Uso exclusivo nos Estados Unidos. As leis federais restringem a venda e a distribuição deste produto a médicos ou sob a sua prescrição ou a laboratórios clínicos; da mesma forma, o seu uso é permitido somente por médicos ou sob a sua prescrição. A concentração de PSA determinada numa dada amostra mediante ensaios fornecidos por diversos fabricantes pode variar por causa das diferenças dos métodos de ensaio e da especificidade dos reagentes. Os resultados referidos pelo laboratório ao médico devem incluir a denominação do ensaio de PSA utilizado. Os valores obtidos com métodos de ensaio diferentes não podem ser alternados. Se, durante a monitorização de um doente, o método de ensaio usado para a determinação em série dos níveis de PSA for trocado, é aconselhável realizar outros testes sequenciais para confirmar os valores iniciais. O teste Access Hybritech PSA é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação quantitativa dos níveis totais do antigénio específico da próstata (PSA) no soro humano usando os Sistemas de Imunoensaio Access. Este dispositivo é indicado para a medição do PSA sérico em conjunto com o Toque Rectal como um auxílio na detecção de cancro da próstata em homens a partir dos 50 anos de idade. A biopsia da próstata é necessária para o diagnóstico de cancro. Este teste também é indicado para a medição em série do PSA para auxiliar no prognóstico e no tratamento de doentes com cancro da próstata. O cancro da próstata é o tipo de cancro que mais afecta os homens nos Estados Unidos, com uma incidência de aproximadamente um caso em cada 10 homens 1. Outrossim, representa a segunda maior causa de mortes por cancro entre homens americanos 1. Um teste fiável para detectar o cancro da próstata nos estágios iniciais, quando o tumor ainda está limitado na glândula e pode-se proporcionar um tratamento eficaz, pode ser de grande valor para o médico 2. No decorrer da história, a maioria dos casos de cancro da próstata já se tinha alastrado para além da glândula aquando do diagnóstico 3. Embora o toque rectal seja a técnica mais usada para detectar o cancro da próstata, assim como é realizado nas clínicas médicas, não consegue revelar um número significativo de cancros, incluindo muitos tumores limitados ao órgão 3,4,5. Um estudo clínico prospectivo multicêntrico realizado com a participação de 6.374 homens forneceu mais informações sobre o uso do Hybritech PSA e do toque rectal para a identificação de indivíduos com cancro da próstata 6. Um resumo dos resultados deste estudo é apresentado a seguir na secção "Valores Esperados". Outras aplicações clínicas foram claramente demonstradas para o PSA. Quando utilizada para o tratamento de doentes com cancro da próstata, a medição em série do PSA é útil na detecção de tumor residual e cancro recorrente após a prostatectomia radical 7. Além do mais, o PSA pode servir como um marcador preciso para a monitorização de estágio clínico em avanço em doentes não tratados 8, assim como na avaliação da resposta à terapêutica 9,10,11,12. Por isso, a medição em série das concentrações de PSA pode ser um instrumento importante na monitorização de doentes com cancro da próstata e na determinação da eficácia potencial e real de cirurgia ou outras terapêuticas. Outros marcadores bioquímicos tais como a fosfatase ácida prostática (PAP) e o antigénio carcinoembriónico (CEA) não possuem especificidade suficiente Página 1

para monitorizar a doença e não são adequados para detectar o cancro da próstata nos estágios iniciais 13. O antigénio específico da próstata (PSA) foi identificado e purificado por Wang e colaboradores em 1979 14. O PSA é uma glicoproteína de cadeia simples com um peso molecular de aproximadamente 34.000 dáltons, sendo que 7% do peso é constituído por carboidratos 14. O PSA existe fundamentalmente em três formas no soro 15. Acredita-se que uma forma do PSA esteja envolvida pelo inibidor da protease, a alfa-2 macroglobulina 15, e demonstrou-se não possuir reactividade imunológica. Uma segunda forma está complexada com outro inibidor da protease, a alfa-1 antiquimotripsina (ACT) 15,16,17. A terceira forma de PSA não está complexada com um inibidor da protease e é denominada PSA livre 15,16,17. As últimas duas formas podem ser detectadas imunologicamente em ensaios de PSA disponíveis no comércio e são denominadas conjuntamente como PSA total. As concentrações relativas das duas formas detectáveis dentro e entre amostras do paciente são variáveis e desconhecidas 18. Contudo, verificou-se que, normalmente, a concentração de PSA livre constitui cerca de 5 a 50% do PSA total no soro 19. Estudos mais aprofundados também demonstraram que vários imunoensaios reagem de maneira diferente a estas duas formas no soro 18,19. De modo específico, há dois tipos distintos de imunoensaios, baseados na resposta relativa de cada um às formas de PSA. Os ensaios de resposta equimolar detectam tanto as formas livres como as complexadas de PSA; demonstrou-se que ensaios de resposta não-equimolar ou assimétrica produziram de duas a três vezes mais sinais por molécula de PSA livre que com PSA-ACT. O teste Access Hybritech PSA é um ensaio equimolar no qual a recuperação da amostra não é afectada pela proporção das formas de PSA no soro. Por isso, o resultado referido não é modificado pelas concentrações relativas de PSA livre e de PSA-ACT na amostra. Os resultados gerados pelo ensaio Access Hybritech PSA não podem ser aplicados a ensaios de outros fabricantes. Estudos imuno-histoquímicos mostraram que o PSA é encontrado predominantemente no citoplasma das células acinares prostáticas e do epitélio ductal 20. O PSA está presente no tecido normal, hiperplásico benigno e prostático maligno, assim como no fluido prostático e no plasma seminal 21. O PSA não foi detectado nos casos de cancro do pulmão, cólon, recto, estômago, pâncreas ou tiróide 22. O PSA purificado não possui alguma actividade da fosfatase ácida e não reage com anticorpos contra a fosfatase ácida prostática (PAP) e vice-versa 23. Portanto, é bioquímica e imunologicamente diferente da PAP. Concentrações elevadas de PSA no soro apenas podem sugerir a presença de cancro da próstata até quando não for realizada a biopsia. As concentrações de PSA no soro também podem ser elevadas em hipertrofia benigna da próstata ou em condições inflamatórias da próstata e outros tecidos adjacentes. O PSA geralmente não é elevado em homens aparentemente saudáveis ou homens com carcinoma não-prostático. Os médicos devem discutir com os seus pacientes sobre os riscos e benefícios do teste do PSA. Princípios do teste O teste Access Hybritech PSA é um ensaio imunoenzimático de local duplo ( sandwich ). Uma amostra é adicionada a um recipiente de reacção contendo conjugado anticorpo monoclonal de rato anti-psa fosfatase alcalina e partículas paramagnéticas revestidas com um segundo anticorpo monoclonal de rato anti-psa. O PSA contido na amostra liga-se ao anticorpo monoclonal anti-psa imobilizado na fase sólida e, simultaneamente, o conjugado anticorpo monoclonal anti-psa fosfatase alcalina reage com um local antigénico diferente no PSA da amostra. Após a incubação num recipiente de reacção, os materiais ligados à fase sólida são retidos num campo magnético enquanto os materiais não ligados são removidos por lavagem. De seguida, o substrato quimioluminescente, Lumi-Phos* 530, é adicionado ao recipiente e a luz gerada pela reacção é medida com um luminómetro. A produção de luz é directamente proporcional à concentração de PSA na amostra. A quantidade de analito presente na amostra é determinada a partir duma curva de calibração multiponto armazenada no sistema. Access Hybritech PSA 386758A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 2

Informações sobre o produto Kit de reagentes Access Hybritech PSA Nº Cat. 37200: 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no aparelho. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta quando armazenado a 2 10 C. Estável a 2 10 C por 28 dias após utilização inicial. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Abrir a embalagem de reagente caso tenha sofrido prejuízos (p.ex. ruptura da camada elastomérica). Todos os anti-soros são policlonais, excepto quando indicado em contrário. R1a: R1b: Partículas paramagnéticas revestidas com anticorpo monoclonal de rato anti-psa suspensas em solução salina tamponada TRIS, com surfactante, albumina sérica bovina (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,1% de ProClin** 300. Conjugado anticorpo monoclonal de rato anti-psa fosfatase alcalina (bovina) diluído em solução salina tamponada de fosfato, com surfactante, BSA, proteína (murina), < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin 300. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas 24. Xi. Irritante: ProClin 300 0,25%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Colheita e preparação da amostra Soro é a amostra aconselhada. Amostras de plasma não devem ser utilizadas. As amostras destinadas aos testes do PSA devem ser colhidas antes de intervenções na próstata tais como toque rectal, massagem da próstata, ultra-som transrectal (TRUS) e biopsia da próstata. O toque rectal pode causar um aumento transitório nos níveis de PSA no soro 25. Recomenda-se uma segunda medição do PSA no caso de elevação excessiva dos níveis 26. A biopsia transrectal com agulha também demonstrou causar elevações persistentes de PSA 26. Assim, recomenda-se um período de espera de 6 semanas entre a biopsia com agulha e a amostragem do PSA. Utilizar exclusivamente sangue colhido com uma técnica médica aceitável numa proveta de colheita sem anticoagulantes. As amostras devem ser colhidas de maneira a evitar hemólise. A amostra deve ser deixada coagular por completo e o soro deve ser separado por Página 3

centrifugação. Se existir a possibilidade das amostras serem utilizadas para o teste do PSA livre, estas devem ser processadas (centrifugadas) e refrigeradas dentro de 3 horas da colheita do sangue 27. Se a amostra de soro for utilizada dentro de 24 horas após a colheita, esta deve ser armazenada num frigorífico a 2-8 C. Amostras conservadas por mais tempo (até 5 meses) devem ser congeladas a -20 C ou temperatura inferior 27,28. As amostras que tiverem de ser conservadas por mais de 5 meses devem ser congeladas a -70 C 27,28,29. Ciclos repetidos de congelação-descongelação não afectam o PSA livre, o PSA total ou o PSA livre percentual 27. Todavia, é recomendável recongelar sem demora as amostras descongeladas. Amostras de soro turvas ou contendo matéria particulada devem ser centrifugadas antes do ensaio. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras, excepto quando indicado em contrário no folheto do produto: Certificar-se de que a fibrina e a matéria celular residuais tenham sido removidas antes da análise. Para a centrifugação, seguir as instruções do fabricante das provetas de colheita de sangue. Cada laboratório deve determinar a aceitabilidade das próprias provetas de colheita de sangue e dos produtos de separação do soro. Estes produtos podem variar entre fabricantes diferentes e, às vezes, de um lote para o outro. Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access Hybritech PSA Materiais necessários mas não fornecidos Comentários sobre o procedimento 1. Calibradores: Access Hybritech PSA Calibrators Fornecido em zero e aproximadamente 0,5, 2,0, 10, 75 e 150 ng/ml Nº Cat. 37205 2. Access Hybritech PSA QC ou outro material de controlo disponível no mercado. Fornecido em aproximadamente 1,0, 15 e 90 ng/ml Nº Cat. 37209 3. Diluente: Access Hybritech PSA Sample Diluent Nº Cat. 37206 4. Substrato: Access Substrate Nº Cat. 81906 5. Tampão de lavagem: Access Wash Buffer Nº Cat. 81907 (Access, Access 2, SYNCHRON LX i) Nº Cat. 8547197 (UniCel DxI) 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no aparelho. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 3. Usar vinte e cinco (25) µl de amostra para cada determinação além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 4. A unidade de medida padrão do sistema para indicar os resultados das amostras é ng/ml. Access Hybritech PSA 386758A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 4

Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade Resultados Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Para todos os testes, é necessário ter uma curva de calibração activa. Para o ensaio Access Hybritech PSA, a calibração é necessária a cada 28 dias. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas 30. Utilizar controlos de qualidade Access Hybritech PSA QC ou outros materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. Os resultados dos testes dos doentes são determinados automaticamente pelo software do sistema utilizando um modelo matemático de curva logística de quatro parâmetros ponderada (4PLC). A quantidade de analito na amostra é determinada a partir da produção de luz medida através dos dados de calibração armazenados no sistema. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções completas sobre como visualizar os resultados das amostras. 1. As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo de análise compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor mais alto do calibrador (aproximadamente 0,008 150 ng/ml). Se uma amostra contém uma quantidade menor que o limite mínimo de detecção para o ensaio, registar os resultados como menores que aquele valor (por ex., < 0,008 ng/ml). Se uma amostra contém uma quantidade maior que o valor estabelecido do calibrador mais alto Access Hybritech PSA Calibrator (S5), registar os resultados como maiores que aquele valor (por ex., > 150 ng/ml). Alternativamente, diluir um volume de amostra com 4 ou 9 volumes de diluente de amostras Access Hybritech PSA Sample Diluent. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. 2. Nos ensaios que utilizam anticorpos murinos, podem ocorrer interferências com os anticorpos anti-rato humanos (HAMA) contidos na amostra. Os anticorpos anti-rato humanos (HAMA) podem estar presentes nas amostras de doentes submetidos a imunoterapia ou procedimentos de diagnóstico que utilizam anticorpos monoclonais 31,32 ou em indivíduos que tiveram contacto regular com animais. Além disso, outros anticorpos heterófilos, tais como os anticorpos anticabra humanos podem estar presentes nas amostras dos doentes. 3. Os resultados do Access Hybritech PSA devem ser interpretados baseando-se no quadro Página 5

clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. As concentrações de PSA no soro não devem ser interpretadas como evidência absoluta da presença ou da ausência de cancro da próstata. Concentrações elevadas podem ser observadas no soro de pacientes com hiperplasia benigna da próstata ou outros distúrbios não malignos, assim como em cancro da próstata. Além do mais, concentrações baixas não são necessariamente indicativas da ausência de cancro. Os valores de PSA no soro devem ser usados em conjunto com informações disponíveis a partir da avaliação clínica do doente e de outros métodos de diagnósticos tais como o toque rectal. Alguns casos de cancro inicial da próstata não serão detectados pelo teste do PSA; o mesmo pode ser dito do toque rectal. A biopsia da próstata é o método padrão usado para confirmar a presença ou a ausência de cancro da próstata. Na monitorização de doentes de cancro da próstata diagnosticado anteriormente, previsões de recorrência da doença não devem basear-se somente nos valores obtidos através de medições séricas em série do PSA. 4. O ensaio Access Hybritech PSA não apresenta algum efeito gancho (hook) até a 50.000 ng/ml. 5. A segurança e a eficácia do uso de um valor de cutoff diferente de 4,0 ng/ml não foi estabelecida. 6. Os fármacos inibidores da 5-alfa-reductase podem afectar os níveis de PSA em alguns pacientes. Outros fármacos usados para tratar a hiperplasia benigna da próstata (BPH) também podem afectar os níveis de PSA. Deve-se tomar cuidado na interpretação de resultados de pacientes sob o tratamento com estes fármacos. Valores esperados Valores esperados na detecção de cancro da próstata Foi realizada um estudo clínico prospectivo multicêntrico para testar a eficácia do PSA juntamente com o exame do toque rectal como um auxílio na detecção de cancro da próstata 6. Um total de 6.374 homens com 50 anos de idade ou mais participaram do estudo. Embora os resultados de PSA neste estudo tenham sido gerados usando o ensaio Hybritech Tandem PSA, o ensaio Access Hybritech PSA foi desenvolvido usando os mesmos anticorpos monoclonais empregados no ensaio Hybritech Tandem PSA e foi padronizado para fornecer o mesmo desempenho clínico. Este estudo demonstrou que a maioria (72% ou 93/130) dos casos de cancro detectados pelo PSA e o toque rectal estavam limitados ao órgão (Estágios A ou B). Este estudo também demonstrou que o teste do PSA, quando usado juntamente com o toque rectal, foi mais eficaz em detectar o cancro da próstata do que somente o toque rectal. Havia cancro em 21% (126/588) dos indivíduos sintomáticos com um PSA elevado e/ou toque rectal suspeito, e em 23% (104/452) dos indivíduos assintomáticos com um PSA elevado e/ou toque rectal suspeito. As determinações de PSA detectaram 41% (94/230) de casos de cancro que o toque rectal não havia detectado; elevações de PSA maiores que 4 ng/ml podem justificar um teste adicional mesmo se o toque rectal for negativo. Todavia, a recíproca também é verdadeira; um indivíduo com um toque rectal suspeito e um PSA normal também pode necessitar de teste adicional dado que o toque rectal detectou 21% (48/230) de casos de cancro que as determinações do PSA não havia detectado. O estudo também demonstrou que a maioria (68% ou 69/102) dos casos de cancro detectados pelo PSA quando a concentração estava acima de 4 ng/ml estavam limitados ao órgão (Estágios A ou B). Um resumo dos resultados do estudo é fornecido na Tabela 1. Access Hybritech PSA 386758A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 6

Tabela 1: Tabela síntese dos resultados do estudo clínico (Número de indivíduos testados = 6374) Todos os indivíduos Nº de indivíduos n (%) 6374 (100%) PSA > 4.0 923 (14%) TR + 946 (15%) PSA 4.0 TR- 4750 (75%) PSA > 4.0 TR- 678 (11%) PSA 4.0 TR+ 701 (11%) PSA > 4.0 TR+ 245 (4%) Nº de biopsias n Nº de casos de cancro n % de biopsias positivas (95% de IC)* 1040 230 22 (19,6 24,6) 594 182 31 (26,9 34,4) 626 136 22 (18,5 25,0) Nº de prostatectomias n Nº de registos de estágios patológicos n Nº de cancros limitados ao órgão (estágios A e B) n (%) 135 130 93 (72%) 104 102 69 (68%) 83 78 53 (68%) Nº de cancros avançados (estágios C ou D) n (%) 37 (28%) 33 (32%) 25 (32%) 0 N/A N/A N/A N/A N/A N/A 414 94 23 (18,7 26,8) 446 48 11 (7,9 13,6) 180 88 49 (41,6 56,2) 52 52 40 (77%) 31 28 24 (86%) 52 50 29 (58%) 12 (23%) 4 (14%) 21 (42%) Legenda: PSA measured in (ng/ml) + Suspeito de cancro TR: Toque Rectal Não suspeito de cancro N/A: Não disponível Não faz parte do protocolo de estudo *95% de Intervalo de Confiança (Limite Inferior Limite Superior) A Tabela 2 contém a distribuição dos valores de PSA por faixa etária para os indivíduos assintomáticos no estudo clínico que resultaram negativos tanto no PSA como no toque rectal, não sendo, portanto, submetidos a biopsia, assim como para os indivíduos que resultaram negativos para cancro após biopsia. Não existe uma certeza de que todos esses indivíduos estivessem realmente livres de doenças da próstata. Por isso, estes dados devem ser interpretados com cuidado desde que é questionável se estes indivíduos representam uma população realmente normal. Hoje em dia, não há dados que provem que o uso de faixas de referência específicas por idade seja seguro ou eficaz. Tabela 2: % de distribuição de PSA (ng/ml) por idade para indivíduos assintomáticos aparentemente saudáveis Idade Número de Concentração de PSA (ng/ml) (anos) indivíduos 0 4,0 > 4,0 % (n) % (n) 50 59 1273 97 (1240) 3 (33) 60 69 1120 92 (1032) 8 (88) 70 79 298 90 (268) 10 (30) > 80 30 90 (27) 10 (3) TOTAL 2721 94 (2567) 6 (154) Dos 6.374 indivíduos estudados, 1.040 foram submetidos a biopsia baseada num valor elevado de PSA (> 4,0 ng/ml) ou num toque rectal suspeito. A percentagem de indivíduos submetidos a biopsia com cancro correspondente aos resultados de PSA e toque rectal é mostrada na Tabela 3. Página 7

Tabela 3: Percentagem de Indivíduos submetidos a biopsia com cancro correspondente aos resultados do teste Categoria dos resultados Percentagem dos indivíduos submetidos à biopsia com cancro % (95% CI)* Número de indivíduos submetidos à biopsia com cancro PSA > 4.0 31 (26,9 34,4) 182/594 TR + 22 (18,5 25,0) 136/626 PSA 4.0 TR + 11 (7,9 13,6) 48/446 PSA > 4.0 TR + 49 (41,6 56,2) 88/180 PSA 4.0 TR N/A N/A PSA > 4.0 TR 23 (18,7 26,8) 94/414 *95% de Intervalo de Confiança (Limite Inferior Limite Superior) A eficácia do PSA e do toque rectal em detectar casos de cancro limitado ao órgão (Estágio A ou B) é demonstrada na Tabela 4. Tabela 4: Percentagem de Indivíduos submetidos a biopsia com cancro correspondente aos resultados do teste PSA TR POSITIVO ( > 4,0 ng/ml) POSITIVO 29 (31,2%) NEGATIVO 40 (43,0%) TOTAL 69 (74%) NEGATIVO (0 4,0 ng/ml) TOTAL 24 (25,8%) 0 (0%) 24 (26%) 53 (57%) 40 (43%) 93 (100%) Concentrações de PSA no soro, independentemente do valor, não devem ser interpretadas como evidência definitiva da presença ou ausência de cancro da próstata. Além disso, o teste do PSA deve ser feito em conjunto com o toque rectal, pois PSA e toque rectal juntos detectaram o maior número de casos de cancro. Outros testes e procedimentos aceites clinicamente também devem ser considerados no diagnóstico do cancro da próstata e no bom tratamento do doente. A biopsia prostática é necessária para o diagnóstico do cancro. Valores esperados para prognóstico e tratamento A distribuição relativa de concentrações de PSA em indivíduos saudáveis, doentes com carcinoma da próstata e doentes com doenças não malignas é apresentada na Tabela 5. Neste estudo, 99% dos homens saudáveis tinham concentrações de PSA de 4,0 ng/ml ou menos. A classificação "Outros" na categoria de cancro consiste em leucemia, carcinoma ósseo, carcinoma hepático, carcinoma da pele e uma variedade de outras doenças cancerosas. A classificação "Dist. Geniturinários" na categoria não cancerosa inclui doentes com as seguintes doenças: disfunção renal, orquite, prostatite, uretrite e outras doenças geniturinárias. Access Hybritech PSA 386758A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 8

Tabela 5: % de distribuição de PSA (ng/ml) Categoria clínica n 0 4,00 (ng/ml) 4,01 10,0 (ng/ml) 10,01 20,0 (ng/ml) 20,01 40 (ng/ml) > 40 (ng/ml) Indivíduos saudáveis Homens < 40 anos 265 100 0 0 0 0 Homens 40 anos. 207 97 3 0 0 0 Total de homens 472 99 1 0 0 0 Mulheres 388 100 0 0 0 0 TOTAL 860 99 1 0 0 0 Doenças cancerosas Próstata Estágio A 70 37 33 13 6 11 Estágio B 90 29 21 12 8 30 Estágio C 128 19 9 10 13 49 Estágio D 265 12 9 11 9 59 Total Próstata 553 19 14 11 10 46 Gastrintestinal 187 95 5 0 0 0 Geniturinário 323 98 2 0 0 0 Mamário 91 99 1 0 0 0 Pulmonar 147 95 5 0 0 0 Renal 54 96 4 0 0 0 Outros 114 95 5 0 0 0 TOTAL 1469 68 7 4 4 17 Doenças não cancerosas Hipertrofia Benigna da 352 80 18 2 < 1 0 Próstata Dist. Geniturinários 408 93 7 0 0 0 Outros 394 98 2 0 0 0 TOTAL 1154 91 8 < 1 < 1 0 Características específicas de desempenho Recuperação da diluição (linearidade) Dez amostras séricas contendo concentrações elevadas de PSA foram diluídas com o diluente de amostras Access Hybritech PSA Sample Diluent e testadas em quadruplicado em diluições múltiplas. As concentrações de PSA observadas comparadas com concentrações esperadas foram analisadas por regressão linear. Os coeficientes de correlação (r) variaram entre 0,9996 e 1,0000. Provas de recuperação Concentrações de PSA cobrindo toda a faixa do ensaio foram adicionadas em cada um dos cinco soros de homens saudáveis para obter quatro níveis corrigidos para cada soro. As concentrações de PSA foram medidas nos soros corrigidos. A percentagem de recuperação foi calculada como (concentração observada/concentração esperada) x 100%. As recuperações médias dos cinco soros ficaram na faixa de 96,9% a 101,7% com uma média de recuperação média de 98,5%. Imprecisão Este teste mostra uma imprecisão total menor ou igual a 7% a concentrações acima de 1,4 ng/ml e um DP menor ou igual a 0,1 ng/ml a concentrações menores ou iguais a 1,4 ng/ml. A reprodutibilidade do teste Access Hybritech PSA foi determinada num estudo analisando três controlos de PSA de origem humana em triplicado, numa série de 40 execuções, utilizando o Sistema de Imunoensaio Access UniCel DxI. Os dados apresentados foram calculados de acordo com as directrizes NCCLS EP5-A. Página 9

Amostra Média geral (n=132) (ng/ml) Tabela 6: Imprecisão Intra-execução (DP) Intra-execução (%CV) Inter-execução (%CV) 1 0,98 0,04 4,53 5,17 2 5,04 0,21 4,10 4,41 3 37,67 1,46 3,89 4,20 Especificidade analítica / Interferências Amostras contendo até a 500 mg/dl (5 g/l) de hemoglobina, 20 mg/dl (0,2 g/l) de bilirrubina, 1500 mg/dl (15 g/l) de triglicéridos e concentrações de proteínas totais de 4,2 12,1 g/dl (42 121 g/l) não afectam a concentração de Access Hybritech PSA testado. Várias concentrações de medicamentos foram adicionadas às amostras séricas contendo PSA e testadas em quadruplicados. Os medicamentos e as concentrações mais altas testadas estão relacionados abaixo. Com as concentrações indicadas, estes medicamentos não interferiram com a recuperação do PSA das amostras de soro. Tabela 7: Teste de interferência de medicamentos (Medicamentos mais usados) Medicamento Concentração Medicamento Concentração Paracetamol 0,2 mg/ml acetato de goserelin 2,5 ng/ml Aspirina 0,5 mg/ml bitartarato de hidrocodona 240 ng/ml biotina 50 ng/ml ibuprofeno 0,4 mg/ml captopril 4 µg/ml acetato de leuprolida 8 ng/ml cimetidina 0,1 mg/ml lovastatina 270 ng/ml Ciprofloxacina 46 µg/ml acetato de megesterol 39,6 µg/ml Fumarato de meclastina 2,7 µg/ml metotrexato 13,2 µg/ml Cloridrato de clomipramina 2,7 µg/ml tartarato de metoprolol 2,7 µg/ml ciclofosfamida 0,33 mg/ml naproxeno sódico 1 mg/ml Cloridrato de doxorrubicina 6,6 µg/ml nifedipina 270 ng/ml Hiclato de doxiciclina 2,6 µg/ml paclitaxel 0,85 mg/ml solução de fosfato de estramustina 81,7 µg/ml prednisona 1,65 µg/ml Finasterida 370 ng/ml sildenafil 0,2 mg/ml cloridrato de fluoxetina 0,55 µg/ml sulfametoxazol 117 µg/ml flutamida 78 ng/ml (em combinação com) trimetoprim 23,4 µg/ml furosemida 20 µg/ml cloridrato de terazosin 1,45 mg/ml Sensibilidade analítica O nível mínimo detectável de PSA distinguível de zero (calibrador Access Hybritech PSA Calibrator S0) com 95% de confiança é < 0,008 ng/ml. Este valor é determinado através do processamento duma curva de calibração completa de seis pontos, controlos e 20 replicados do calibrador zero em testes múltiplos. O valor de sensibilidade analítica é calculado a partir da curva no ponto que representa dois desvios padrão do sinal médio medido no calibrador zero. Access Hybritech PSA 386758A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 10

Comparação entre Sistemas de Imunoensaio Access A tabela abaixo fornece os dados estatísticos da regressão de Deming para o teste Access Hybritech PSA dos Sistemas de Imunoensaio Access. Sistemas Access N Intervalo de Observações (ng/ml) Access 2 por Access 122 0,008 136,5 Synchron LXi 725 por Access 2 64 0,1 146,5 UniCel DxI 800 por Access 2 111 0,29 147,8 Intercepção (95% CI) -0,12 (-0,29 a 0,042) -0,05 (-0,51 a 0,41) 0,05 (-0,61 a 0,71) Inclinação (95% CI) Coeficiente de Correlação r 2 0,999 (0,995 a 1,002) 0,999 0,912 (0,904 a 0,920) 0,998 0,959 (0,946 a 0,972) 0,990 Página 11

TM Hybritech PSA CALIBRATORS REF 37205 Atenção Finalidade do produto Resumo e explicação do produto Padronização Informações sobre o produto Uso exclusivo nos Estados Unidos. As leis federais restringem a venda e a distribuição deste produto a médicos ou sob a sua prescrição ou a laboratórios clínicos; da mesma forma, o seu uso é permitido somente por médicos ou sob a sua prescrição. Os calibradores Access Hybritech PSA Calibrators são utilizados para calibrar o ensaio Access Hybritech PSA para a determinação quantitativa dos níveis de antigénio total específico da próstata (PSA) no soro humano utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. A calibração dum ensaio quantitativo é o processo pelo qual as amostras com concentrações conhecidas de analito (por ex., calibradores de ensaio) são testadas como amostras de doentes a fim de medir a sua resposta. A relação matemática entre as respostas medidas e as concentrações conhecidas de analito define a curva de calibração. Esta relação matemática, ou curva de calibração, é utilizada para converter as medições URL (Unidade Relativa de Luz) de amostras de doentes em concentrações quantitativas específicas de analito. A substância a ser medida (analito) nos calibradores Access Hybritech PSA Calibrators tem como referência Os calibradores internos do fabricante. O processo de padronização baseia-se na norma pren ISO 17511. Os valores atribuídos foram estabelecidos usando amostras representativas deste lote de calibrador e são específicos para as metodologias de ensaio dos reagentes Access. Os valores atribuídos por outras metodologias podem ser diferentes. Tais diferenças, se presentes, podem ser causadas por desvios entre os métodos. Access Hybritech PSA Calibrators Nº Cat. 37205: S0 S5, 2,5 ml/recipiente Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta quando armazenado a 2 10 C. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. Consultar o cartão de calibração ou as etiquetas dos recipientes para as concentrações exactas.. S0: Albumina sérica bovina tamponada (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,5% de ProClin** 300. S1, S2,S3, S4, S5: Cartão de calibração PSA humano a níveis de aproximadamente 0,5; 2,0; 10; 75 e 150 ng/ml em BSA tamponada, < 0,1% de azida sódica e 0,5% de ProClin 300. 1 Access Hybritech PSA 386758A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 12

Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. O material de origem humana utilizado na preparação do reagente foi testado e considerado não reactivo ao antigénio de superfície da Hepatite B (HBs Ag), aos anticorpos do vírus da Hepatite C (HCV) e aos anticorpos do vírus da Imunodeficiência humana (HIV-1 e HIV-2). Dado que nenhum método de ensaio conhecido pode oferecer a segurança completa da ausência de agentes infecciosos, manusear os reagentes e as amostras dos doentes como potencialmente infecciosos 24. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas 24. Xi. Irritante: ProClin 300 0,5% R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Detalhes da calibração Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os calibradores Access Hybritech PSA Calibrators são fornecidos em seis níveis - zero e aproximadamente 0,5, 2,0, 10, 75, e 150 ng/ml. Os dados de calibração do ensaio são válidos por 28 dias. Os calibradores são analisados em duplicado. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. Página 13

TM Hybritech PSA SAMPLE DILUENT REF 37206 Atenção Finalidade do produto Resumo e explicação do produto Informações sobre o produto Uso exclusivo nos Estados Unidos. As leis federais restringem a venda e a distribuição deste produto a médicos ou sob a sua prescrição ou a laboratórios clínicos; da mesma forma, o seu uso é permitido somente por médicos ou sob a sua prescrição. O diluente de amostras Access Hybritech PSA Sample Diluent é utilizado juntamente com o ensaio Access Hybritech PSA para diluir as amostras dos doentes contendo concentrações de antigénio total específico da próstata (PSA) maiores que as do calibrador S5. O nível de PSA em amostras de doentes podem exceder os níveis do calibrador Access Hybritech PSA Calibrator S5. Se for necessário um valor quantitativo, será preciso diluir a amostras a fim de determinar a concentração de PSA. Access Hybritech PSA Sample Diluent Nº Cat. 37206: 14 ml/recipiente Fornecido pronto para utilizar. Deixar o conteúdo repousar à temperatura ambiente por 10 minutos. Misturar invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado na etiqueta do recipiente quando armazenado a 2 10 C.. Diluente: Albumina sérica bovina tamponada, < 0,1% de azida sódica, 0,5% de ProClin** 300. Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas 24. Xi. Irritante: ProClin 300 0,5%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo analítico compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor do calibrador mais alto (aproximadamente Access Hybritech PSA 386758A 2003 Beckman Coulter, Inc. Página 14

0,008 150 ng/ml). Se uma amostra contém uma quantidade de PSA maior que o valor estabelecido do calibrador S5, diluir um volume da amostra com 4 ou 9 volumes de diluente de amostras Access Hybritech PSA Sample Diluent. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. Limitações do procedimento Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente. Página 15

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33 HHS Publication No 93-8395, 3rd ed., May 1993. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Washington, DC: U.S. Government Printing Office. A compra deste kit autoriza o seu uso conforme as Patentes E.U.A. Númeos 4.376.110, 4.486.530 e 5.501.983. Access, SYNCHRON LX e UniCel são marcas registadas da Beckman Coulter, Inc. Hybritech e Tandem são marcas registradas da Hybritech Incorporated, uma companhia subsidiária da Beckman Coulter, Inc. *Lumi-Phos é uma marca registrada da Lumigen, Inc. **ProClin é uma marca registrada da Companhia Rohm e Haas ou de suas subsidiárias e filiais. Fabricado por: Beckman Coulter, Inc. 4300 N. Harbor Blvd. Fullerton, CA 92835 U.S.A. Beckman Coulter Ireland Inc. Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland 353 91 774068 Impresso nos Estados Unidos da América Fabricado nos Estados Unidos da América Editado em Outubro 2003 0050 Página 17