1 AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIFÚNGICA DO ÓLEO ESSENCIAL DE Lantana camara L. MARCIO DOS SANTOS ROCHA, MITRA MOBIM, SIDNEY GONÇALO DE LIMA, MARIA LILIANE XIMENDES AZEVEDO, FRANCISCO DAS CHAGAS CARDOSO FILHO, MARIA CHRISTINA SANCHES MURATORI Resumo A espécie L. camara apresenta vários estudos, em especial, a atividade antifúngica dos óleos essenciais, o objetivo foi avaliar a atividade antifúngica do OELC frente à linhagem de Candida krusei. Após a coleta das folhas, foi realizada extração do óleo essencial utilizando aparelho tipo Clevenger, a cromatográfia foi realizada em fase Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas, a atividade antifúngica foi avaliada de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute, através do método de microdiluição. A análise por CG/EM mostrou que o OELC apresentou-se rico em constituintes mono e sesquiterpenóides. Os resultados indicam que o OELC inibe o crescimento da levedura em todas as concentrações testadas. Palavras-chave: Lantana camara L.; Óleo essencial; Candida krusei. ANTIFUNGAL ACTIVITY ASSESSMENT OF ESSENTIAL OIL OF Lantana camara L. Abstract The species L. camara presents several studies, in particular, the antifungal activity of the essential oils, so the goal was to evaluate the antifungal activity of OELC front of the Candida krusei strain. After collecting the leaves, was carried essential oil extraction using Clevenger 2454
2 type apparatus, the chromatography was carried out in the gas phase coupled to Mass Spectrometry, antifungal activity was evaluated according to the Clinical and Laboratory Standards Institute, through the microdilution method. Analysis by GC / MS showed the OELC presented itself rich in mono- and sesquiterpenoids constituents. The results indicate that the OELC inhibits yeast growth at all concentrations tested. Key-Words: Lantana camara L.; Essential oil; Candida krusei. Introdução No Brasil, espécies do gênero Lantana são encontradas em todos os Estados (Sousa, 2010). Seu óleo essencial apresenta um elevado espectro antibacteriano, repelente, cupinicida, alelopático e antifúngico (Costa et al., 2009; Sousa et al., 2010a, 2010b; Zoubiri; Baaliouamer, 2011). Diversas espécies de fungos e leveduras estão associadas a infecções em animais e em humanos, algumas dessas espécies são comensais, fazendo parte da microbiota dos indivíduos saudáveis, embora sejam associadas com casos clínicos, como mastites em ruminantes (Costa et al., 2008; Spanamberg et al., 2009), mais relevante em bovinos leiteiros, pois afeta a produção e a qualidade do leite. Assim, o objetivo foi avaliar a atividade antifúngica do OELC frente à linhagem de Candida krusei. Material e métodos As Folhas de L. camara, foram coletadas em Simões-PI, para extração dos constituintes voláteis. O óleo essencial foi extraído durante 3 horas em um aparelho tipo Clevenger, seco com sulfato de sódio anidro, pesado e armazenado em frasco tampado, revestido de papel alumínio sob temperatura média de 4 C, até a análises (Aguiar, et al., 2015). A cromatografia do óleo foi realizada em fase gasosa acoplada à 2455
3 Espectrometria de Massas (CG/EM) utilizando um ISQ mass spectrometer, com coluna capilar apolar HP-5MS, de sílica fundida, carreado por gás hélio, sob fluxo 1 ml min -1. A temperatura da coluna foi programada de 50ºC a 260ºC. A identificação e composição percentual dos óleos foi a partir da medida de integração das áreas sobre os picos (Aguiar et al., 2015). A atividade antifúngica foi avaliada sob o protocolo nº M44-A2 do CLSI (2009), através do método de microdiluição. Discos de papel contendo 20 µl OELC nas concentrações de 100, 50, 25 e 12,5 mg/ml, preparadas em solução de água destilada e acetona (20%) adicionados às placas de petri e incubados a 36 C por 48 horas. As zonas de inibição foram medidas e o experimento feito em triplicata. Fluconazol (25μg) e água/acetona 20% foram utilizados como controle positivo e negativo, respectivamente. Resultados e discussão A análise por CG/EM mostrou que o OELC apresentou-se rico em constituintes mono e sesquiterpenóides, sendo identificados aproximadamente 95% dos constituintes (Tabela 1). A composição foi similar aos trabalhos de Medeiros et al., (2012) e Aguiar et al., (2015) para óleos extraídos de L. camara coletados no nordeste brasileiro. Entretanto, observou-se que os constituintes variam de uma região para outra de acordo com estações do ano. Tabela 1.Composição química do óleo essencial de Lantana camara Componentes a I. K. b (%) PM Componentesª I.K. b (%) PM -Pineno 974 1,17 136 γ-elemeno 1440 1,02 204 Limoneno 1024 1,64 136 α-humuleno 1460 2,63 204 1,8-Cineol 1039 1,17 154 allo-aromadendreno 1466 0,99 204 Linalool 1095 1,28 154 Germacreno-D 1448 17,77 204 α-copaeno 1379 0,80 204 γ-elemeno 1440 32,81 204 δ-elemeno 1396 5,11 204 δ-cadineno 1530 1,50 204 β-cariofileno 1430 23,91 204 Espatulenol 1591 2,48 204 2456
4 TOTAL (%) 94,27 a Compostos listados na ordem de iluição na coluna DB-5HT. b Índice de retenção calculado para série de n-alcanos C8-C20 para a coluna DB-5HT. A atividade antifúngica do OELC indica que o mesmo inibe o crescimento da levedura em todas as concentrações testadas (Tabela 2), confirmando os dados da literatura acerca da atividade antifúngica do OELC (Deena; Thoppil, 2000; Kumar et al., 2006), sendo que esta é o primeiro relato de avaliação antifúngica com a espécie C. krusei. Tabela 2 Atividade antifúngica do óleo essencial de Lantana camara, frente a Candida krusei. Concentrações (mg ml -1 ) 100 50 25 12,5 Zona de inibição (mm) 14 12 12 10 Conclusões Foram encontrados uma elevada percentagem de sesquiterpenos, sendo o β-cariofileno, Germanecro D e o γ-elemeno os principais constituintes. O OELC pode ser uma alternativa de produtos naturais com ação antifúngica, embora deva ser ainda avaliado através de ensaios toxicológicos. Referências AGUIAR, U. N.; DE LIMA, S. G.; ROCHA, M. S. et al. Chemical composition and modulation of antibiotic activity ofessential oil of Lantana caatingensis M. (Verbenaceae). Industrial Crops and Products, v.74, p.165-170, 2015. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). 2009. Method for antifungal disk diffusion susceptibility testing of Yeasts.2th ed. CLSI document M44-A2. Pennsykvania, USA. COSTA, G. M.; SILVA, N.; ROSA, C. A. et al. Mastite por leveduras em bovinos leiteiros do Sul do Estado de Minas Gerais, Brasil. Ciência Rural, v.38, n.7, p.1938-1942, 2008. 2457
5 COSTA, J. G. M.; SOUSA, E. O.; RODRIGUES, F. F. G. et al. Composição química e avaliação das atividades antibacteriana e de toxicidade dos óleos essenciais de Lantana camara L. e Lantana sp. Rev. Bras. de Farmacognosia, v.19, n.3, p.710-714, 2009. DEENA, M. J.; THOPPIL, J. E. Antimicrobial activity of the essential oil of Lantana. Fitoterapia, v. 71, n. 4, p. 453-455, 2000. KUMAR, V. P.; CHAUHAN, N. S.; PADH, H. et al. Search for antibacterial and antifungal agents from selected Indian medicinal plants. Journal of Ethnopharmacology, v.107, p.182 188, 2006. MEDEIROS, L. B. P.; ROCHA, M. S.; DE LIMA, S. G. et al. Chemical constituents and evaluation of cytotoxic and antifungal activity of Lantana camara essential oils. Rev. Bras. de Farmacognosia, v.22, n.6, p.1259-1267, 2012. SOUSA, E.O. Estudo químico e avaliação biológica de Lantana camara L. e Lantana montevidensis Briq. (VERBENACEAE). [Dissertação] Crato: Universidade Regional do Cariri URCA, 2010. SOUSA, E. O.; COLARES, A. V.; RODRIGUES, F. F. G. et al. Effect of Collection Time on Essential Oil Composition of Lantana camara Linn (Verbenaceae) Growing in Brazil Northeastern. Records of Natural Products. v.4, p.31-37, 2010a. SOUSA, E. O.; SILVA, N. F.; RODRIGUES, F. F. G. et al. Chemical composition and resistance-modifying effect of the essential oil of L. camara Linn. Pharmacognosy Magazine, v.22, p.78-82, 2010b. SPANAMBERG, A.; SANCHES, E. M. C.; SANTURIO, J. M. et al. Mastite micótica em ruminantes causada por leveduras. Ciência Rural, v.39, n.1, p.282-290, 2009. ZOUBIRI, S.; BAALIOUAMER, A. GC and GC/MS analyses of the Algerian Lantana camara leaf essential oil: Effect against Sitophilus granarius adults. Journal of Saudi Chemical Society, 2011. 2458