DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICO DAS INFECÇÕES POR DENGUE, CHIKUNGUNYA E ZIKA VÍRUS Prof. Dra. Edna Maria Vissoci Reiche Imunologia Clínica Diagnóstico Molecular PAC/CCS/UEL
Dengue vírus da dengue Flavivírus RNA vírus Grupo dos Arbovírus (Arthopod borne virus) Sorotipos DEN-1,DEN-2, DEN-3 e DEN-4 Geneticamente e antigenicamente diferentes DEN-2: mais imunogênico Diferentes genótipos para cada sorotipo
Diferenças clínicas entre sorotipos DEN1 maior taxa de morbidade e menor taxa de mortalidade DEN2 maior variabilidade na patogenicidade alguns genótipos parecem produzir pouca ou nenhuma doença outros genótipos podem apresentar doença grave (FHD) DEN 3 Infecções similares ao DEN1 DEN 4 Infecções similares ao DEN2 DEN 5 não identificado no Brasil (epidemia na Malásia)
Organização genômica do vírus da dengue
Dengue: Testes Laboratoriais Específicos Diretos: Isolamento viral Detecção do RNA viral : RT-PCR Pesquisa de antígeno NS1 Específicos Indiretos: Pesquisa de anticorpos IgM e/ou IgG IHA Teste de Neutralização ELISA
Isolamento viral Inoculação em culturas celulares, animais e mosquitos Detecção de antígenos virais (ELISA ou RIE) Detecção do genoma viral (RT-PCR)
Isolamento viral Cultura de células Coleta : Até o quinto dia Amostra: Sangue ou outros fluídos orgânicos, fragmento de órgãos e macerado de mosquito Procedimento: frasco estéril sem anticoagulante Método: Cultura celulares em linhagens C6/36 provenientes do mosquito Aedes Tempo: 6 a 10 dias
Diagnóstico da dengue
Resposta imune na dengue 30 a 60 dias
Teste rápido para Dengue (IgG e IgM) Imunocromatografia (para 4 sorotipos); Sensibilidade e especificidade depende do laboratório Sens: 96-99% Esp: 98%
Diagnóstico laboratorial específico Sorologia - Pesquisa de IgM Coletar no 7º dia de início da doença, IgM persiste por 1 a 2 meses (s/n repetir entre o 11º e 30º dia do início dos sintomas) > 75% de positividade entre 7 a 10 dias > 99% de 10 a 20 dias IgG + no 9º dia na primo-infecção e no 1º dia na re-infecção
Diagnóstico laboratorial específico Detecção do vírus ou antígenos virais: Detecção de antigenemia - NS1 Reação em cadeia de polimerase (RT-PCR) - genoma viral Isolamento viral - define sorotipo Imunohistoquímica - antígenos virais Indicação: casos graves (nos primeiros 3-5 dias de evolução)
Teste rápido Ag NS1 - Imunocromatografia Teste positivo T C
Kit COMBO AgNS1 + IgM + IgG
Dengue: Testes Laboratoriais INESPECÍFICOS Hemograma Hematócrito Plaquetas Albumina Função hepática: AST, ALT Urina I
Dengue Grave (Febre hemorrágica do dengue Síndrome de choque) Hematócrito: aumento súbito de 20% do valor habitual do paciente em 24 horas Plaquetas: < 100.000/mm 3 Hipoproteinemia Elevação das aminotransferases AST e ALT Elevação de uréia Hiponatremia Redução da fração C3 do complemento
Dengue Grave (Febre hemorrágica do dengue Síndrome de choque) CID Redução dos fatores de coagulação V, VII, IX e X Prolongamento do tempo Protrombina Tromboplastina parcial Elevação dos produtos de degradação da fibrina
Prova do Laço (PAS +PAD)/2: manguito insuflado Adulto: 5 mim ( 20 petéquias) Criança: 3 min ( 10 petéquias) Presença de petéquias Área de 2,5 x 2,5 cm
Vírus Chikungunya (CHIKV) RNA vírus Família: Togaviridae (mesmo da rubéola) Gênero: Alphavírus Apenas um subtipo causa a doença
CHKV Diagnóstico laboratorial: sangue ou soro, LCR Métodos diretos: Isolamento do vírus Detecção do RNA viral: RT-PCR Métodos indiretos: Detecção de anticorpos IgM e/ou IgG: ELISA, IHA Aumento de 4 vezes o título acs entre as amostras nas fases aguda (preferencialmente primeiros oito dias de doença) e convalescente, preferencialmente de 15 a 45 dias após o início dos sintomas, ou 10-14 dias após a coleta da amostra na fase aguda Teste de neutralização por redução de placas (PRNT)
FEBRE CHIKUNGUNYA DIAGNÓSTICO LABORATORIAL ISOLAMENTO DO VÍRUS (C636) RT-PCR (fase aguda da doença até D8) DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO: FASE AGUDA: após D5 FASE CONVALESCENTE: 15 45d ELISA: Anticorpos anti-chikv (após D7) INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO (5º - 7º d)
Teste de Neutralização por Redução de Placas de Lise PRNT Plaque Reduction Neutralization Test Método sorológico de quantificação dos anticorpos neutralizantes. Teste referência (padrão) Avaliação resposta vacinal fornece a melhor correlação para proteção da infecção, Mais sensível do que os testes IH e ELISA.
Exames inespecíficos Hemograma Leucopenia Linfocitose Trombocitopenia: rara VHS elevada
Diagnóstico diferencial Outras enfermidades a considerar são: malária leptospirose infecções por outros Alphavírus (ex. vírus Mayaro) artrite pós-infecciosa (Chlamydia, Shigella, Neisseria, febre reumática), artrite reumatoide juvenil, mononucleose infecciosa primo-infecção por HIV. Região Amazônica: a malária e febre Mayaro são endêmicas e fazem parte do diagnóstico diferencial obrigatório.
Zika vírus (ZIKV) É um vírus RNA pertencente à família Flaviviridae e causa quadro clínico semelhante à dengue. O Brasil é um dos países com maior diversidade de flavivírus DEN 1-4, vírus da encefalite japonesa vírus da febre amarela vírus da hepatite C
Serviços de referência no Paraná para atendimento de casos suspeitos de MICROCEFALIA e/ou outras malformações do SNC Serviços de referência para as respectivas macrorregiões de saúde para o encaminhamento das crianças que ao nascimento apresentarem microcefalia. Macrorregional Norte: Hospital Universitário de Londrina (HU UEL); Macrorregional Noroeste: Hospital Universitário de Maringá (HU UEM); Macrorregional Oeste: Hospital Universitário do Oeste do Paraná (HUOP); Macrorregional Leste: Hospital Infantil Waldemar Monastier; Hospital Infantil Pequeno Príncipe.
Esquema proposto para diagnóstico laboratorial do ZIKAV por técnicas de isolamento, RT-PCR e sorologia (IgM/IgG)
Sorologia X PCR Zika Pode ocorrer reação cruzada com outros flavivírus, como o da dengue, febre do Nilo Ocidental e febre amarela
DIAGNÓSTICO LABORATORIAL ZIKA DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO ISOLAMENTO VÍRUS (C636) D1 D5 RT PCR TR DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO NOVOS TESTES SOROLÓGICOS somente em laboratórios de referência Reação cruzada: dengue, febre amarela
Teste rápido ZIKA- V 15 fevereiro 2016 ANVISA concedeu registro de um teste rápido para detecção do zika vírus. Laboratório canadense Biocan Diagnostics Detecta Anticorpos em até 20 minutos
ZIKA-V alterações típicas laboratoriais associadas com a infecção são escassas, leucopenia, trombocitopenia ligeira elevação da LDH sérica, gama-gt ligeira elevação de marcadores de atividade inflamatória proteína C reativa, fibrinogênio e ferritina
Como diferenciar DEN, CHKV e ZIKV DEN: PCR para dengue Teste rápido para Dengue Sorologia para Dengue IgG, IgM e antígeno NS1 CHKV PCR qualitativo para Chikungunya Sorologia para Chikungunya ZIKV PCR para Zika vírus Sorologia para Zika Vírus IgG e IgM quantitativos