HEMOCENTRO DE RIBEIRÃO PRETO CONTROLE DE QUALIDADE INTERNO DE REAGENTES VISÃO DO CLIENTE

HEMOCENTRO DE RIBEIRÃO PRETO CONTROLE DE QUALIDADE INTERNO DE REAGENTES VISÃO DO CLIENTE Rodrigo Spessotto Morais Toledo

Qual a importância do controle da qualidade dos reagentes imunohematológicos? O controle da qualidade de reagentes imunohematológicos é essencial para garantir a reprodutibilidade e consequentemente a confiabilidade dos resultados dos testes utilizados na rotina transfusional. Reprodutibilidade é a capacidade de um teste ou reagente em obter resultados iguais ou próximos, quando analisadas várias alíquotas de uma mesma amostra em uma mesma ou em várias rotinas.

Qual a importância do controle da qualidade dos reagentes imunohematológicos? Apesar da importância, até o ano de 2000 não existia um modelo nacional de controle de qualidade de reagentes imunohematológicos.. Este protocolo é baseado em modelos nacionais (TELELAB/2001 e Novaretti M.C.Z. et al - 2002), internacionais (AABB) e na própria experiência de trabalho. Essa é uma área em construção e sua adaptação à realidade nacional depende da contribuição de todos.

Quais as etapas do controle de qualidade dos reagentes imunohematológicos? O controle de qualidade dos reagentes é realizado em duas etapas: etapa 1 - inspeção visual; e etapa 2 - investigação laboratorial.

Como é feita a inspeção visual para controle de qualidade dos reagentes imunohematológicos? A inspeção visual é feita com base na aparência dos reagentes e nos dados fornecidos no rótulo e na bula Parâmetros para inspeção visual Especificações técnicas correspondentes Anti-soros, soluções, potencializadores e enzimas proteolíticas Reagentes de Hemácias Freqüência da inspeção visual Aparência Ausência de: precipitado, gelatina, partículas ou fungos e não causar hemólise Ausência de hemólise, escurecimento da hemácia ou turvação do líquido sobrenadante Diária

Inspeção de Rótulos Os rótulos dos reagentes devem conter as seguintes informações em língua portuguesa: Nome do produto e marca Nome, endereço e CGC do fabricante Número de registro no Ministério da Saúde Número do lote, data de fabricação e validade Indicação de volume e peso Somente para uso diagnóstico in vitro Nome do responsável técnico, inscrição e sigla da entidade profissional Condições de armazenamento e transporte

Inspeção de Bulas As instruções que acompanham os produtos devem conter as seguintes informações em língua portuguesa: Nome do produto e marca Descrição da finalidade ou uso do produto Natureza do produto Concentração proteica Tipo de conservante Princípio de ação ou aplicação do produto Relação de todos os componentes fornecidos com o produto

Inspeção de Bulas As instruções que acompanham os produtos devem conter as seguintes informações em língua portuguesa: Indicação das condições adequadas de armazenamento e transporte Descrição das precauções e esclarecimentos sobre os riscos com o uso do produto Somente para uso diagnóstico in vitro Cuidados com a amostra Orientações sobre calibração Informações sobre limitações do processo Orientações sobre controle de qualidade interno

Como é feita a investigação laboratorial para controle de qualidade dos reagentes imunohematológicos? A investigação laboratorial é feita com a utilização de painéis de avaliação específicos para cada reagente, montados a partir da seleção de soros e hemácias da rotina do laboratório.

Quais os critérios utilizados para a seleção e armazenamento dos soros e das hemácias para a sua inclusão no painel de avaliação? Reagentes Seleção Armazenamento Hemácias: de coleta recente (inferior a 7 dias) Distribuídas em alíquotas: com células positivas (homozigotas e ressuspensas em solução de heterozigotas) e negativas para o antígeno conservação(cell Stab) e especificado; mantidas sob refrigeração 4 ± que apresentem reprodutibilidade de 2ºC, depois de identificadas resultados em três ensaios com diferentes anti-soros de mesma especificidade. com o perfil antigênico, data e validade de 30 dias. Soros com anticorpo específico; que não apresentem hemólise imune, fenômeno de rouleaux ou prozona e que não provoquem aglutinação espontânea. Distribuídas em alíquotas (500 µl): congelados a - 20 O, depois identificados com o anticorpo específico,.

Quais os parâmetros para a investigação laboratorial no controle de qualidade dos reagentes imunohematológicos? Os parâmetros de controle de qualidade na investigação laboratorial variam de acordo com o tipo de reagente Parâmetros sensibilidade e especificidade intensidade de aglutinação avidez, título e escore Tipos de reagentes todos (anti-soros, hemácias, anti-soro AGH, soluções potencializadoras e enzimas proteolíticas) anti-soros, hemácias anti-soros

Quais os parâmetros para a investigação laboratorial no controle de qualidade dos reagentes imunohematológicos? sensibilidade - capacidade do reagente de aglutinar, reagir ou se unir com o antígeno ou o anticorpo; especificidade - capacidade do reagente de aglutinar especificamente apenas com o antígeno ou o anticorpo correspondente;

Quais os parâmetros para a investigação laboratorial no controle de qualidade dos reagentes imunohematológicos? intensidade de aglutinação - é o grau com que o anticorpo é capaz de aglutinar, reagir ou se unir ao antígeno; potência - para cada soro deverão ser testadas pelo menos 4 hemácias que possuem o antígeno e a intensidade de aglutinação deverá ser maior ou igual a 2+. Se alguma das amostras testadas não reagir como o esperado, outras 4 amostras deverão ser testadas. O teste é considerado satisfatório se não mais que 1 em 8 amostras a reação for menor que 2+;

Quais os parâmetros para a investigação laboratorial no controle de qualidade dos reagentes imunohematológicos? avidez - é determinada pela velocidade e grau e com que o anticorpo é capaz de aglutinar, reagir ou se unir ao antígeno; título - é avaliado através de reações obtidas em diluições seriadas do anti-soro na razão 2 contra hemácias específicas. O título é definido na última diluição que apresenta intensidade de aglutinação de 1+ e corresponde ao valor inverso da mesma;

Quais os parâmetros para a investigação laboratorial no controle de qualidade dos reagentes imunohematológicos? escore: sistema de gradação numérico para hemaglutinação.. A soma dos graus de aglutinação obtidos em uma titulação representa o escore. INTENSIDADE DE AGLUTINAÇÃO ESCORE DE REAÇÃO* 4 (+) cruzes 12 3 (+) cruzes 10 2 (+) cruzes 08 1 (+) cruz 05 (+) fraco 02 Ausência de aglutinação 00 * Proposto por Race e Sanger, modificado por Marsh.

Como avaliar a sensibilidade e a especificidade de anti- soros e reagentes de hemácias? Parâmetros Sensibilidade e Especificidade Especificações técnicas Antisoros Reagentes de hemácias 6 Ausência de hemólise imune, de formação de rouleaux ou fenômeno de prozona. 6 Aglutinação específica com o antígeno ou o anticorpo correspondente Demonstrar reatividade com os anticorpos específicos dirigidos contra os antígenos representados no diagrama durante todo o prazo de validade Frequência Anti-soros - a cada novo lote Reagentes de hemácias - a cada 15 dias com o reagente de triagem de anticorpos irregulares e tipagem reversa e a cada 15 dias com o painel de identificação de anticorpos para verificação de reatividade Rh e Duffy

Quais os paramêtros específicos a verificar no controle de qualidade dos soros para Fenotipagem ABO? Soro Hemácias Reatividade Título Escore Avidez Potência Especificidade Anti-A A1 3+ 256 72 Até 15 1 A2 2+ 128 60 Até 30 5 tipo O A 1 B 3+ 128 60 Até 30 A2B 2+ 64 52 Até 45 3 5 tipo B Anti-B B 3+ 256 72 Até 15 1 5 tipo O A 1 B 3+ 256 72 Até 15 3 5 tipo A Anti-AB A1 3+ 256 72 Até 15 2 A2 2+ 128 60 Até 30 2 A 1 B 3+ 256 72 Até 15 10 tipo O B 3+ 256 72 Até 15 4 Anti-H A2 1+ 4 20 NR NR lectina O 1+ 4 20 NR NR 3 tipo A 1 Anti-A 1 lectina A 1 1+ 4 30 NR NR 1 tipo O 1 tipo A 2

Quais os padrões estabelecidos para o controle da qualidade de reagentes da tipagem Rh? Soro Hemácias Reatividade Título ESCORE Avidez Potência Especificidade Anti-D Anti-D salino Anti-CDE R 0 r 3+ 32 40 Até 30 4 1 O rr 1 A 1 rr R 1 r 3+ 32 40 Até 30 1 r r 1 B rr R 2 r 3+ 32 40 Até 30 1 r r R 0 r 1+ 8 30 NR 4 1 O rr 1 A 1 rr R 1 r 1+ 8 30 NR 1 r r 1 B rr R 2 r 1+ 8 30 NR 1 r r R 1 R 1 1+ 8 30 NR R 1 r 3+ 32 40 Até 30 3 A rr R 2 r 3+ 32 40 Até 30 3 B rr r r 2+ 16 35 Até 60 2 r r 1+ 8 30 Até 60 2 R 0 r NR NR NR NR 2

Quais os padrões estabelecidos para o controle da qualidade de reagentes da tipagem Rh? Soro Anti-C Anti-c Anti-E Hemácias Reatividade Título ESCORE Avidez Potência Especificidade R 1 R 1 1+ 16 30 NR 1 O rr 1 A rr r r 1+ 16 30 NR 4 1 R 2 r 1 B rr R 1 r 1+ 4 20 NR 2 R 1 R 1 rr 1+ 4 20 NR R 1 R 2 NR NR NR NR 4 R 2 R 2 1+ 16 30 NR 1 O rr 1 A rr r r 1+ 16 30 NR 4 1 R 1 r 1 B rr Anti-e R 2 r 1+ 16 30 NR 2 R 2 R 2 rr 1+ 16 30 NR r r NR NR NR NR 4 Anti-C w C w + 1+ 8 30 NR NR 2 C w -

Padrões estabelecidos para o controle da qualidade de anti-soros para fenotipagem de antígenos dos sistemas Kell, Duffy, Kidd,, MNS, Lewis, Lutheran, Diego e P Soro Hemácias Reatividade Título Escore Especificidade Anti-K K+k+ 2+ 8 30 1K- Anti-k K+k+ 2+ 8 30 1k- Anti-Kp a Kp(a+b+) 2+ Puro NR 1Kp(a-) Anti-Kpb Kp(a+b+) 2+ puro NR 1Kp(b-) Anti-Js a Js(a+b+) 2+ Puro NR 1Js(a-) Anti-Js b Js(a+b+) 2+ puro NR 1Js(b-) Anti-Fya Fy(a+b+) 1+ 8 30 1Fy(a-) Anti-Fy b Fy(a+b+) 1+ 4 20 1Fy(b-) Anti-M M+N+ 1+ 4 20 1M- Anti-N M+N+ 1+ 4 20 1N- Anti-S S+s+ 1+ 4 20 1S- Anti-s S+s+ 1+ 8 30 1s- Anti-Le a Le(a+) 1+ 2 NR 1Le(a-) Anti-Leb Le(b+) 1+ 2 NR 1Le(b-) Anti-Lu a Lu(a+) 2+ Puro NR 1Lu(a-) Anti-Lu b Lu(b+) 2+ puro NR 1Lu(b-) Anti-Jk a Jk(a+b+) 1+ 8 30 1Jk(a-) Anti-Jkb Jk(a+b+) 1+ 4 20 1Jk(b-) Anti-Di a Di(a+b+) 1+ 4 20 1Di(a-) Anti-Dib Di(a+b+) 2+ puro NR 1Di(b-) Anti-U U+ 2+ puro NR 1U- Anti-P 1 P 1 + 2+ puro NR 1P 1 - Anti-I I+ 1+ puro NR 1I-

Como avaliar a sensibilidade antiglobulina humana? anti-igg do anti-soro Hemácias e títulos dos anti-soros utilizados e para determinação da atividade anti-igg do soro AGH Hemácias Sensibilizadas com anti-soros comerciais Título dos anti-soros Intensidade da aglutinação com o soro AGH O DCcee Anti-D 128 + O Fy(a+b+) Anti-Fy a Puro + O K+k+ Anti-K 8 ++ O Jk(a+b+) Anti-Jk a 4 + Hemácias de pacientes com anemia hemolítica auto-imune do tipo IgG com intensidade de 2+ podem também ser incluídas e o resultado da intensidade da aglutinação com o soro AGH deve ser correspondente a 2+.

Como fazer o controle da qualidade dos reagentes imunohematológicos utilizados em cartões? cartões com microtubos,, contendo gel totalmente sedimentado, com aspecto homogêneo, e com solução tampão acima da coluna. Não devem apresentar, sinais de ressecamento,, partículas em suspensão e bolhas de ar. Fechamento: lacre de alumínio sem perfurações ou irregularidades.. Ao retirarmos o lacre deveremos observar as marcas impressas das bordas dos orifícios dos microtubos na parte inferior da folha de alumínio, indicando fechamento correto.

Como fazer o controle da qualidade dos reagentes imunohematológicos utilizados em cartões? Volume de gel : O nível do gel em todos os microtubos deve ser de 2/3. Volume do tampão: o nível do tampão deve estar entre 1 a 2 mm acima do gel ou pérola de vidro. Atenção: caso tenha ocorrido inversão do cartão, observada pela diminuição do nível do tampão ou pela presença de gotículas no interior da câmara superior do microtubo,, deve-se centrifugar os cartões, em centrífuga apropriada para subsequente avaliação.

Como fazer o controle da qualidade dos reagentes imunohematológicos utilizados em cartões? Cartão Hemácias Reatividade Especificidade ABO/Rh e ABO/Rh RN AB RhD+ 4+ O RhD- Determinador anti-d R 1 r 4+ 2 rr R 2 r 4+ 1 r r e 1 r r Rh subgrupo+kell R 1 r K+ 4+ K- R 2 r 4+ Rhsubgrupo+C w +Kell R 1 r K+ 4+ C w - R 2 r 4+ K- C w + 4+ Determinador anti-k K+k+ 4+ K- Determinador anti-jk a Jk(a+b+) 4+ Jk(a-) LISS/COOMBS Hemácia com TAD 1+ em tubo >1+ Hemácia com TAD Negativo Determinador Coombs Monoespecífico Utilizar uma hemácia sensibilizada Hemácia com TAD Negativo NaCl/Enzima Realizar uma PAI com 3 soros: anti-e ou anti-c, anti-fy a e soro sem anticorpos Positivo com anti-e ou anti-c, negativo com anti-fy a e soro sem anticorpos NR

Controle da Qualidade dos Reagentes Imunohematológicos Utilizados em Microplacas O controle da qualidade dos reagentes utilizados em microplacas deve seguir as mesmas orientações dadas para aqueles utilizados em técnicas convencionais em tubo. Deve-se avaliar os anticorpos comparativamente pelas reações na microplaca. Os anti-soros selecionados serão aqueles que apresentarem maior diluição com intensidade de 4+ com as células selecionadas.

Resultado da inspeção do soro AGH Hemácias sensibilizadas com antisoros comerciais Título/Grau de aglutinação DIAMED GAMMA ASEM PROTHEMO Títulol/Grau de aglutinação modificados Anti-D 128/+++ + + + (+) 128/+ Anti-Fya 16/+++ 0 0 0 0 PURO/+ Anti-K 8/++ ++ ++ +++ + 8/++ Anti-Jka 8/++ + + + 0 4/+

O reagente que estiver fora das especificações técnicas de qualquer dos parâmetros é reprovado no controle de qualidade. Nesse caso, é preciso registrar o fato e devolver o reagente ao fabricante informando-lhe o motivo da reprovação.