Diagnóstico Laboratorial de Chikungunya Fernanda Montenegro de Carvalho Araújo Dezembro/2014
Introdução A febre do CHIKUNGUNYA é uma doença endêmica nos países do Sudeste da Ásia, África e Oceania e emergente na região das Américas, causada por um alfavirus o chikungunya (CHIK) Sua transmissão ocorre através da picada do mosquito (arbovirose)
Introdução O nome chikungunya significa aquele que se curva e descreve a aparência inclinda das pessoas acometidas pelo vírus.
Características Gerais do Vírus Vírus RNA Envelopado Genoma não segmentado
Estrutura Viral
Genoma Viral
Genótipos Circulantes
Diagnóstico Laboratorial Diagnóstico Virológico Isolamento Viral Reação em cadeia da polimerase (PCR) Diagnóstico Sorológico Anticorpos IgM e IgG
Simplified Depiction of CHIK Human Viremia & Immune Response 10 6 #pfu/ml CHIK viremia IgM ELISA P/N 20 IgG Neutralizing Ab 2-14 to -2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 DAYS POST ONSET
Diagnóstico Laboratorial
Diagnóstico Laboratorial Isolamento Viral Cultura de Células Hela, C6/36, Vero, BHK21, cérebro de camundongo Amostras de soro na fase aguda (< 8 dias) Confirmação Imunofluorescência ou PCR Laboratório NB3
Diagnóstico Laboratorial RT-PCR PCR em tempo real Amostras de soro e sobrenadante de cultura celular
RT-PCR em tempo real
RT-PCR em tempo real
Real time RT-PCR Interpretação dos resultados Controle positivo ser positivo (Ct) Controle negativo ser negativo Validação do Teste Ct < 38 positivo Ct > 38 < 39 inconclusivo Ct > 39 negativo
Diagnóstico Laboratorial Testes sorológicos Ensaio Imunoenzimático de captura (MAC-ELISA) Teste de neutralização por redução de placas (PRNT)
IgM Capture ELISA 1. Coat With Goat anti-human IgM 4 Overnight 2. Add Patient Serum @ 1:400 37 1 Hour 3. Add Antigen 4 Overnight HRP HRP 4. Add HRP anti-group McAb 37 1 Hour
MAC-ELISA para CHIKV realizada no LACEN-CE
Interpretação dos Resultados Sorologia P/N: O.D. soro paciente/o.d. controle negativo P/N < 2 = Negativo P/N 2-3 = Inconclusivo P/N > 3 = Positivo
Interpretação dos Resultados
Reatividade cruzada de AcIgM do CHIK com outros alfavirus CHIK IgM Capture ELISA (P/N) CHIK RR ONN VEE MAY EEE 12.3 1.5 15.3 0.89 1.9 1.2 10.6 1.2 13.9 1.1 1.9 1.3 14.5 1.7 17.3 1.1 3.1 0.89 20.4 0.92 20.7 1.5 7.1 1.8 26.6 4.9 27.4 2.2 1.7 1.5 21.2 1.5 24.7 2.2 1.2 1.6 15.3 1.5 8 1.6 1.9 2.2 31.3 1.5 24.6 1.7 2.9 1.8 22 1.6 15.9 1.8 1.4 1.4 18.8 0.59 13.1 1.2 1.5 1.1 34.3 3.7 22.6 1.6 2.8 9.1
Diagnóstico Laboratorial Confirmação Laboratorial Detecção de Ac IgM em soro e/ou líquor Soro conversão em amostras pareadas Aumento de 4x o título de IgG Detecção do vírus e/ou genoma viral Isolamento viral, qrt-pcr, RT-PCR Vigilância Ambiental Detecção do vírus e/ou genoma viral em vetores ou hospedeiros qrt-pcr, RT-PCR, e outros vírus
Coleta, Armazenamento e Transporte Coleta apropriada, tratamento, armazenamento e transporte das amostras são aspectos essenciais do diagnostico laboratorial. Todas as amostras clinicas devem ser acompanhadas das informações clinicas e epidemiológicas dos pacientes.
Amostras para diagnóstico sorológico e virológico Amostra Soro Coleta de fase aguda e fase de convalescência Fase aguda até 8 dias após o aparecimento dos sintomas Fase convalescência de 10 a 14 dias após a primeira coleta
Outros tipos de amostras para investigação laboratorial Líquor No caso de menigoencefalite Líquido sinovial No caso de artrite com derrame Material de autópsia
Transporte de Amostras O transporte deve ser refrigerado (2 C-8 C) Não congelar o sangue total, pois a hemólise pode interferir no resultado do teste de sorologia As amostras de soro para isolamento viral e o diagnóstico molecular devem ser armazenados congelados
Vigilância Laboratorial
Vigilância Laboratorial de Chikungunya Exames realizados no LACEN-CE Sorologia IgM RT-PCR em tempo real
Vigilância Laboratorial de Chikungunya Dados LACEN-CE
Descentralização da rede de laboratórios do vírus Chikungunya RR AP AM PA MA CE RN PI PB PE AC RO TO AL SE MT BA DF GO MG MS ES SP RJ PR SC RS
Obrigada! fernanda.montenegro@lacen.ce.gov.br