IVD Bacterial Test Standard
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- Bento Amaro Câmara
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1 Instruções de uso IVD Bacterial Test Standard Padrão de calibração contendo perfil típico de proteínas e peptídeos de Escherichia coli DH5 alpha e algumas proteínas adicionais. Para uso em espectrômetro de massas do tipo desorção e ionização a laser auxiliada por matriz e analisador por tempo de vôo (MALDI-TOF-MS). Os produtos CARE são projetados para fornecer a nossos clientes em todo o mundo bens de consumo, acessórios e kits especializados de alta qualidade. A gama de produtos CARE é especificamente otimizada e certificada para uso com todos os sistemas da Bruker Daltonics. Idioma: pt-br 4ª revisão (Janeiro de 2014)
2 1 Uso indicado 2 2 Descrição do produto 2 3 Inspeção, armazenamento e estabilidade Inspeção à chegada Armazenamento à chegada Armazenamento após a alíquota 3 4 Informação de risco e segurança 3 5 Requisitos de software 4 6 IVD BTS procedimento de preparação da amostra Solubilização e preparação de alíquotas IVD BTS Preparação da amostra de IVD BTS na placa de MALDI 5 7 Calibração do espectrômetro de massa Bruker MALDI-TOF usando IVD BTS Pontos de calibração usados Procedimentos de calibração Procedimento de calibração manual Procedimento de calibração automático 9 8 Fabricante 12 1 Uso indicado O IVD Bacterial Test Standard é um produto de diagnóstico in-vitro que se destina à calibração e à otimização dos espectrômetros de massa Bruker MALDI- TOF, assim como ao controle de desempenho da identificação de microorganismos, cultivados a partir de amostras humanas. 2 Descrição do produto O IVD Bacterial Test Standard (referido como "IVD BTS") contém um extrato de Escherichia coli DH5 alpha preparado cuidadosamente e exibe um espectro de massas adquirido com MALDI-TOF com um perfil típico de proteínas e peptídeos. O extrato é fortalecido com duas proteínas adicionais que alargam o limite superior do intervalo de massa abrangido pelo IVD BTS. O intervalo de massa global abrangido pelo IVD BTS é de 3,6 a 17 kda. Cada tubo contém material suficiente para a preparação de aproximadamente 40 spots de placas de MALDI. Este kit é um dispositivo de diagnóstico in-vitro. Informação de encomenda Produto Número de peça IVD Bacterial Test Standard, 5 tubos ou Página 2 de 12 IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso 4ª revisão
3 3 Inspeção, armazenamento e estabilidade 3.1 Inspeção à chegada Verifique a embalagem do IVD BTS à chegada. Se esta se encontrar danificada, verifique os tubos. Se os tubos estiverem danificados, o IVD BTS não deverá ser usado. Proceda à eliminação do IVD BTS (tubos e embalagem) em conformidade com as diretrizes definidas na Folha de Dados de Segurança do material do produto e contate o Departamento de manutenção da Bruker Daltonik GmbH (biotyper.support@bdal.de) para uma substituição. 3.2 Armazenamento à chegada 18 C O IVD BTS é expedido à temperatura ambiente, mas deverá ser armazenado a 18 C ou a uma temperatura inferior imediatamente após a chegada. A data de expiração na embalagem é válida para o IVD BTS fechado quando armazenado a 18 C ou temperatura inferior à chegada. 3.3 Armazenamento após a alíquota O IVD BTS deverá ser solubilizado antes do uso. Recomendamos vivamente que o IVD BTS dissolvido seja fracionado e congelado usando micro tubos de tampa de rosca de 0,5 ml com tampas de rosca. 18 C O IVD BTS congelado e dissolvido poderá ser armazenado durante um período de até 5 meses a 18 C ou temperatura inferior. Com a passagem do tempo, poderão detectar- se produtos de oxidação. Estes produtos de oxidação não influenciam significativamente a qualidade do espectro. 4 Informação de risco e segurança Este produto não se encontra classificado de acordo com a Regulação (CE) Nº 1272/2008 e, por isso, não está classificado de acordo com o Sistema Globalmente Harmonizado de Classificação e Rotulagem de Produtos Químicos (GHS). De acordo com a experiência do fabricante, o produto não possui qualquer efeito nocivo se for usado e manuseado de acordo com as as especificações. No entanto, todos os materiais poderão conter perigos desconhecidos, devendo ser manuseados com cuidado. Para maiores informações, ler o Folha de Dados de Segurança disponível em Outros reagentes podem ser necessários para os procedimentos presentes nesta Instrução de Uso. Leia cuidadosamente a Folha de Dados de Segurança, disponibilizada pelo fornecedor e siga as regulamentações gerais de segurança quando manoseando reagentes químicos. 4ª revisão IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso Página 3 de 12
4 5 Requisitos de software Existem determinadas versões/combinações de software que requerem um patch de software para suportar o IVD BTS (ver Tabela 1). Contate sua Equipe de manutenção local da Bruker Daltonics para obter suporte à instalação. Tabela 1 Requisitos do patch de software Versão do software Versão do Compass É necessário um patch de software? Versão do flexcontrol Não Não Sim Sim Sim Sim Sim Sim 6 IVD BTS procedimento de preparação da amostra Nota O procedimento a seguir não deve ser empregado caso seu protocólo faça uso dos métodos de preparação de amostras do IVD BTS (por exemplo, IVD MALDI Biotyper SOPs). Observações preliminares Uma preparação de amostra pobre irá diminuir a sensibilidade e irá produzir uma resolução baixa e uma reprodutividade de qualidade inferior. A geração de íons pela fonte de MALDI depende de uma proporção ótima de matriz em relação ao substrato. Para melhores resultados, use soluções preparadas recentemente e reagentes químicos com o maior grau de pureza possível (por ex. solventes CHROMASOLV LC-MS). Químicos e materiais necessários IVD Matrix HCCA-portioned (referido como "IVD HCCA") (# ou # ) ou Matrix HCCA- portioned (referido como "HCCA", HCCA = α- ácido ciano- 4- hidrocinâmico) (# ou # ), que deverá ser preparado, conforme descrito nas Instruções de uso relevantes. Solvente padrão (acetonitrile 50%, água 47,5% e ácido trifluoroacético 2,5%), Sigma-Aldrich (# 19182), foi testado pela Bruker Daltonik GmbH e é recomendado para solubilização do IVD BTS. Os micro tubos de tampa de rosca (Sarstedt, # ) com tampas de rosca (Sarstedt, # ). Placa de MALDI do tipo selecionado para seu procedimento. Equipamento e instrumentos necessários Centrífuga, agitador (vortex), pipetas e ponteras Página 4 de 12 IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso 4ª revisão
5 6.1 Solubilização e preparação de alíquotas IVD BTS 1. Adicione 50 µl do solvente padrão à pastilha IVD BTS e dissolva pipetando para cima e para baixo pelos menos 20 vezes à temperatura ambiente controlada. Evite que a solução fique espumosa! 2. Incubação da solução IVD BTS durante um período de 5 minutos à temperatura ambiente e posteriormente pipete para cima e para baixo pelos menos 20 vezes para auxiliar na homogeinização. 3. Centrifugue a rpm durante 2 minutos a temperatura ambiente. 4. Pipete alíquotas de 5 μl do sobrenadante para micro tubos com tampa e feche bem. 5. Armazene as alíquotas a 18 C ou temperatura inferior. 6.2 Preparação da amostra de IVD BTS na placa de MALDI Nota As alíquotas congeladas IVD BTS deverão ser descongeladas a uma temperatura ambiente controlada e misturadas batendo levemente na tampa fechada do micro tubo com o dedo. Os micro tubos de tampa de rosca deverão ser fechados e armazenados a 18 C ou temperatura inferior imediatamente após a preparação dos pontos de amostra do IVD BTS. Cada alíquota de 5 µl contém material suficiente para pelo menos quatro spots de amostra. 1. Deposite 1 µl da solução IVD BTS em qualquer posição da placa de MALDI. 2. Seque o spot contendo a amostra IVD BTS a temperatura ambiente. 3. Cubra o spot contendo a amostra IVD BTS com 1 μl da solução matriz IVD HCCA ou HCCA imediatamente após a secagem. 4. Seque o spot contendo a amostra a temperatura ambiente. Deverá observar-se uma preparação homogênea. 4ª revisão IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso Página 5 de 12
6 7 Calibração do espectrômetro de massa Bruker MALDI-TOF usando IVD BTS 7.1 Pontos de calibração usados Tabela 2 Pontos de calibração com um limite de tolerância de massa de ±300 ppm Proteína Massa de referência (massa média) Intervalo de ±300 ppm RL29 [M+2H] ,8 Da 3636,7 Da 3638,8 Da RS32 [M+H] ,8 Da 5095,3 Da 5098,3 Da RS34 [M+H] ,4 Da 5379,8 Da 5383,0 Da RS33met. [M+H] ,4 Da 6253,5 Da 6257,3 Da RL29 [M+H] ,5 Da 7272,3 Da 7276,7 Da RS19 [M+H] ,1 Da 10297,0 Da 10303,2 Da RNAse A [M+H] ,2 Da 13679,1 Da 13687,3 Da Mioglobina [M+H] ,3 Da 16947,2 Da 16957,4 Da 7.2 Procedimentos de calibração Estão disponíveis os procedimentos de calibração manual e automática. O procedimento manual pode ser usado com todas as versões do flexcontrol, enquanto que para o procedimento automático é necessário o flexcontrol 3.3 ou uma versão mais recente Procedimento de calibração manual 1. Insira o placa MALDI preparado com a amostra IVD BTS no espectrômetro MALDI-TOF. 2. Certifique-se que o flexcontrol está operando. 3. Use o método padrão do flexcontrol MBT_ FC.par (modos Linear e Positivo) para a medição e calibração. 4. Meça manualmente um espectro de soma de 40 disparos de laser a partir de 6 diferentes posiçoes no spot contendo IVD BTS. Em cada posição, clique no botão Start e no botão Add para registrar um total de 240 disparos de laser, exibido como. O nível de energia laser deverá ser otimizado. Opcional: Alternativamente um espectro somatório pode ser adquirido automaticamente por: clique na guia AutoXecute selecione o método autox MBT_AutoX a partir da lista suspensa Method. (Figura 1) clique no botão Run method on current spot. Página 6 de 12 IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso 4ª revisão
7 Figura 1 AutoXecute guia com a seleção do método MBT_AutoX para a medição automática do espectro de soma. Este procedimento mede automaticamente um espectro de soma. 5. Clique no botão da barra de ferramentas Single Buffer para ocultar o único espectro exibido atualmente. Esse procedimento ativa o botão da barra de ferramentas Sum Buffer e exibe o espectro de soma medido. 6. Clique no botão da barra de ferramentas Smooth Spectrum para uniformizar o espectro de soma (Figura 2). Figura 2 Espectro de soma uniformizado de IVD BTS 7. Clique na guia Calibration e selecione o arquivo de calibração MBT_Standard a partir da Mass Control List lista suspensa (Figura 3). Figura 3 Calibrationguia exibindo a Mass Control List 8. Clique no botão Automatic Assign para efetuar a atribuição automática dos picos de calibração corretos. 4ª revisão IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso Página 7 de 12
8 9. Verifique se a atribuição automática dos picos de calibração funcionou corretamente. A lista de picos de calibração deverá exibir que todos os picos se encontram atribuídos e que o desvio máximo Err/ppm não é superior a ±300 ppm em nenhum dos picos (Figura 4). Figura 4 Resultado da atribuição automática dos picos de calibração em que todos os picos estão atribuídos e o desvio máximo Err/ppm é inferior a ±300 ppm em todos os picos Dependendo do resultado, proceda da seguinte forma: Se todos os picos se encontrarem atribuídos e o desvio máximo Err/ppm for inferior a ±300 ppm em todos os picos, tal significa que a atribuição automática dos picos de calibração foi efetuada com êxito. Avance para a etapa (12). Se todos os picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for superior a ±300 ppm em qualquer pico, repita as etapas (4) a (9). Se todos os picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for inferior a ±300 ppm em qualquer pico, avance para a etapa (10). Se alguns picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for superior a ±300 ppm em qualquer pico, repita as etapas (4) a (9). Se nenhum dos picos se encontrar atribuído, avance para a etapa (11). 10. Clique no botão Apply e repita a atribuição de picos automática clicando no botão Automatic Assign. Certifique-se que todos os picos se encontram atribuídos e se o desvio máximo Err/ppm é inferior a ±300 ppm em todos os picos. Se todos os picos se encontrarem atribuídos e o desvio máximo Err/ppm for inferior a ±300 ppm em todos os picos, tal significa que a atribuição automática dos picos de calibração foi efetuada com êxito. Avance para a etapa (12). Se todos os picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for superior a ±300 ppm em qualquer pico, repita as etapas (4) a (9). Página 8 de 12 IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso 4ª revisão
9 11. Efetue a seleção manual do pico a m/z Da clicando do lado esquerdo do pico no espectro. A linha vertical junto ao pico deverá passar de vermelho a verde, se a atribuição de pico for efetuada com êxito (os dados correspondentes são inseridos na lista de picos de calibração). Clique no botão Apply Assign. e repita a atribuição de pico automática clicando no botão Automatic Certifique-se que todos os picos se encontram atribuídos e se o desvio máximo Err/ppm é inferior a ±300 ppm em todos os picos. Se todos os picos se encontrarem atribuídos e o desvio máximo Err/ppm for inferior a ±300 ppm em todos os picos, tal significa que a atribuição automática dos picos de calibração foi efetuada com êxito. Avance para a etapa (12). Se todos os picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for superior a ±300 ppm em qualquer pico, repita as etapas (4) a (9). 12. Depois de todos os picos terem sido atribuídos automaticamente com um desvio máximo Err/ppm inferior a ±300 ppm em todos os picos, clique no botão Apply. 13. Salve os novos valores de calibração no método flexcontrol (MBT_FC.par). Ao clicar no botão da barra de ferramentas Save method as abrirá a caixa de diálogo Save flexcontrol Method As. Clique no botão Save. Confirme a substituição do arquivo (MBT_FC.par) clicando no botão Yes na caixa de diálogo de confirmação (Figura 5). Figura 5 Caixa de diálogo de confirmação na substituição do arquivo do método especificado Procedimento de calibração automático Nota É necessária a versão do flexcontrol 3.3 ou uma versão mais recente para o procedimento de calibração automático. 1. Insira a placa de MALDI preparado com a amostra IVD BTS no espectrômetro de massa MALDI- TOF. 2. Certifique-se que o flexcontrol está operando. 3. Use o método padrão do flexcontrol MBT_FC.par (modos Linear e Positivo) para a medição e calibração. 4ª revisão IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso Página 9 de 12
10 4. Selecione Tools > Method Calibration Parameters ( Figura 6 ) para definir ou verificar as definições de calibração do método flexcontrol. Nota Os parâmetros de definição de calibração são necessários somente na primeira calibração (inicial). Para calibrações posteriores, somente a seleção do método autox (MBT_AutoX) deverá ser verificada. Figura 6 Method Calibration Parameters comando do menu Tools 5. Insira ou verifique as definições dos parâmetros de calibração automática exibidos na Figura 7. Em seguida, clique no botão OK. Figura 7 Caixa de diálogo Edit Auto Calibration Parameters. Página 10 de 12 IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso 4ª revisão
11 6. Na guia Calibration (Figura 3), certifique-se que o parâmetro Peak Assignment Tolerance está definido para o valor máximo de 1000 ppm (Figura 8). Figura 8 Parâmetro Peak Assignment Tolerance 7. Para dar início a um procedimento de calibração, clique no botão Calibrate. É obtido automaticamente um espectro de soma, somando os disparos de laser de 6 x 40 de diferentes posições no spot contendo o IVD BTS e a calibração é automaticamente concluída. Uma caixa de diálogo de informação da calibração abre após uma calibração efetuada com êxito (Figura 9). Clique no botão OK para concluir a calibração. Figura 9 Caixa de diálogo de informação da calibração 8. Se a calibração falhou, repita o procedimento de calibração automático, etapas (4) a (7) ou siga o procedimento de calibração manual descrito na seção ª revisão IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso Página 11 de 12
12 8 Fabricante Bruker Daltonik GmbH Fahrenheitstraße Bremen Alemanha Suporte biotyper.support@bdal.de Telefone: +49 (421) Fax: +49 (421) Informações de Vendas care@bdal.de Telefone: +49 (421) Website: # ou Descriptions and specifications supersede all previous information and are subject to change without notice. Copyright 2014 Bruker Daltonik GmbH Página 12 de 12 IVD Bacterial Test Standard Instruções de uso 4ª revisão
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