Código: MET/LEI/PL/011 - V.4 Fase: Vigente Aprovado em: 30/07/ Objetivos e alcance
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- Luiz Eduardo Antônio Guterres
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1 1.0 Objetivos e alcance Este método objetiva detectar e quantificar resíduos de mercúrio em peixes captura e cultivo empregando a Decomposição Térmica e Amalgamação Acoplada à Espectrometria de Absorção Atômica (TDA-AAS). O presente método trabalha dentro da faixa de 21,9 a 1750 µg/kg para análise de Hg em peixes. 2.0 Fundamentos A técnica de Decomposição Térmica e Amalgamação Acoplada à Espectrometria de Absorção Atômica, mais conhecida como Análise Direta de Mercúrio (DMA) consiste em um sistema integrado de combustão da amostra, conversão das espécies de Hg em Hgº, através da passagem destas por um catalisador, seguido por amalgamação do Hg 0 com ouro e posterior leitura em um espectrômetro de absorção atômica. A técnica é do tipo de análise direta e como tal não é necessário etapas de extração do analito e/ou digestão das amostras. Assim, o método consistiu em pesar cerca de 0,1000 ± 0,0010 g de amostra, previamente moída e homogeneizada, em barquinhas de níquel ou quartzo e, em seguida as amostras são levadas para leitura no equipamento. 3.0 Reagentes, padrões, materiais e insumos 3.1 Reagentes - Ácido Nítrico (HNO 3 ) 65% ultrapuro ou purificado em purificador subboiling; - Água ultrapura (Resistividade > 18,2 MΩ.cm); 3.2 Padrões - Solução padrão estoque de Mercúrio (Hg) para ICP ou AAS (1000 mg/l); 3.3 Materiais - Luva cirúrgica; - Espátula de aço inoxidável; Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 1/12
2 - Ponteiras de micropipetas; - Balões volumétricos calibrados de vidro de 25,00 ml; - Barcas de níquel ou de quartzo para pesagem de amostras; - Amostra branca de peixe para Hg; 3.4 Insumos - Gás oxigênio analítico 4.0 pureza mínima de 99,99%; 4.0 Equipamentos - Analisador Direto de Mercúrio DMA 80, Milestone; - Purificador de água Milli-q Element; - Purificador de ácidos Milestone DuoPur; - Balança analítica de pelo menos quatro casas decimais com resolução de pelo menos 1 mg; - Micropipetas de μl e de μl; - Freezer. 5.0 Precauções analíticas - Os balões utilizados no preparo de todas as soluções padrões devem ser de vidro; - A água utilizada deve ser ultrapura com resistividade maior que 18,2 MΩ.cm; - Todo o material utilizado, com exceção das ponteiras novas, deve ser lavado com detergente neutro, enxaguadas com água destilada, imersas em banho de ácido clorídrico 2% v/v no mínimo por 4 horas e enxaguadas no mínimo três vezes com água ultrapura (Resistividade > 18,2 MΩ.cm) antes do uso. Lavagens que incluam mais de um banho ácido também podem ser utilizadas; - Utilizar balanças com resolução de pelo menos 1 mg; - Antes do uso do equipamento verificar se o fluxo de saída de oxigênio está regulado entre 6 e 8 L/min e se a pressão da linha marcada no manômetro dentro do equipamento está em 3,1 psi. - Realizar limpeza das células de leitura (BV) até obtenção de Abs <0,010 após adição da solução padrão de adição de Hg de 100 g/l (item 6.2.2) e de 500 g/l (item 6.2.3) na verificação das curvas Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 2/12
3 de calibração e na amostra de recuperação. 6.0 Procedimentos Durante a análise, preencher o formulário FOR/LEI/PL/061 com todas as informações pertinentes, permitindo a rastreabilidade dos dados da análise como datas, identificação das amostras, massas, reagentes, padrões, equipamentos, condição de leitura e analistas. O equipamento DMA-80 deve ser operado de acordo com a IT/LEI/PL/ Preparo de soluções reagentes As soluções reagentes devem ser preparadas conforme descrito abaixo e identificadas, armazenadas e registradas conforme descrito no POP/LEI/PL/006. As soluções reagentes têm validade de 6 meses a partir da data de seu preparo (Nota técnica nº 016/2011 LEI/LANAGRO/MG). As soluções podem ser preparadas em quantidades diferentes das descritas a seguir em função do volume de análises, mantendo as proporções Ácido nítrico 10% v/v Medir em uma proveta graduada de 1000 ml, 100 ml de ácido nítrico ultrapuro ou purificado em purificador sub-ebulição, acrescentar água ultrapura (R > 18,2 MΩ.cm) até 1000 ml. 6.2 Preparo de soluções Padrões As soluções padrões são de uso imediato e devem ser preparadas, identificadas, armazenadas e registradas conforme descrito no POP/LEI/PL/004. As soluções acidificadas com HNO 3 tem validade de 6 meses (Nota técnica nº 016/2011 LEI/LANAGRO/MG) Solução padrão intermediária de Hg (15,625 mg/l) Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 3/12
4 Pipetar exatamente 391 μl da solução padrão estoque de mercúrio de 1000 mg/l e transferir para balão volumétrico calibrado de 25,00 ml, adicionar 7,5 ml de solução 10% v/v de HNO 3 (item 6.1.1) e completar o volume com água ultrapura (R >18,2 MΩ.cm) Solução padrão de adição de Hg (100 g/l) Pipetar exatamente 160 μl da Solução padrão intermediária de Hg (15,625 mg/l) (item 6.2.1), transferir para balão volumétrico calibrado de 25,00, adicionar 7,5 ml de solução 10% v/v de HNO 3 (item 6.1.1) e completar o volume com água ultrapura (R >18,2 MΩ.cm) Solução padrão adição de Hg (500 g/l) Pipetar exatamente 800 μl da Solução padrão intermediária de Hg (15,625 mg/l) (item 6.2.1), transferir para balão volumétrico calibrado de 25,00, adicionar 7,5 ml de solução 10% v/v de HNO 3 (item 6.1.1) e completar o volume com água ultrapura (R >18,2 MΩ.cm). 6.3 Curva de calibração Criar o arquivo para a curva de calibração Clicar em administrador Digitar a senha Clicar em OK Clicar em DMA-80 Measurement e depois em Calibr. Clicar no ícone e salvar a curva de calibração criada (ainda em branco) clicando no ícone. Cadastrar os pontos das curvas de calibração em Measurement, Result, conforme quadro 1 abaixo. Deixar marcado o ícone. Após adicionar a primeira amostra ir em Links e selecionar na Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 4/12
5 coluna Cal file o arquivo de calibração salvo anteriormente, e na coluna Method o método Peixe DMA. Clicar no ícone para adicionar pontos na curva de calibração Pos O ajuste de cada curva é quadrático ( square ). Quadro 1 Cadastro dos pontos da curva de calibração no software do equipamento DMA-80 Sample name Weight (g) State Height Hg (ng) µg/kg Calfactor 1 7 0,0700 Calibrate ,0700 Calibrate ,1400 Calibrate ,1400 Calibrate ,2100 Calibrate ,2100 Calibrate ,1000 Calibrate ,100 Calibrate ,1500 Calibrate ,1500 Calibrate ,2000 Calibrate ,2000 Calibrate ,2500 Calibrate ,2500 Calibrate ,3000 Calibrate ,3000 Calibrate ,3500 Calibrate ,3500 Calibrate Obs.: Este quadro representa uma janela do software do equipamento que é usada para o cadastro dos pontos da curva de calibração a serem lidos. * As células das colunas Height e Group ficam em branco e inativas no momento do cadastro dos pontos da curva de calibração, sendo preenchidas automaticamente após a análise. Group Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 5/12
6 Caso o método peixe DMA não esteja salvo na memória do equipamento, criar um novo método e ajustar o equipamento para as seguintes configurações: programa de aquecimento (tabela 1), Max Start Temperature, 250ºC; Purge Time, 60s; Amagalmator Heating Time, 12s e Signal Recording Time, 40s e fluxo de saída de oxigênio de 6 L/min. Tabela 1 Programa de aquecimento para amostras de peixe. Etapa Temperatura (ºC) Tempo (s) Rodando a curva de calibração Antes de realizar qualquer leitura, ligar o oxigênio e ajustar o fluxo de saída e o manômetro interno Fazer uma limpeza prévia do sistema. Para isto ir em System e clicar em localizado abaixo do desenho do forno e após a limpeza clicar no ícone localizado abaixo do desenho do amalgamador. Avaliar a eficácia da limpeza clicando em eãs e Signal. O valor da altura do pico de absorvância aparecerá na tela. Repetir este procedimento até que a o valor de absorbância encontrado seja menor que 0,010. Rodar a curva de calibração. Para isto, clicar em Meas e Result. Clicar no ponto que será lido. Pipetar os volumes citados na coluna Weight (g) do quadro 1 (a massa citada nesta coluna equivale ao volume em μl da solução padrão correspondente). Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 6/12
7 Desativar o ícone seqüencial e clicar em. Aguardar a leitura e salvar a calibração. Clicar em system e aguardar a temperatura do forno atingir uma temperatura abaixo de 250ºC antes de adicionar o volume para o próximo ponto da curva de calibração. 6.4 Detecção e quantificação Pesar em barquinhas de níquel ou de quartzo cerca de 0,1000 ± 0,0010 g de amostra previamente moída e homogeneizada de peixe. Pesar também duas alíquotas nesta mesma massa de amostra branca, uma alíquota será utilizada como branco e a outra será utilizada como amostra fortificada para estimar a recuperação No software do equipamento, entrar com o usuário User (senha 123), na tela na tela Meas, Result e deixar o ícone do seqüencial ativado e cadastrar as amostras. Salvar o arquivo. Cadastrar as amostras na ordem do quadro 2 a seguir. Após adicionar a primeira amostra ir em Links e selecionar na coluna Cal file o arquivo de calibração salvo anteriormente, e na coluna Method o método Peixe DMA. Quadro 2 Cadastro de amostras no software do equipamento DMA-80 Pos Sample name Weight (g) State Height Hg (ng) µg/kg Cal-factor Group ,140 Reference ,200 Reference Br 0,1000 normal * R+ 0,1000 normal Amostra 1 normal Amostra 2 normal Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 7/12
8 7... normal *O nome da amostra branca bem como a da R+ poderá ser precedido pela identificação da amostra branca utilizada Adicionalmente cadastrar duas amostras que servirão para verificar a calibração. Estas amostras deverão ser cadastradas como reference na coluna state. O valor de concentração para estas amostras deve ser de 14 e 100 ng para as curva baixa e alta, respectivamente A amostra de verificação da calibração de nome 14 deverá ser uma barquinha vazia adicionada de 140 µl da solução padrão de adição de Hg (100 g/l) (item 6.2.2) A amostra de verificação da calibração de nome 100 deverá ser uma barquinha vazia adicionada de 200 µl da solução padrão de adição de Hg (500 g/l) (item 6.2.3) A recuperação deverá ser estimada em um dos três níveis conforme descrito no POP/LEI/PL/009. Verificar na PLN/LEI/PL/011 o nível estudado na batelada anterior e adotar um nível diferente para a análise em curso. As alíquotas devem ser adicionadas em acordo com o Quadro 3. As alíquotas devem ser pipetadas das soluções padrão de adição de Hg (500 µg/l) (item ). Quadro 3: Valores das alíquotas para adição na recuperação para os diferentes níveis Nível Inferior Nível Intermediário Nível Superior Matriz Analito Concentração Alíquota Concentração Alíquota Concentração Alíquota (µg/kg) (µl) (µg/kg) (µl) (µg/kg) (µl) Peixes Cultivo Peixes Captura Hg 250, , , , , , Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 8/12
9 Adicionar os volumes citados anteriormente em 6.4.4, e sempre imediatamente antes de cada leitura Após a leitura dos padrões de referência e das recuperações, ativar o ícone do seqüencial e prosseguir com a leitura das amostras. 6.5 Pontos críticos Anotar o peso exato da amostra em torno de 0,1000 ± 0,0010 g; Adição da solução padrão de adição de Hg de (500 g/l) (item 6.2.3) na amostra de recuperação; Cuidados no preparo das soluções padrões; Adição dos volumes para a curva de calibração, padrões de referência para verificação da calibração e recuperações imediatamente antes da leitura. 7.0 Resultados 7.1 Critérios de aceitabilidade dos resultados Coeficiente de determinação (R 2 ) da curva de calibração: > 0,995; Resíduos da curva de calibração não devem ser maiores que 10% do valor medido. Estes resultados podem ser observados diretamente no software do equipamento na tela de calibration na coluna ΔΕ (%) Para aceitar a calibração, após a leitura, é necessário que o cal-factor das amostras de referência para testar a calibração esteja entre 0,9000 e 1,1000. Uma nova curva de calibração deverá ser construída se as amostras de referência (item 6.4.2) estiverem fora da faixa de aceitação. Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 9/12
10 A porcentagem de recuperação aceitável para o nível de contaminação da alíquota de recuperação é de 80 a 110%. 7.2 Cálculo dos resultados Os resultados são calculados no próprio software do equipamento, porém há a necessidade de se lançar estes resultados na planilha PLN/LEI/PL/011, para se calcular a concentração corrigida pela recuperação e a incerteza expandida de medição associada à cada análise. De acordo com o POP/LEI/PL/002 os resultados são calculados mediante a recuperação do dia através da planilha PLN/LEI/PL/011 e lançados no FOR/LEI/PL/014, em seguida são lançados no sistema eletrônico SIGLA (Sistema de Informações Gerenciais para Laboratório de resíduos e contaminantes em Alimentos) conforme IS/LEI/PL/017. No SIGLA não há a possibilidade de se lançar resultados de incerteza, estas serão apenas calculadas e arquivadas. Os parâmetros de desempenho do método constantes no REL/LEI/PL/007 Validação de método de análise de Hg em peixes por TDA-AAS, estão resumidos no Quadro 4 e os valores de LD, LQ e incerteza de reprodutibilidade do método no Quadro 5. Quadro 4 Parâmetros de desempenho para método de análise de Hg em peixes por DMA Matriz Analito 0,14 x LMR 0,5 x LMR 1,0 x LMR 1,5 x LMR RSD% r 2,0 1,4 0,9 1,4 RSD% R 5,6 4,6 3,0 3,0 Peixes Hg HORRAT r 0,094 0,078 0,059 0,090 HORRAT R 0,260 0,261 0,188 0,200 Recuperação (%) 95 ± 5 96 ± 4 98 ± 3 97 ± 3 Quadro 5 Limites de detecção e quantificação e incerteza de reprodutibilidade do método de análise de Hg em peixes por DMA Espécie LMR (µg/kg) Limite de Detecção (µg/kg) Limite de Quantificação (µg/kg) Incerteza de reprodutibilidade (µg/kg) Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 10/12
11 Peixes cultivo ,4 5,4 21,9 Peixes captura ,4 8.0 Responsabilidades Cabe ao responsável pelo Laboratório de Elementos Inorgânicos LANAGRO/MG assegurar: A elaboração, emissão, distribuição de cópias e, quando necessário, a revisão deste MET O devido treinamento para execução do referido MET; A execução deste MET é de responsabilidade do analista, qualquer alteração ocorrida durante a análise, deve ser registrada a fim de garantir a rastreabilidade; A responsabilidade por autorizar desvios no método cabe ao responsável técnico ou seu substituto; A responsabilidade pela assinatura dos certificados oficiais de análise é do analista que realizou a análise e do signatário autorizado. Quando necessário, assinaturas de superiores hierárquicos poderão ser colhidas. 9.0 Referências Nota técnica nº 016/2011 LEI/LANAGRO/MG Revisão bibliográfica Estabilidade de soluções reagentes e padrões. REL/LEI/PL/007 Validação de método de análise de Hg em peixes por TDA-AAS Documentos referenciados IS/LEI/PL/017-Instrução operacional de registro e inclusão de resultados no SIGLA IT/LEI/PL/031-Operação do Analisador Direto de Mercúrio - DMA-80 POP/LEI/PL/002-Controle de amostras e emissão de resultados POP/LEI/PL/004-Controle de padrões e soluções padrão POP/LEI/PL/006-Controle de reagentes e soluções reagentes POP/LEI/PL/009-Garantia da qualidade de resultados de análise 11.0 Anexos referenciados Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 11/12
12 FOR/LEI/PL/014-Registros de Amostras e Resultados de Análises do PNCR - Grupo 400 FOR/LEI/PL/061-Dados brutos de análise de Hg por DMA PLN/LEI/PL/011-Cálculo de concentrações Hg 12.0 Informações de registro Cálculo de concentrações Hg (PLN/LEI/PL/011) Dados brutos de análise de Hg por DMA (FOR/LEI/PL/061) Registro de Amostras e Resultados de Análises do PNCR - Grupo 400 (FOR/LEI/PL/014) 13.0 Arquivos anexados Não aplicável 14.0 Controle de alterações Item Alteração Reformulado. Reformulado com inclusão de item que descreve a preparação das amostras para estimativa de recuperação Inclusão do Quadro Alteração dos números dos subtópicos para 6.5.1; 6.5.2; e Quadro 1 alterado para Quadro 4 Quadro 2 alterado para Quadro Acrescentado A elaboração, emissão, distribuição de cópias e, quando necessário, a revisão deste MET Impresso por: Natanael Viana Lourenço Cópia não controlada Página 12/12
Código: MET/LEI/PL/015 - V.3 Fase: Vigente Aprovado em: 30/07/2015
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