HAMMERSMITH: UMA ALTERNATIVA NO PROCESSAMENTO DE BIÓPSIAS OSTEOMEDULARES
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- Moisés Estrela
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1 Patológica HAMMERSMITH: UMA ALTERNATIVA NO PROCESSAMENTO DE BIÓPSIAS OSTEOMEDULARES Katia Reis; Rute Matos; Ana Rodrigues; Nicole Inácio; Ana Lourenço; Sofia Loureiro dos Santos Espinho, Maio 2011
2 Introdução Processamento histológico de biópsias osteomedulares (BO) é fundamental no diagnóstico de Hematopatologia Necessário controlar Fixação/Descalcificação para manter preservação Protocolos Formol/RDO são comummente utilizados Artefactos processuais variados Detalhe Nuclear Basofilia Preservação
3 Introdução (Cont.) Protocolo Hammersmith surge como alternativa com resultados positivos NARESH, K. N. (2008) Questão de Investigação: Qual o protocolo de fixação/descalcificação (Formol/RDO ou Hammersmith) que permite uma melhor preservação tecidular em biópsias osteomedulares? Objectivo Geral: Comparar a qualidade da preservação tecidular e os artefactos processuais em BO com os protocolos Formol/RDO e Hammersmith.
4 Introdução (Cont.) Objectivos Específicos: Verificar se existem diferenças estatisticamente significativas entre os protocolos Formol/RDO e Hammersmith em BO na Coloração H&E Verificar se existem diferenças estatisticamente significativas entre os protocolos Formol/RDO e Hammersmith em BO com técnicas de Imunohistoquímica. Verificar se existem diferenças estatisticamente significativas entre os protocolos Formol/RDO e Hammersmith em BO com técnicas de Histoquímica.
5 Revisão da Literatura Biópsias Osteomedulares: Tecido ósseo esponjoso Crista ilíaca posterior/anterior Componente calcificada Fixação + Descalcificação Trabéculas, Osteoclastos, Osteoblastos, Células progenitoras, etc. Fixadores: Formol Bouin Hollande Solução Zenker Descalcificadores: Ác. Fórmico Ác. Acético RDO MORAL, R.G. (1993); BAIN, B.J. (2010); CARSON,F.L. (1997)
6 Revisão da Literatura (Cont.) Protocolo Hammersmith Fixador AZF (24 horas) Cloreto de Zinco 12,5g Formaldeído a 40%.150 ml Ácido Acético Glacial 7,5 ml Água Destilada..perfazer até 1000 ml Descalcificador Gooding & Stewart (6 horas) Formaldeído a 40%...50 ml Ácido Fórmico a 100% ml Água Destilada ml NARESH, K.N, (2008)
7 Metodologia Tipo de Estudo Experimental, ou de Nível IV, quantitativo ( ) estudar se o efeito esperado de uma variável independente se produz numa situação controlada. Fortin, 2009 Amostragem Amostragem Não-Probabilística por Selecção Racional Variáveis: Independente: Protocolo de Fixação/Descalcificação Dependente: Preservação tecidular das BO
8 Metodologia (Cont.) Variáveis Estranhas: Tempo de fixação (Formol/RDO); Amostras diferentes (pacientes e patologias distintos); Condições de processamento e inclusão; Subjectividade dos observadores; Problemas de corte RDO no bloco
9 Metodologia (Cont.) Material e Métodos 66 Biópsia Ósseas (BO) 33 BO processadas com Formol Neutro Tamponado 10% + RDO Codificação 33 BO processadas com AZF + Gooding&Stewart (Hammersmith) Formol Neutro Tamponado a 10% 24 horas AZF 24 horas RDO 5 a 15 minutos Gooding & Stewart 6 horas Processamento histológico do SAP do HFF Inclusão e Corte
10 Metodologia (Cont.) Material e Métodos (Cont.) Protocolos do SAP Hematoxilina & Eosina Gordon & Sweet CD3 CD20 CD34 CD61 Glicoforina-A Mieloperoxidase TdT Observação Microscópica 2 observadores (Técnico e Médico) Blind Test Avaliação
11 Metodologia (Cont.) Material e Métodos (Cont.) Avaliação Utilizou-se uma escala de avaliação, com diferentes factores de ponderação Hematoxilina & Eosina a) Artefactos de Corte (0 a 3) b) Detalhe nuclear (0 a 3) c) Detalhe Citoplasmático (0 a 3) d) Diferenciação coloração (0 a 3) HQM e IHQ a) Preservação Tecidular (0 a 3) b) Marcação Específica (0 a 3) c) Intensidade (0 a 3) d) Contraste (0 a 3) e) Fundo (0 a 3)
12 Metodologia (Cont.) Tratamento de Dados: Teste não paramétrico Mann-Whitney (α=0,05), software SPSS versão 17 Score H&E = a + (2xb) + c + d (0 a 15) Score IHQ/HQM = a + (2xb) + (2xc) + d + e (0 a 21) Score Final = Score H&E + Score HQM+ Score IHQ
13 Resultados Score mediando Formol/RDO Score mediano Hammersmith H & E Gordon & Sweet CD CD CD CD Glicoforina-A Mieloperoxidase TdT p = 0,000 p = 0,000 p = 0,41 p = 0,004 p = 0,084 p = 0,009 p = 0,000 p = 0,000 p = 0,000 Existem diferenças estatisticamente significativas em todas as colorações/marcações excepto o CD3 e CD34
14 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) Hematoxilina & Eosina Score = 4,5 Score = 13.5 Score = 6.0 Score = 15.0
15 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) Gordon & Sweet Score = 11.0 Score = 21.0 Obj: 20x Score = 14.5 Score = 21.0
16 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) CD3 Score = 12,0 Score = 20.0 Score = 12.0 Score = 20.0
17 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) CD20 Score = 12,0 Obj: 20x Score = 20.0 Obj: 20x Score = 14.0 Score = 20.0
18 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) CD34 Score = 4,0 Score = 20.0 Obj: 20x Score = 7.0 Score = 21.0
19 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) CD61 Score = 9,0 Obj: 20x Score = 19.0 Score = 9.0 Score = 20.0
20 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) Glicoforina - A Score = 12,0 Score = 20.0 Score = 15.0 Score = 21.0
21 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) Mieloperoxidase Score = 11,0 Obj: 20x Score = 21.0 Score = 14.0 Obj: 20x Score = 21.0 Obj: 20x
22 Hammersmith Formol/RDO Resultados (Cont.) TdT Score = 4,0 Score = 21.0 Score = 15.0 Obj: 20x Score = 21.0 Obj: 20x
23 Discussão/Conclusão O Hammersmith obteve melhores scores medianos em todas as colorações e imunomarcações Existem diferenças estatisticamente significativas em todas as colorações e imunomarcações, excepto o CD3 e CD34 Variáveis estranhas? Obtiveram-se melhores resultados com o protocolo Hammersmith do que com o protocolo Formol/RDO, tanto na preservação tecidular como na minimização de artefactos.
24 Discussão/Conclusão (Cont.) O Hammersmith poderá ser uma boa alternativa aos protocolos habituais para BO Sugestão para Estudos futuros : Estudar amostras do mesmo paciente para cada protocolo, mantendo as mesmas condições de processamento, inclusão e corte; Avaliar a dificuldade de corte.
25 Referências Bibliográficas Azevedo, M. (2004). Teses, Relatórios e Trabalhos Escolares (4ª ed.). Lisboa: Universidade Católica Editora Bain,B.J. e Clark,D.M. (2010). Bone Marrow Pathology (4ª ed.). Oxford: Wiley Blackwell Carson,F.L. (1997). Histotechnology: A self-instructional text (2ª ed.). Chicago: ASCP Fortin, M. F. (2009). O Processo de Investigação: da Concepção à Realização (2ª ed.). Loures: Lusociência Moral,R.G. (1993). Laboratorio de Anatomia Patológica (1ª ed.). Madrid: McGraw-Hill Naresh,K. N. et al (2006). Optimal processing of bone marrow trephine biopsy: the Hammersmith Protocol. J.Clin. Pathol. 2006;59; Recuperado em 2009, Dezembro 16, de
26 Agradecimentos A todo o Serviço de Anatomia Patológica do Hospital Dr. Prof. Fernando Fonseca pelo apoio e colaboração Pela Liberdade de Participação
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