RESUMO. Palavras-chave pesquisa; hemoparasitose; cães. ABSTRACT

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1 DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE CÃO COINFECTADO COM Ehrlichia canis, Hepatozoon spp E Anaplasma platys ATENDIDO NO HOSPITAL VETERINÁRIO UNIVERSITÁRIO DA UFPI ARAUJO, L. L 1 ; CARDOSO, J.DE.F. S 2 ; OLIVEIRA, W.A.DE 3 ; ARAÚJO, E.K. D 1 ; VIEIRA, R.M 1 ; SANTOS, A. S 4 ; SOUSA, D.T.DE 1 ; ALVES, GALENO 1, L.S; PRADO, A.C.DO 5. Médicos(a) veterinários(a) residentes do Hospital Veterinário Universitário (HVU) da Universidade Federal do Piauí-UFPI 1 Prof.Dr.(a) do departamento de clínica e cirurgia do setor de patologia clínica veterinária da UFPI 2 Médico Veterinário do Hospital Veterinário Universitário (HVU) da Universidade Federal do Piauí-UFPI 3 Médica Veterinária Aprimoranda do Hospital Veterinário Universitário (HVU) da Universidade Federal do Piauí- UFPI 4 Técnico do laboratório de patologia clínica veterinária do Hospital Veterinário Universitário (HVU) da Universidade Federal do Piauí-UFPI 5 RESUMO Introdução: As doenças transmitidas por carrapato cada vez mai crescem no cotidiano na medicina veterinária, principalmente por ser o mesmo vetor o principal transmissor, os objetivos desse trabalho foram verificar os métodos de diagnóstico em um cão coinfectado com Ehrlichia canis, Anaplasma platys e hepatozoon spp; analisar quanto à especificidade e sensibilidade dos métodos diagnóstico encontrados em cada método e indicar quais métodos são mais precisos para o auxílio na clínica médica e posteriormente no tratamento. Metodologia: foram utilizados testes rápidos Alere para detecção de Ac Ehrlichia canis, confecção de esfregaço e capa leucocitária para pesquisa de hemoparasita e PCR real times para detecção da Ehrlichia canis em um cão apresentando sintomatologia clínica de hemoparasitose. Resultados e discussões: no teste rápido foi positivo para Ehrlichia canis, na pesquisa de hemoparasitas foram detectados mórula de Ehrlichia canis, gametócitos de Hepatozoon spp, e Anaplasma platys em plaqueta, na análise de liquido cavitário foram visualizados mórula de Ehrlichia canis em macrófagos, a amostra de sangue total foi realizado PCR real times e positivo para o mesmo. As hemoparasitoses pesquisadas tem grande prevalência na região, e os métodos utilizados possuem alta sensibilidade, a visualização das estruturas em esfregaço possuem baixa sensibilidade e muitas vezes um falso negativo, e não deve se considerar o resultado baseado apenas nesse método. Os testes rápidos coloboram pela rapidez dos resultados, porém dependendo da fase da doença pode não haver detecção, o método padrão ouro utilizado para detecção foi PCR quantitativo real times. Conclusões: Diante dos resultados obtidos, os métodos utilizados tem uma alta especificidade, porém a visualização direta das estruturas depende da fase da doença para detecção das estruturas, o teste rápido e PCR representou alta sensibilidade e especificidade independente da fase da doença e serve como auxilio para acompanhamento e tratamento. Palavras-chave pesquisa; hemoparasitose; cães. ABSTRACT

2 The aim of this work was to verify the diagnostic methods in a dog co-infected with Ehrlichia canis, Anaplasma platys and hepatozoon spp. ; analyze the specificity and sensitivity of the diagnostic methods found in each method and indicate which methods are more accurate for the medical clinic and later the treatment. Methods: Alere rapid tests were used to detect Ac Ehrlichia canis, smear preparation and leukocyte cover for hemoparasite screening and real PCR for detection of Ehrlichia canis in a dog presenting clinical symptoms of hemoparasitosis. Results and discussion: Ehrlichia canis was positive for Ehrlichia canis, Ehrlichia canis morula, Hepatozoon spp gametocytes, and Anaplasma platys on platelet were detected in Ehrlichia canis. In the analysis of cavity fluid Ehrlichia canis morula was visualized in macrophages, whole blood sample was performed real and positive PCR times for the same. The hemoparasitoses studied have a high prevalence in the region, and the methods used have high sensitivity, the visualization of smear structures have low sensitivity and often a false negative, and the result should not be considered based solely on this method. Rapid tests support the rapidity of the results, however depending on the stage of the disease there may be no detection, the gold standard method used for detection was real quantitative PCR times. Conclusions: In view of the obtained results, the methods used have a high specificity, but the direct visualization of the structures depends on the stage of the disease to detect the structures, the rapid test and PCR represented high sensitivity and specificity independent of the phase of the disease and serves as an aid for follow-up and treatment. Keywords - search; hemoparasitosis; dogs. INTRODUÇÃO As hemoparasitose são comuns na medicina veterinária principalmente nos cães, sendo que além da grande predileção e prevalência devido o vetor e principal transmissor é apenas um, fazendo com cada vez mais casos ocorram e o diagnóstico clínico laboratorial ocorra. O carrapato marrom do cão Rhipicephalus sanguineus é considerado um importante vetor de Ehrlichia spp., Babesia spp., Anaplasma spp. e Hepatozoon spp., sendo a babesiose e a ehrlichiose caninas doenças endêmicas de grande importância veterinária em todo o Brasil. As doenças transmitidas por carrapato são de bastante incidência, e apresenta sinais clínicos característicos, achados hematológicos e bioquímicos, além de outros meios que apresentam alta especificidade como alta sensibilidade no caso diagnóstico padrão ouro a reação em cadeia da polimerase (PCR). No Brasil os

3 principais hemoparasitos de cães são Babesia canis (Piana; Galli-Valerio, 1985), Ehrlichia canis (Donatien; Lestoquard, 1935), Anaplasma platys (Harvey et al, 1978), Hepatozoon canis (James, 1905) e Mycoplasma haemocanis (Kikuth, 1928). A transmissão destes parasitos ocorre principalmente pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus (Latreille,1806), sendo este o principal carrapato de cães de zona urbana (RIBEIRO et al., 1997;LABRUNA; PEREIRA, 2001; SHAW et al., 2001). Os objetivos desse trabalho foram verificar os métodos de diagnóstico em um cão coinfectado com Ehrlichia canis, Anaplasma platys e hepatozoon spp; analisar quanto à especificidade e sensibilidade dos métodos diagnóstico encontrados em cada método e indicar quais métodos são mais precisos para o auxílio na clínica médica e posteriormente no tratamento. METODOLOGIA O presente trabalho utilizou três métodos para diagnóstico, o teste rápido para detecção de Ac Ehrlichia canis, no laboratório de patologia clínica do HVU-UFPI, são utilizados testes rápidos da Alere que é um teste imunocromático para detecção de anticorpos através do sangue total soro ou plasma. Outro método foi à detecção de mórulas de Ehrlichia canis, gametócitos de Hepatozoon spp e Anaplasma platys em plaquetas através de esfregaço e capa leucocitária utilizado corante panótico rápido e visualização na objetiva de 100x no microscópio. Para confirmação da Ehrlichia canis a amostra foi enviada para um laboratório particular para a realização da reação em cadeia polimerase (PCR), foi enviada o sangue total em um tubo com ácido etileno diamina tetra acético (EDTA). RESULTADOS E DISCUSSÃO O animal apresentava um quadro de sintomatologia de hemopasitose, uma fêmea de 5 meses e tinha histórico de carrapato, foram realizados hemograma e pesquisa de de hemoparasitas através da capa leucocitária, bioquímico sanguíneo e análise de liquido cavitário.

4 No teste rápido deu positivo para presença de Ac Ehlichia canis, na análise de liquido cavitário foram visualizadas estruturas sugestivas de mórula de Ehlichia canis em macrófagos, além disso foram visualizadas estruturas de mórula em neutrófilos, gametócitos de Hepatozoon em neutrófilos e Anaplasma em plaqueta na capa leucocitária. O PCR solicitado foi o quantitativo real time detectando a presença em até mesmo baixa bacteremia possui uma alta sensibilidade e alta especificidade superior a 95% comparada com os achados do esfregaço e pesquisa de hemoparasita em capa leucocitária que corresponde apenas 1% de achados como diagnóstico, sendo um método especificidade alta, porém de baixa sensibilidade. No centro da figura um gametócito de Hepatozoon spp em neutrófilo segmentado fonte: arquivo pessoal A seta indica mórula de Anaplasma em plaqueta Fonte: arquivo pessoal A seta indica mórula de Ehrilichia canis em macrófago no liquido cavitário Fonte: arquivo pessoal As mórulas de E. canis e A. platys também são difíceis de detectar no exame do esfregaço sanguíneo, só aparecendo na fase aguda da doença e, mesmo assim, em pequena quantidade, tendo assim uma baixa sensibilidade e grande ocorrência de falsos negativos (FRENCH; HARVEY, 1983; RIKIHISA, 1991; WOODY,

5 HOSKINS, 1991; IQBAL et al.,1994; NEER, 1998; SUKSAWAT et al., 2000). A não visualização das estruturas não implicar dizer que não se tem a doença, depende muito da fase da doença e sinais clínicos. A PCR convencional é considerada um dos métodos de diagnóstico direto mais sensível, específico e rápido, atualmente disponível para a detecção de espécies de Ehrlichia, Babesia e Anaplasma caninas (IQBAL et al., 1994; ANO et al., 2001; FUKUMOTO et al. 2001; BIRKENHEUER et al., 2003; JEFFERIES et al., 2003; INOKUMA et al., 2004; DUARTE et al., 2008; PINYOOWONG et al., 2008) CONCLUSÕES Diante dos resultados obtidos, os métodos utilizados tem uma alta especificidade, porém a visualização direta das estruturas depende da fase da doença para detecção das estruturas, o teste rápido e PCR representou alta sensibilidade e especificidade independente da fase da doença e serve como auxilio para acompanhamento e tratamento REFERENCIAS DUARTE, S. C.; LINHARES, G. F. C.; ROMANOWSKY, T. N.; SILVEIRA NETO, O. J.; BORGES, L. M. F. Assessment of primers designed for the subspecies-specific discrimination among Babesia canis canis, Babesia canis vogeli and Babesia canis rossi by PCR assay. Veterinary Parasitology, v. 152, n. 1-2, p , 2008; FRENCH, T. W.; HARVEY, J. W. Serologic diagnosis of infectious cyclic thrombocytopenia in dogs using an indirect fluorescent antibody test. American Journal of Veterinary Research, v. 44, n. 12, p , 1983; IQBAL, Z.; RIKIHISA, Y. Aplication of the polymerase chain reaction for the detection of Ehrlichia canis in tissues of dogs. Veterinary Microbiology, v. 42, n. 4, p , 1994; JAMES, S. P. On a parasite found in the white corpuscles of the blood of dogs. Scientific Memoirs of Officers of the. Medical and Sanitary Department, Government of India New Series, v. 14, p. 1-12, 1905; JEFFERIES, R.; RYAN, U. M.; MUHLNICKEL, C. J.; IRWIN, P. J. Two species of canine Babesia in Australia: detection and characterization by PCR. Journal of Parasitology, v. 89, n. 2, p , 2003;

6 KIKUTH, W. A new cause of anaemia, Bartonella canis nov. sp. Klinische Wochenschrift, v.7, p. 1729, 1928; LABRUNA, M. B.; PEREIRA, M. C. Carrapatos em cães no Brasil. Clínica Veterinária, n. 30, p , 2001; PIANA, G. P.; GALLI-VALERIO, B. Su di un infezione del cane con parassiti endoglobulari nel sangue. Nota preventiva. II Moderno Zooiatria, v. 6, p , 1895; PINYOOWONG, D.; JITTAPALAPONG, S.; SUKSAWAT, F.; STICH, R. W.; THAMCHAIPENET, A. Molecular characterization of Thai Ehrlichia canis and Anaplasma platys strains detected in dogs. Infection, Genetics and Evolution, v. 8, n. 4, p , 2008; RIBEIRO, V. L. S.; WEBER, M. A.; FETZER, L. O.; VARGAS, C. R. B. Espécies e prevalência das infestações por carrapatos em cães de rua da cidade de Porto Alegre, RS, Brasil. Ciência Rural, v. 27, n. 2, p , 1997; RIKIHISA, Y. The Tribe Ehrlichiae and ehrlichial diseases. Clinical Microbiology Reviews, v. 4, n. 3, p , 1991; SHAW, S. E.; DAY, M. J.; BIRTLES, R. J.; BREITSCHWERDT, E.B. Tick-borne infectious diseases of dogs. TRENDS in Parasitology, v.17, n. 2, p , 2001; WOODY, B. J.; HOSKINS, J. D. Ehrlichial diseases of dogs. Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice, v. 21, n. 1, p , 1991.