Métodos estatísticos na avaliação da eficácia de medicamentos anti-helmínticos em ovinos naturalmente infectados
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- Marina das Neves Beltrão
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1 Métodos estatísticos na avaliação da eficácia de medicamentos anti-helmínticos em ovinos naturalmente infectados Walter Bertequini Nagata 1 Carlos Noriyuki Kaneto 2 Silvia Helena Venturoli Perri 2,3 1 Introdução O conhecimento estatístico, sem dúvida, é instrumento essencial para a análise de dados de uma pesquisa. Independente da área em que se trabalha, saber utilizar os fundamentos estatísticos na metodologia científica torna a experimentação otimizada e mais confiável, conforme as especificações desejadas 5. É importante ressaltar que, dependendo da natureza dos dados obtidos em uma pesquisa científica, haverá testes estatísticos específicos mais apropriados para analisa-los 7. Os testes estatísticos podem ser divididos em dois grupos: paramétricos e não paramétricos. O primeiro tipo de teste se baseia em parâmetros da distribuição da variável, geralmente distribuição normal e é mais exigente. Enquanto o segundo tipo, independe da distribuição da variável e é usado para variáveis categóricas e quantitativas que não podem ser estudadas por testes paramétricos 4. De uma maneira singular, observa-se que esse tipo de interdisciplinaridade tem demonstrado grandes avanços em várias áreas de pesquisa, como a Medicina Veterinária. A Parasitologia Veterinária, por exemplo, é uma área que precisa caminhar em união com a Estatística em suas experimentações. O auxílio da Estatística na avaliação dos dados referentes ao controle da verminose gastrintestinal em ovinos (utilizando-se anti-helmínticos) dá condições a pesquisadores de desenvolver e optar por maneiras mais eficientes de se combater esse problema. Em vista da grande diversidade de alternativas de controle de verminose que o mercado disponibiliza, saber qual medicamento (anti-helmínticos) é o mais eficaz a partir de uma dose recomendada, evita que casos de dosagens excessivas e, consequentemente, resistência ao fármaco surja nessa criação. 1 Graduando da FMVA - UNESP (Bolsa FAPESP) 2 DAPSA - FMVA - UNESP 3 shvperri@fmva.unesp.br
2 O uso abusivo de anti-helmínticos proporciona a seleção de vermes com diversidade biológica (características genéticas e fisiológicas), que os tornam tolerantes à determinada dose de anti-helmíntico 3,6. É importante conhecer os métodos estatísticos aplicados na experimentação animal bem como a utilização correta de tais técnicas. Certamente, isso proporcionará uma melhor aplicabilidade da estatística em trabalhos científicos. O objetivo desta pesquisa científica foi avaliar a eficácia de medicamentos antihelmínticos atualmente disponíveis comercialmente, utilizando testes estatísticos adequados, dependendo da natureza dos dados e das pressuposições dos testes, na avaliação do OPG. 2 Material e Métodos Os animais foram selecionados de cinco criatórios comerciais de ovinos com ou sem histórico de resistência anti-helmíntica. Em cada criatório foram selecionados da maneira mais homogênea possível, 70 animais de uma mesma faixa etária, padrão racial, peso corporal, estado nutricional, dieta alimentar e número de ovos de nematóides por grama de fezes - OPG acima de 500. Os animais foram distribuídos randomicamente em sete grupos experimentais com 10 animais cada. Aleatoriamente, para cada grupo experimental, foi destinado por sorteio, uma droga a ser administrada de acordo com a recomendação do fabricante, permanecendo um grupo como controle. As contagens de OPG de cada animal no dia do tratamento (dia 0) e dez dias póstratamento (dia 10), foram realizadas de acordo com a técnica de Gordon e Witlock modificada 2. A porcentagem de redução de OPG foi calculada pela fórmula: % Redução de OPG = (1 XT 10 /XT 0 * XC 0 /XC 10 ) * 100 onde XT e XC são as médias aritméticas das contagens do dia 0 ou dia 10 para o grupo tratado ou controle, respectivamente. Os resultados de OPG foram submetidos à análise estatística conforme a natureza desses dados (Figura 1), por meio dos programas estatísticos SAS versão e GraphPad InStat versão , e consideradas significativas quando P < 0,05;
3 Dados de OPG Atendem as Não atendem as Análise de variância e teste de Tukey Dados transformados em log Atendem as Não atendem as Análise de variância e teste de Tukey Testes de Kruskal- Wallis e comparação múltipla de Dunn Figura 1. Esquema da escolha do teste estatístico para análise de dados da OPG 3 Resultados e discussão Os dados de OPG foram submetidos à análise estatística conforme a natureza desses dados por meio de programas estatísticos (SAS versão 9.2 e GraphPad InStat versão 3.10). Dessa forma, após a realização dos testes de normalidade e homogeneidade de variâncias, verificou-se que esses dados de OPG não atendiam a (nem após a transformação dos dados em log), pois apresentaram altos desvios padrão. Assim analisaramse os dados com o teste de Kruskal-Wallis seguido do teste de comparações múltiplas de Dunn. No Criatório 1 houve diferença significativa (P<0,05) entre o grupo Controle e o grupo Cydectin; no Criatório 2, verificou-se diferença significativa (P<0,05) entre o grupo Controle e os grupos Cydectin, Diantel e Trimix; no 3, houve diferença significativa (P<0,05) entre o grupo Controle e os grupos Levamisol, Cydectin e Diantel; no 4, houve diferença significativa (P<0,05) entre o grupo Controle e os grupos Levamisol, Cydectin, Diantel e Trimix; e no 5, encontrou-se diferença significativa (P<0,05) entre o grupo Controle e os grupos Levamisol, Cydectin e Diantel (Tabela1). É importante ressaltar que, esses grupos apresentaram diferenças significativas em relação ao grupo Controle, mas não entre si, ou seja, tiveram estatisticamente a mesma eficácia. Da mesma forma, os grupos Valbazen, Levamisol, Ivomec, Diantel e Trimix no Criatório 1, Valbazen, Levamisol, Ivomec no 2, Valbazen, Ivomec e Trimix nos 3 e 5, Valbazen e Ivomec no 4 apresentaram eficácia moderada e não
4 apresentaram diferença significativa entre si (P>0,05). Apenas o Trimix, no Criatório 4, apresentou eficácia baixa (Tabela1). Dos seis tratamentos testados, o Cydectin com 90,6% de redução de OPG é o que apresenta melhor eficácia, seguido do Levamisol com 90,3%, Diantel com 88,1%, Trimix com 82,1%, Valbazen com 78,6% e por último o Ivomec com 61,7%. Tabela 1. Média ( x ), desvio padrão (S) e mediana (Md) de ovos por grama de fezes (OPG), segundo os grupos em cada criatório. Grupo OPG Criatório 1 Criatório 2 Criatório 3 Criatório 4 Criatório 5 x S Md x S Md x S Md x S Md x S Md Controle a a a a a Valbazen ab ab ab ab ab Levamisol ab ab b b b Ivomec ab ab ab ab ab Cydectin b b b b b Diantel ab b b b b Trimix ab b ab c ab a, b Medianas seguidas de letras distintas, na coluna, diferem entre si pelo teste de Dunn (P < 0,05). Não são todos os medicamentos anti-helmínticos disponíveis no mercado que têm eficácia e condições de combater a verminose gastrointestinal dos pequenos ruminantes. Isso acontece, porque não só o uso abusivo de anti-helmínticos9, como também a falta de informações básicas sobre a utilização desses fármacos nos rebanhos, proporcionou um aumento significativo de vermes resistentes a determinados anti-helmínticos (principal estratégia para o combate e controle desses vermes gastrointestinais 10 ). VERISSIMO, et al. 10 observaram que o Levamisol tem a menor taxa de resistência, ou seja, é um dos mais eficazes e o Valbazen e Ivomec têm maiores taxas de resistência - eram menos eficazes, resultados similares foram observados no presente estudo. É importante lembrar que, variáveis como tempo e manejo, podem influenciar alterações no número de ovos por grama de fezes. 4 Conclusão Os resultados obtidos mostram a necessidade de realizar pesquisas a respeito da resistência de vermes a anti-helmínticos e incrementar o emprego de ações que visem diminuir a propagação dessa ocorrência nos rebanhos ovinos. O conhecimento das técnicas estatísticas é de fundamental importância para a correta análise e interpretação dos dados.
5 5 Bibliografia [1] GraphPad InStat versão 3.10, GraphPad Software Inc., San Diego California USA, em: < [2] LUMINA G.; BRICARELLO P. A.; GOMES J. F.; AMARANTE A. F. T. Avaliação do kit TF-Test para o diagnóstico das infecções por parasitas gastrintestinais em ovinos. Braz. J. vet. Res. anim. Sci., São Paulo, v. 43, n. 4, p , [3] PRICHARD, R. K. Anthelmintic resistance in nematodes: extent, recent understanding and future directions for control and research. International Journal for Parasitology, v. 20, n. 4, p , [4] REIS, G. M., JUNIOR, J. I. R. Comparação de testes paramétricos e não paramétricos aplicados em delineamentos experimentais. III SAEPRO, UFV, [5] RODRIGUES, M. I.; IEMMA, A. F. Planejamento de Experimentos e Otimização de Processos 2ª Ed. Campinas - SP, Cárita Editora, [6] RUFENER L.; MASER P.; RODITI I.; KAMINSKY R. Haemonchus contortus Acetylcholine Receptors of the DEG-3 Subfamily and Their Role in Sensitivity to Monepantel. PLoS Pathogens. v. 5, n. 4, p.e , [7] SAMPAIO, I. B. M. Estatística Aplicada à Experimentação Animal. 3ª ed., Belo Horizonte, UFMG, 2007, cap. 18, p [8] SAS Institute Inc. The SAS System, release 9.2. SAS Institute Inc., Cary:NC, [9] SILVESTRE A.; LEIGNEL V.; BERRAG B.; GASNIER N.; HUMBERT J. F.; CHARTIER C.; CABARET J. Sheep and goat nematode resistance to anthelmintics: pro and cons among breeding management factors. Vet. Res. V. 33, p , [10] VERISSIMO C. J.; NICIURA S. C. M.; ALBERTI A. L. L.; RODRIGUES C. F. C.; BARBOSA C. M. P.; CHIEBAO D. P.; CARDOSO D.; SILVA G. S.; PEREIRA J. R.; MARGATHO L. F. F.; COSTA R. L. D.; NARDON R. F.; UENO T. E. H.; CURCI V. C. L. M.; MOLENTO M. B. Multidrug and multispecies resistance in sheep flocks from Sao Paulo state, Brazil. Veterinary Parasitology v. 187, p ,.2012.
Palavras-chave: anti- helmínticos, nematódeos, ovinocultura, vermífugos
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