FR TURBIQUEST Instruções de Uso Ref.:9 MS 10009010097 Fator Reumatóide Finalidade. Sistema para determinação quantitativa de fatores reumatóides (FR) em amostras de soro por imunoturbidimetria. [Somente para uso diagnóstico in vitro.] Princípio. Partículas de látex estabilizadas e sensibilizadas com anticorpo IgG humano são aglutinadas quando FR estão presentes na amostra. A intensidade da aglutinação, medida em absorbância, está relacionada à quantidade de FR, cuja concentração é obtida através de curva de calibração. Características do sistema. Os FR são auto-anticorpos contra o fragmento Fc das imunoglobulinas da classe G (IgG) que se encontram em concentrações elevadas no plasma de pacientes com artrite reumatóide (AR). São marcadores sensíveis para monitorar a atividade inflamatória nesta patologia, entretanto, apresentam baixa sensibilidade diagnóstica, pois os FR podem estar ausentes na AR ou ser encontrados em outras doenças auto-imunes. O produto FR Turbiquest é um método imunoturbidimétrico facilmente aplicável a analisadores automáticos capazes de medir absorbâncias em 570 nm (550 a 580 nm), permitindo a realização da medição junto com os demais exames bioquímicos, sem necessidade da utilização de instrumentos dedicados. Além disso, a medição imunoturbidimétrica apresenta excelente desempenho operacional e permite a avaliação de grande número de amostras em curto intervalo de tempo. Todas estas características agregam maior praticidade e segurança para o usuário, além de propiciar maior agilidade e rapidez ao processo analítico. Metodologia. Reagentes 1. 1-2. 2 - Imunoturbidimetria. Reagente 1 - Armazenar entre 2-8 ºC. Contém tampão 100 mmol/l ph 6.5; azida sódica 0,095%. Reagente 2 - Armazenar entre 2-8 ºC. Suspensão de partículas de poliestireno sensibilizadas com anticorpo (IgG) humano; azida sódica 0,095%. Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Após abertos, os reagentes devem ser manuseados de acordo com as boas práticas der laboratório para evitar contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade. O reagente 2 contém derivados de sangue humano e foi testado para a presença de HBsAg e anticorpos anti-hcv e anti-hiv apresentando resultados negativos. Apesar de terem sido utilizados testes validados e aprovados, nenhum deles pode assegurar que produtos derivados do sangue humano estejam livres de agentes infecciosos. Portanto, os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação do produto, que não deve ser pipetado com a boca. Recomenda-se manuseá-lo como sendo potencialmente infectante. Os reagentes contêm azida sódica que é tóxica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de água para descartar os reagentes. Material necessário e não fornecido 1. Analisador capaz de medir com exatidão absorbância entre 550 e 580 nm. 2. Precauções e cuidados especiais Calibradores e controles das séries Calibra e Qualitrol Labtest. Amostra Usar somente soro. O analito é estável por 2 dias entre 2-8 ºC. Armazenar em temperatura igual ou inferior a 20 ºC negativos por até dias em recipiente hermeticamente fechado para evitar evaporação. Assegurar que as amostras estejam descongeladas e homogeneizadas antes da sua utilização. Não usar amostras com sinais de contaminação ou amostras congeladas e descongeladas repetidas vezes. Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) que estabeleça procedimentos adequados para colheita, preparação e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento analítico. Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las, deve-se seguir as normas estabelecidas para biossegurança. Para descartar os reagentes e o material biológico, sugerimos aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental. 01 Português - Ref.: 9
Interferências Concentrações de bilirrubina até 33 mg/dl, triglicérides até 0 mg/dl e hemoglobina até 150 mg/dl não produzem interferências significativas. Para uma revisão das fontes fisiopatológicas e medicamentosas de interferência nos resultados e na metodologia sugere-se consultar http://www.fxol.org. Procedimento Ver Protocolo de Automação para Sistema Labmax 240. Estão disponíveis aplicações para outros sistemas automáticos. Calibração Calibração de 5 pontos Ponto 0: NaCl 150 mmol/l (0.85%). Ponto 1 ao 4: Ver instruções de uso do produto Calibra FR - Ref. 310. Intervalo de calibrações Quando o controle interno da qualidade indicar; Quando utilizar novo lote de reagentes; Quando utilizar novos frascos de reagentes de um mesmo lote, caso uma nova calibração tenha sido realizada durante a utilização do frasco anterior. Linearidade O intervalo operacional de medição é de 0 a 200 UI/mL. Para concentrações maiores, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/l (0.85%), realizar nova determinação e multiplicar o resultado obtido pelo fator da diluição. Controle interno da qualidade. O laboratório deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os objetivos, procedimentos, normas, critérios para limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Ao mesmo tempo deve-se manter um sistema definido para monitorar a variabilidade analítica que ocorre em todo o sistema de medição. Portanto, o uso de controles para avaliar a imprecisão e inexatidão das determinações deve ser prática rotineira no laboratório clínico. Sugere-se usar um controle com um valor situado na faixa de referência ou no nível de decisão e outro controle com um valor em outra faixa de significância clínica. Deve-se criar uma meta de estado de controle, sendo recomendado como limite máximo de controle o valor da média ± 2 ou 3 vezes o desvio padrão obtido no laboratório. Alternativamente, pode-se utilizar a especificação desejável 5 para o Erro Total baseada nos componentes da variação biológica (VB). Intervalo de referência. Estes valores devem ser usados apenas como orientação. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça, na população atendida, sua própria faixa de valores de referência. Menor que 20 UI/mL. Características do desempenho Estudos de recuperação. Em duas amostras com concentração de FR iguais a 35.0 UI/mL e 53 UI/mL foram adicionadas quantidades diferentes do analito, sendo obtidos os seguintes resultados: Concentração (UI/mL) Inicial Adicionada Esperada Encontrada 35,0 53,0 18,0 35,0 Os erros sistemáticos proporcionais estimados em concentrações de 40 UI/mL e 140 UI/mL são 0.26 UI/mL e 0.91 UI/mL, respectivamente. O erro sistemático médio (0.65%) atende à especificação desejável para Erro Sistemático Total ( ± 6.6%) baseada nos componentes da VB. Estudos de comparação de métodos. O método proposto foi comparado com método utilizando tecnologia similar, sendo obtidos os seguintes resultados: Número de amostras Intervalo de concentrações (Ul/mL) Média das estimativas (Ul/mL) Equação da regressão Coeficiente de correlação Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático médio é igual a 3.5% no nível de decisão 40 UI/mL e 0.93% no nível de decisão 140 UI/mL. Os resultados do estudo comparativo atendem à especificação desejável para Erro Sistemático Total ( ± 6.5%) baseada nos componentes da VB. Estudos de precisão. 53,0 88,0 Os estudos de precisão foram realizados utilizando uma amostra com concentração igual a 40 UI/mL e outra amostra com concentração igual a 143 UI/mL. 6 52,9 88,8 Método Comparativo 99 Recuperação (%) 100,4 100,9 0,0 a 433,5 0,0 a 457,0 32,9 34,3 Método Labtest (Ul/mL) = 0,9989 x Comparativo + 1,4591 0,988 Repetitividade - imprecisão intra-ensaio Amostra 1 Amostra 2 N Média 40 143 Reprodutibilidade - imprecisão total Amostra 1 Amostra 2 N Média 40 143 DP 0,48 1,43 DP 0,76 2,29 Método Labtest CV (%) 1,2 1,0 CV (%) 1,9 1,9 02 Português - Ref.: 9
A especificação desejável para Coeficiente de Variação ( 4.3%) baseada nos componentes da VB é atendida para as duas amostras avaliadas. O erro total (erro aleatório + erro sistemático) estimado em níveis de decisão igual a 40 UI/mL e 140 UI/mL é igual a 6.63% e 3.57%, respectivamente. Os resultados indicam que o método atende à especificação desejável para Erro Total ( 13.5%) baseada nos componentes da VB. Sensibilidade metodológica. Utilizando-se a absorbância mínima detectável como parâmetro, a sensibilidade fotométrica no Labmax 240 é 0.082 UI/mL correspondendo a uma diferença de absorbância igual a 0.001. Efeitos da diluição da matriz. Uma amostra com valor igual 100 UI/mL foi utilizada para avaliar a resposta do sistema nas diluições da matriz com solução de NaCl 150 mmol/l (0.85%). Usando fatores de diluição que variaram entre 2 e 8 foi encontrada recuperação média de 102.8%. O erro sistemático médio (2.8%) atende à especificação desejável para o Erro Sistemático Total ( ± 6.5%) baseada nos componentes da VB. Significado clínico. A pesquisa de FR apresenta sensibilidade entre 75 e 85% para o diagnóstico da artrite reumatóide (AR) em pacientes com a doença definida. Na fase inicial da doença, especialmente no primeiro ano, a sensibilidade é de cerca de 50%. A quantificação dos FR tem importância diagnóstica e prognóstica. Concentrações de FR maiores que 400 UI/mL são mais comumente encontrados na AR. Indivíduos que não são portadores de AR e que apresentam resultado positivo para FR têm, na maioria das vezes, concentrações menores que 400 UI/mL. Pacientes com AR definida podem ter concentrações baixas ou mesmo resultado negativo. Concentrações elevadas de FR são evidência de AR em casos duvidosos ou em pacientes com artrite de início recente. Concentrações elevadas de FR estão, na maioria das vezes, associadas com a presença de nódulos subcutâneos, erosões ósseas e mau prognóstico. Além disso, manifestações extra-articulares são mais comumente encontradas nestes pacientes e incluem vasculite, envolvimento pulmonar e pericardite. Aproximadamente % dos pacientes que preenchem os critérios da Associação Americana de Reumatismo (ARA) para o diagnóstico da AR não possuem pesquisa de FR positiva. A maioria destes pacientes tem uma forma leve ou moderada de AR com pequeno acometimento articular. A pesquisa do FR é útil para classificar as artropatias. Este enfoque é de importância relevante, pois agrupa várias artropatias como a síndrome de Reiter, espondilite anquilosante, artrite psoriática, artropatias enteropáticas (ileíte regional, retrocolite ulcerativa) e outras como seronegativas. Hanseníase, Endocardite Bacteriana Subaguda, Sífilis, Rubéola, Mononucleose, Macroglobulinemia de Waldenstrom, Asbestose, neoplasias, hepatopatias crônicas, transfusões de sangue, transplante renal, parentes de pacientes com AR e indivíduos idosos. Observações 1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados corretos. 2. A água utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes e usar nas medições, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentração de silicatos <0.1 mg/l (água tipo II). Para o enxágüe da vidraria, a água pode ser do tipo III, com resistividade 0.1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxágüe final, utilizar água tipo II. Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre a produção de água alcalina com liberação de vários íons, silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água. Referências 1. Jones WL, Wiggins GL. Am J Clin Path 1973;60:703. 2. Singer JM. Bull Rheum Dis 1973;24:6. 3. Singer JM, Plotz CM. Am J Med 1956;21:888. 4. Singer JM, Plotz CM. JAMA 1958;168:180. 5. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponível em:<http://www.seqc.es/ar ticle/ar ticleview/3/1/170> (acesso em 08/2005). 6. Labtest: Dados de arquivo. Apresentação Produto Referência Conteúdo FR Turbiquest 9-1/55 Volume de reagente por teste em aplicações automáticas depende dos parâmetros de programação de cada equipamento. Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos e semiautomáticos. 1 2 1 X 50 ml 1 X 5 ml Concentrações de FR maiores que 20 UI/mL são encontrados, freqüentemente, na Síndrome de Sjögren, Doença Mista do Tecido Conectivo, Lupus Eritematoso Sistêmico, Esclerose Sistêmica, Púrpura Hiperglobulinêmica e, ocasionalmente, na Artrite Reumatóide juvenil, Poliarterite Nodosa, Polimiosite, Sarcoidose, Tuberculose, Calazar, 03 Português - Ref.: 9
Informações ao consumidor [Termos e Condições de Garantia] A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro das especificações até a data de expiração indicada nos rótulos desde que os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas instruções sejam seguidos corretamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: 16.516.296 / 0001-38 Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000 Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br Serviço de Apoio ao Cliente 0800 031 34 11 (Ligação Gratuita) e-mail: sac@labtest.com.br Revisão: Julho, 2010 Ref.: 240214 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reprodução sob prévia autorização 04 Português - Ref.: 9
PROTOCOLO DE AUTOMAÇÃO PARA O LABMAX 240 Item Name DATA INFORMATION # FRTQ CALIBRATION UNITS UI/mL TYPE Spline DECIMALS 1 STANDARD #1 @ #4 ANALYSIS #2 @ #5 TYPE END #3 @ #6 @ 1 Main W.Length 1 570 Sub W.length 2 METHOD Turbidimétrico CORR. SLOPE INTER Y = 1 X + 0 NORMAL RANGE MALE FEMALE LOW HIGH LOW HIGH Serum 0 20 0 20 Urine Plasma CSF Dialysis Other # Posição de 1 a 77 no painel de testes. @Inserir a concentração do analito para o material Calibrador FR (Ref. 310) Item Name # FRTQ ASPIRATION KIND Single Double VOLUME SAMPLE 5.5 µl REAGENT1 VOL REAGENT2 VOL 210 35 µl µl MONITOR Third Mix. OFF ON R1 Blank Water Blank R1-Blank1 0 LEVEL POINT 1 SPAN 3 DATA PROCESS READ MAIN SUB FACTOR Blank correction PROZONE CHECK FIRST SECOND THIRD START 53 END 54 31 0.8603 ABSORBANCE LIMIT LOW HIGH 0.000 3.000 ENDPOINT LIMIT LINEAR CHECK(%) START END LIMIT(%) Low Low 2 2.000 High High Item Name AUTO RERUN SW # FRTQ AUTO RERUN CONDITION (ABSORBANCE) 3 ON OFF Absorbance Range AUTO RERUN RANGE (RESULTS) Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other Lower Higher Lower Higher Prozone Range 05 Português - Ref.: 9
06 Português - Ref.: 9