2. Reagente Armazenar entre 2-8ºC. 3. Reagente - Hemolisante - Armazenar entre 2-8ºC. HbA1c Turbiquest Instruções de Uso

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1 HbAc Turbiquest Instruções de Uso Ref.:85 MS Finalidade. Sistema para determinação quantitativa da Hemoglobina Ac (HbAc) em amostras de sangue total e papa de hemácias. Uso profissional. [Somente para uso diagnóstico in vitro.] Princípio. Todas as hemoglobinas presentes na amostra se ligam à superfície das partículas de látex (Reagente ). A adição de anticorpo monoclonal de camundongo anti-hbac humana (Reagente ) promove a formação do complexo látex-hbac-anticorpo anti-hbac. Um segundo anticorpo presente no Reagente (anticorpo policlonal anti-igg de camundongo) produz aglutinação deste complexo. A intensidade da aglutinação, medida em absorbância, é proporcional à quantidade de HbAc presente na amostra. O valor de HbAc é obtido através de curva de calibração. Características do sistema. O produto HbAc Turbiquest Labtest é um método imunoturbidimétrico facilmente aplicável a analisadores automáticos bioquímicos capazes de medir absorbâncias entre 600 e 660 nm. A medição é realizada diretamente, sem a necessidade da determinação da hemoglobina total utilizando somente um canal do analisador automático. Além disso, os resultados são obtidos através de curva de calibração, dispensando a realização de cálculos adicionais. Todas estas características agregam maior praticidade e segurança para o usuário, além de propiciar maior agilidade e rapidez ao processo analítico. O método é certificado pelo National Glycohemoglobin Standardization Program (NGSP) para TFB, Inc., com rastreabilidade ao método de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) utilizado no estudo Diabetes Control and Complications Trial (DCCT). Metodologia. Imunoturbidimetria. Reagentes. Reagente - - Armazenar entre -8ºC. Pronto para uso. Contém partículas de poliestireno e azida sódica 0,05%.. Reagente - - Armazenar entre -8ºC. Pronto para uso. Contém tampão 0,% ph 6,0; anticorpo monoclonal de camundongo anti-hbac humana; anticorpo policlonal anti-igg de camundongo e preservativo.. Reagente - Hemolisante - Armazenar entre -8ºC. Pronto para uso. Contém azida sódica 0,05%. Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos a contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade. Precauções e cuidados especiais Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação dos reagentes, os quais não devem ser pipetados com a boca. O reagente e o reagente Hemolisante contêm azida sódica que é tóxica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de água para descartar o reagente. Material necessário e não fornecido. Analisador capaz de medir com exatidão a absorbância entre 600 e 660 nm.. Calibradores Calibra HbAc Turbiquest - Ref. 86 e controles Glicotrol - Ref. 0 da Labtest. Amostra Papa de hemácia ou sangue total podem ser utilizados. O sangue deve ser colhido com EDTA ou fluoreto de sódio. O analito é estável por 7 dias entre -8ºC e por pelo menos ano em temperatura igual ou inferior a 70ºC negativos. Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) que estabeleça procedimentos adequados para coleta, preparação e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento analítico. Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las devem seguir as normas estabelecidas para biossegurança. Para descartar os reagentes e o material biológico, sugerimos aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental. Interferências Concentrações de bilirrubina conjugada até 0 mg/dl; bilirrubina nãoconjugada até 0 mg/dl; ácido ascórbico até 50 mg/dl não produzem interferências significativas. Resultados inconsistentes podem ser obtidos em pacientes que apresentam as seguintes condições: uso de opiáceos, envenenamento por chumbo, alcoolismo e ingestão de grandes quantidades de ácido acetilsalicílico. 0 Português - Ref.: 85

2 A fração pré-hbac (fração lábil ou instável) não é detectada e, portanto, não interfere na determinação imunométrica da HbAc. Valores elevados de hemoglobina fetal produzem interferência negativa. Hemoglobina A, hemoglobina C e hemoglobina S podem aumentar a inexatidão dos resultados. Procedimento Ver observações e. Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos. Preparo da amostra. Preparar um hemolisado para cada amostra. Papa de hemácia. Centrifugar o sangue total por minutos a 000 rpm.. Em um tubo pipetar 0,5 ml do Reagente Hemolisante e 0,005 ml de papa de hemácia;. Agitar fortemente por 0 segundos e esperar 5 minutos ou até que a lise completa seja evidente (ausência de turvação); 4. O hemolisado pode ser armazenado até 0 dias entre -8ºC. Sangue total. Em um tubo pipetar 0,5 ml do Reagente Hemolisante e 0,00 ml da amostra de sangue total homogeneizada;. Agitar fortemente por 0 segundos e esperar 5 minutos ou até que a lise completa seja evidente (ausência de turvação);. O hemolisado pode ser armazenado até 0 dias entre -8ºC. Parâmetros para Analisadores Automáticos Tipo de Reação Direção da Reação de Onda Primário de Onda Secundário Temperatura Calibração Modelo de Calibração* Volume de Amostra** Volume de Reagente ** Incubação a 7ºC Volume de Reagente ** Absorbância Absorbância Ponto Final Crescente 600 a 660 nm 800 nm 7ºC 5 pontos (Calibra HbAc Turbiquest - Ref. 86) Não linear (Spline, Exponencial) 4 L 0 L 00 segundos 50 L Entre 60 e 90 segundos após adição de Reagente 00 segundos após a adição do Reagente *A definição de modelo de calibração deve ser adequada a cada modelo de equipamento. Em caso de dúvida, entre em contato com o Serviço de Apoio ao Cliente Labtest. **Os volumes de amostra e reagentes podem ser modificados proporcionalmente sem prejuízo para o desempenho do teste e o procedimento de cálculos se mantém inalterado. Em caso de redução dos volumes é fundamental que se observe o volume mínimo necessário para a leitura fotométrica. Calibração O método é certificado pelo National Glycohemoglobin Standardization Program (NGSP) para TFB, Inc., com rastreabilidade ao método de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) utilizado no estudo Diabetes Control and Complications Trial (DCCT). Calibração de 5 pontos Utilizar o produto Calibra HbAc Turbiquest - Ref. 86. Ponto 0: utilizar o calibrador 0. Ponto ao 4: utilizar os calibradores,, e 4. Intervalo de calibrações: Quando o controle interno da qualidade indicar; Quando utilizar novo lote de reagentes. Intervalo operacional. O intervalo operacional de medição é de,0% a,0%. Resultado superior a,0% pode ser reportado como maior que,0% ou diluir a amostra : utilizando como diluente outra amostra com concentração de HbAc menor que 6% (50 L do hemolisado da amostra com concentração elevada e 00 L do hemolisado da amostra diluente). Determinar a concentração da HbAc na mistura e calcular a concentração de HbAc da amostra elevada conforme abaixo: HbAc (%) = [HbAc(%) na mistura X n] - [HbAc(%) na amostra diluente X (n - )] n = fator de diluição da amostra Exemplo [8, X ] - [4,6 X ( - )] = 4,9-9, =,7% Controle interno da qualidade. O laboratório deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Ao mesmo tempo deve-se manter um sistema definido para monitorar a variabilidade analítica que ocorre em todo o sistema de medição. Materiais de controle devem ser utilizados para monitorar a imprecisão da medição e desvios da calibração. Sugere-se que as especificações para o coeficiente de variação e o erro total sejam baseadas nos componentes 5 6 da variação biológica (VB) ou nas especificações propostas pelo NGSP. Valores esperados. Para indivíduos não diabéticos: 4,0% a 6,0%. Para indivíduos diabéticos em controle glicêmico: Criança (faixa pré-puberal) Criança (faixa puberal) Adulto Idoso <8,0% <8,5% <7,0% <8,0% 0 Português - Ref.: 85

3 Os valores para indivíduos diabéticos foram determinados a partir dos resultados de estudos clínicos prospectivos e randomizados e se correlacionam com risco significativamente menor de desenvolvimento de complicações do Diabetes mellitus,4. Características do desempenho 7 Estudos de recuperação. Em duas amostras com concentrações de HbAc iguais a 6,% e 9,4% foram adicionadas quantidades do analito, sendo obtidos os seguintes resultados: Inicial 6, 9,4 Utilizando o erro médio de,7%, o erro sistemático proporcional estimado é igual a 0,099% para amostra com concentração de 6,0% e 0,67% para amostra com concentração de 0,0%. Comparação de métodos. O método proposto foi comparado com o método HPLC, sendo obtidos os seguintes resultados. Número de amostras Equação da regressão Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático total (bias) estimado é igual 0,85% e,8% para amostras de 5,5 e 0,%, respectivamente. Esse erro é menor que o erro sistemático da 5 especificação desejável baseada nos componentes da VB que é,50%. Estudos de precisão. Os estudos de precisão foram realizados utilizando três amostras com concentrações iguais a 5,5%, 7,% e 0,%. Repetitividade - imprecisão intraensaio Amostra Amostra Amostra N Média (%) 5,5 7, 0, Reprodutibilidade - imprecisão total Amostra Amostra Amostra Concentração (%) Adicionada 0,9,0 Coeficiente de correlação N Esperada 7, 0,4 Método Comparativo Método Labtest (%) = 0,9844 x Comparativo + 0,09 0,994 Média (%) 5,5 7, 0, Encontrada 7, 0,6 DP 0,04 0,0 0,07 DP 0,08 0,047 0,05 Recuperação (%) 0,4 0,9 Método Labtest CV (%) 0,6 0,45 0,6 CV (%) 0,70 0,66 0,4 A imprecisão encontrada atende a especificação desejável para 5 imprecisão total baseada nos componentes da VB que é 0,9%. Sensibilidade metodológica ou analítica. Limite de detecção: 0,095%. Equivale a desvios padrão (DP) obtidos a partir de 0 medições de uma amostra com concentração de HbAc igual a,0 %. Significado clínico. A hemoglobina humana do adulto é habitualmente constituída de HbA (97%), HbA (,5%) e HbF (0,5%). A análise cromatográfica da HbA identifica uma gama de hemoglobinas que migram mais rapidamente do que a HbA0: HbAa, HbAb e HbAc, que foram inicialmente denominadas hemoglobinas rápidas. Posteriormente, observou-se que estas hemoglobinas rápidas estão ligadas a alguns açúcares, sendo coletivamente chamadas hemoglobinas glicadas ou HbA. A HbAc é a principal fração e corresponde a 80% da HbA. A HbAc é formada pela ligação não enzimática da glicose com a porção N-terminal valina (glicação) em cada cadeia beta da HbA, formando uma base de Schiff instável (pré-hbac, HbAc lábil ou instável) que sofre um rearranjo irreversível (rearranjo de Amadori), formando uma cetoamina estável. A formação de hemoglobina glicada é contínua e irreversível, e seu nível sanguíneo depende da sobrevida da hemácia (cerca de 0 dias) e da concentração de glicose no sangue, já que a hemácia é livremente permeável à glicose. A HbAc corresponde a cerca de 4% a 6% da HbA total em indivíduos não diabéticos, podendo chegar a 0% em indivíduos diabéticos mal controlados. A quantidade de HbAc é diretamente proporcional à concentração média de glicose no sangue durante as seis a oito semanas precedentes e fornece um critério adicional para a avaliação do controle glicêmico. A dosagem de HbAc parece ser capaz de prognosticar o risco do desenvolvimento e progressão das complicações crônicas do diabetes. Assim, a HbAc deve ser medida rotineiramente em todos os pacientes com Diabetes mellitus para avaliar o grau de controle glicêmico. Conforme o Posicionamento Oficial do Grupo Interdisciplinar de 4 Padronização da Hemoglobina Glicada, a determinação da HbAc deve ser realizada pelo menos duas vezes ao ano para todos os pacientes diabéticos e quatro vezes por ano (a cada três meses) para pacientes que se submeteram a alteração do esquema terapêutico ou que não estejam 4 atingindo os objetivos recomendados com o tratamento vigente. Os níveis de HbAc não retornam aos valores esperados imediatamente após a redução e estabilização da concentração sanguínea de glicose. O tempo necessário é de aproximadamente oito a dez semanas. Pacientes com doença hemolítica ou outras condições que reduzem a sobrevida das hemácias (estados hemorrágicos) podem apresentar resultados falsamente diminuídos de HbAc. Anemia por deficiência de ferro, vitamina B ou ácido fólico pode levar a resultados falsamente aumentados de HbAc por aumentar a sobrevida das hemácias. A determinação da HbAc não tem valor nos pacientes que apresentam hemoglobinopatias homozigóticas devido a ausência de HbA. Nestas situações sugere-se realizar a determinação da frutosamina para avaliação do controle glicêmico. A dosagem de HbAc pode ser utilizada para diagnosticar Diabetes mellitus de acordo com a Associação Americana de Diabetes. 0 Português - Ref.: 85

4 Observações. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes, usar nas medições e para uso no enxágue final da vidraria, a água deve ter resistividade megaohm.cm ou condutividade microsiemens/cm e concentração de silicatos <0, mg/l. Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água.. Para uma revisão das fontes fisiopatológicas e medicamentosas de interferência nos resultados e na metodologia sugere-se consultar Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, ª edição, Washington: AACC Press, 990. Referências. American Diabetes Association. Diabetes care 0, 8 (Suppl ).. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia: Saunders Company 994; DCCT Research Group. Diabetes Control and Complications Trial (DCCT). N Eng J Med 99; 9: Grupo Interdisciplinar de Padronização da Hemoglobina Glicada - Ac (Menu: Comissões). 5. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular. Disponível em: < Variacion_biologica_%7C_Comision_de_Calidad_Analitica_%7C_Co mite_cientifico/> (acesso em 0/0). 6. Summary of NGSP Certification Categories. Disponível em: (acesso em 0/0). 7. Labtest: Dados de Arquivo. Apresentação Produto HbAc Turbiquest HbAc Turbiquest Labmax 560/400 Informações ao consumidor [Termos e Condições de Garantia] A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto, dentro das especificações, até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas instruções sejam seguidos corretamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Serviço de Apoio ao Cliente (Ligação Gratuita) sac@labtest.com.br Ediçao: Agosto, 0 Ref.: 607 Referência 85-/0 85-/40 85-/40 Conteúdo X ml X 5 ml X 65 ml X 0 ml X 0 ml X 0 ml X 0 ml X 0 ml X 0 ml Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reprodução sob prévia autorização 04 Português - Ref.: 85

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