PCR ULTRA TURBIQUEST PLUS

Transcrição

1 PCR ULTRA TURBIQUEST PLUS Instruções de Uso Ref.:335 MS Proteína C reativa ultra-sensível Finalidade. Sistema para determinação quantitativa ultra-sensível de proteína C-reativa (PCR) em amostras de soro por imunoturbidimetria. [Somente para uso diagnóstico in vitro.] Princípio. Partículas de látex estabilizadas e sensibilizadas com anticorpo anti-proteína C-reativa (anti-pcr) humana são aglutinadas quando a PCR está presente na amostra. A intensidade da aglutinação, medida em absorbância, está relacionada à concentração de PCR. Características do sistema. A proteína C-reativa é considerada, atualmente, o melhor marcador do processo inflamatório crônico arterial implicado na gênese da aterosclerose. A sua determinação tem sido recomendada na estratificação do risco de eventos coronarianos. Indivíduos que apresentam concentrações séricas de PCR iguais ou maiores a,0 mg/l apresentam risco relativo elevado de apresentar estes eventos. O produto PCR Ultra Turbiquest Plus Ref. 335 é um método imunoturbidimétrico facilmente aplicável a analisadores automáticos capazes de medir absorbâncias em 540 nm (530 a 550 nm), permitindo a realização da medição junto aos demais exames bioquímicos, sem necessidade da utilização de instrumentos dedicados. A medição imunoturbidimétrica apresenta excelente desempenho operacional e permite a avaliação de grande número de amostras em curto intervalo de tempo. O produto PCR Ultra Turbiquest Plus Ref. 335 possui sensibilidade otimizada que permite a determinação da PCR na região de interesse com elevada precisão e exatidão, permitindo a sua utilização como marcador de processo inflamatório crônico. Todas estas características agregam maior praticidade e segurança para o usuário, propiciando maior agilidade ao processo analítico. O Calibrador PCR ultra sensível rastreável ao Material de Referência CRM 470/RPPHS (Institute for Reference Materials and Measurements, IRMM) é aplicável na transferência de exatidão para sistemas analíticos. Metodologia. Imunoturbidimetria. Reagentes. - Reagente - Pronto para uso. Armazenar entre - 8 ºC. Não congelar. Contém tampão mmol/l ph 8, e azida sódica 4,6 mmol/l.. - Reagente - Pronto para uso. Armazenar entre - 8 ºC. Não congelar. Suspensão de partículas de poliestireno sensibilizadas com anticorpo (IgG) anti-pcr humana e azida sódica 4,6 mmol/l Calibrador PCR ultra sensível - Pronto para uso. Armazenar entre - 8 ºC. Ver a concentração no rótulo do frasco. Preparação líquida contendo PCR em material de origem humana e azida sódica 4,6 mmol/l. O Calibrador PCR ultra sensível deve ser processado exatamente como proposto nas instruções das aplicações. Os reagentes devem permanecer fora da temperatura de armazenamento somente pelo tempo necessário para se obter o volume a ser utilizado. Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes e o calibrador estão sujeitos a contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução da estabilidade. Precauções e cuidados especiais Homogeneizar suavemente os reagentes por inversão antes de utilizar. Evitar formação de espuma. O Calibrador PCR ultra sensível é preparado a partir de derivados de sangue humano e foi testado para a presença de HBsAg e anticorpos anti-hcv e anti-hiv apresentando resultados negativos. Apesar de terem sido utilizados testes validados e aprovados, nenhum deles pode assegurar que produtos derivados do sangue humano estejam livres de agentes infecciosos. Portanto, os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação do produto, que não deve ser pipetado com a boca. Recomenda-se manuseá-lo como sendo potencialmente infectante. O congelamento dos reagentes e altera irreversivelmente sua funcionalidade. Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação dos reagentes, os quais não devem ser pipetados com a boca. Os reagentes contêm azida sódica que é tóxica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de água para descartar os reagentes. Material necessário e não fornecido. Analisador capaz de medir com exatidão absorbância entre 530 e 550 nm.. Produtos Qualitrol Plus PCR Ultra - Ref Português - Ref.: 335

2 Amostra Usar soro. O analito é estável por dias entre - 8 ºC e por até 30 dias em temperatura igual ou inferior a ºC negativos, armazenado em recipiente apropriado para congelamento. Assegurar que as amostras estejam descongeladas e homogeneizadas antes da sua utilização. Não usar amostras com sinais de contaminação ou amostras congeladas e descongeladas repetidas vezes. Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) que estabeleça procedimentos adequados para colheita, preparação e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento analítico. Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las deve-se seguir as normas estabelecidas para biossegurança. Para descartar os reagentes e o material biológico, sugerimos aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental. Interferências Concentrações de bilirrubina até mg/dl, triglicérides até 000 mg/dl, hemoglobina até 000 mg/dl e fatores reumatóides até 75 UI/mL não produzem interferências significativas. Preparo do reagente de trabalho Para aplicação monorreagente. O conjunto de um frasco de Reagente e um frasco de Reagente permite preparar o Reagente de Trabalho. Transferir o conteúdo de um frasco de Reagente para um frasco de Reagente e homogeneizar suavemente. Identificar o frasco do Reagente de Trabalho e anotar a data de expiração. Estável 30 dias entre - 8 ºC, mantido em recipiente fechado, quando não houver contaminação química ou microbiana. Opcionalmente, pode-se preparar menor volume do Reagente de Trabalho utilizando a proporção 4 volumes do Reagente e volume do Reagente. Para preservar seu desempenho o reagente deve permanecer fora da geladeira somente o tempo necessário para se obter o volume a ser utilizado. Procedimento Ver Protocolo de Automação para Sistema Labmax 40. Estão disponíveis aplicações para outros sistemas automáticos e semiautomáticos. Calibração. A concentração do analito no material Calibrador PCR ultra sensível é rastreável ao Material de Referência CRM 470/RPPHS (Institute for Reference Materials and Measurements, IRMM). Calibração de 6 pontos Ponto 0: NaCl 50 mmol/l (0,85%). Ponto ao 5: Calibrador PCR ultra sensível - Ref preparado conforme o exemplo abaixo. Preparar as diluições do Calibrador PCR ultra sensível utilizando solução de cloreto de sódio 50 mm (0,85%) como diluente, conforme as relações descritas no exemplo abaixo. Para obter as concentrações de PCR em cada diluição, multiplicar a concentração do calibrador pelo fator de diluição correspondente indicado na tabela. Ponto da calibração Calibrador PCR ultra sensível ( µ L) Solução NaCl ( µ L) Fator de diluição ,05 0, 0,5 0,5,0 A existência de bolhas no calibrador ou qualquer amostra presente na cubeta de amostras do equipamento é causa comum de erros na determinação do analito. Intervalo de calibrações Quando o controle interno da qualidade indicar. Quando utilizar novo lote de reagentes. Quando utilizar novos frascos de reagentes de um mesmo lote, caso uma nova calibração tenha sido realizada durante a utilização do frasco anterior. Intervalo operacional. O intervalo operacional de medição é de 0,05 a 0,0 mg/l. Em casos de valores maiores, diluir a amostra com NaCl 50 mmol/l (0,85%), realizar nova determinação e multiplicar o resultado obtido pelo fator da diluição. Sugerimos a verificação da linearidade metodológica e fotométrica no mínimo semestralmente utilizando amostras com valores até 0,0 mg/l. Controle interno da qualidade. O laboratório deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para avaliar a imprecisão da medição e desvios da calibração. Recomenda-se utilizar os produtos da linha Qualitrol Plus PCR Ultra Ref Labtest para controle interno da qualidade em ensaios de imunoturbidimetria. Valores desejáveis ou recomendados. Quando a proteína C-reativa é utilizada para avaliação de processo inflamatório em evolução, é desejável que o valor 6,0 mg/l seja utilizado como ponto de corte. Na avaliação de risco para eventos coronarianos, os valores desejáveis substituem os valores de referência e foram determinados a partir de dados epidemiológicos tratados estatisticamente com o objetivo de estabelecer a concentração de PCR como fator de risco independente para eventos coronarianos. Baixo Moderado Alto Risco PCR (mg/l) Inferior a,0,0 a 3,0 Superior a 3,0 0 Português - Ref.: 335

3 Características do desempenho 5 Estudos de recuperação. Em uma amostra com concentração de proteína C reativa igual a, mg/l foram adicionadas quantidades diferentes do analito, sendo obtidos os seguintes resultados: Concentração (mg/l) O erro total (erro aleatório + erro sistemático) estimado em níveis de decisão iguais a,5 e 3,0 mg/l é igual a 3,7% e 6,7%, respectivamente. Os resultados indicam que o método atende à especificação desejável para Erro Total ( 68,3%) baseada nos componentes da VB. Efeito prozona. Não foi observado efeito prozona em amostras com concentração de PCR até 00 mg/l. Inicial Adicionada Esperada Encontrada,,3,5,63, 3,8 5,0 5,08 Recuperação (%) 05,3 0,6 Sensibilidade metodológica. Utilizando-se a absorbância mínima detectável como parâmetro, a sensibilidade fotométrica no Labmax 40 é 0,06 mg/l, correspondendo a uma diferença de absorbância igual a 0,00. Os erros sistemáticos proporcionais obtidos em valores de,5 mg/l e 3,0 mg/l são 0,05 mg/l e 0,0 mg/l, respectivamente. O erro sistemático médio (3,4%) atende a especificação desejável para Erro Sistemático Total ( ± 4,9%) baseado nos componentes da variação biológica (VB). Estudos de comparação de métodos. O método proposto foi comparado com método com tecnologia similar, sendo obtidos os seguintes resultados: Número de amostras Intervalo de concentrações (mg/l) Equação da regressão Coeficiente de correlação Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático (bias) foi igual a,0% e,% em concentrações de,5 e 3,0 mg/l, respectivamente. Os resultados do estudo comparativo atendem à especificação desejável para Erro Sistemático Total ( ± 4,9%) baseada nos componentes da VB. Estudos de precisão. Os estudos de precisão foram realizados utilizando amostras com concentrações iguais a 0,8 mg/l, 3,09 mg/l e 5,95 mg/l. Repetitividade - imprecisão intra-ensaio Amostra Amostra Amostra 3 Amostra Amostra Amostra 3 N N Método Comparativo Média 0,8 3,09 5,95 Reprodutibilidade - imprecisão total Média 0,8 3,09 5,95 6 0, - 0 DP 0,0 0,05 0,08 DP 0,0 0,08 0,8 Método Labtest Método Labtest (mg/l) = 0,9458 x Comparativo + 0,0958 0,996 CV (%) 4,5,7,4 CV (%) 7,7,7 3,0 Efeitos da diluição da matriz. Uma amostra de concentração conhecida foi utilizada para avaliar a resposta do sistema nas diluições da matriz com NaCl 50 mmol/l. Foi encontrado uma recuperação de 04,8 %. O erro sistemático médio (4,8%) atende à especificação desejável para o Erro Sistemático Total ( ± 4,9%) baseada nos componentes da VB. Significado clínico. O reconhecimento de que o processo inflamatório crônico está implicado na gênese da aterosclerose revelou a importante associação da inflamação da parede arterial com o desenvolvimento de doença coronariana. Estudos recentes têm demonstrado que a PCRus é o marcador inflamatório sérico de escolha, sendo um fator de risco independente preditivo de eventos coronarianos. A III Diretriz Brasileira sobre Dislipidemias e de Prevenção da Aterosclerose da Sociedade Brasileira de Cardiologia recomenda que a determinação da PCRus seja utilizada na estratificação do risco de eventos coronarianos. Entretanto, sua determinação não se aplica a fumantes, obesos, diabéticos, portadores de osteoartrose, mulheres sob terapia de reposição hormonal, indivíduos em uso de anti-inflamatórios 3 ou na presença de infecções. Para reduzir a variabilidade intra-individual, a determinação da PCRus deve ser realizada em indivíduos metabolicamente estáveis, que não apresentam evidência de infecção ou outro processo inflamatório. O resultado deve ser obtido através da média das medições realizadas em duas amostras, colhidas com intervalo de duas semanas. Concentração de PCR superior a 0,0 mg/l indica a presença de infecção ou outro processo inflamatório e impede a utilização deste marcador na avaliação de risco coronariano. O resultado maior que 0,0 mg/l deve ser desconsiderado e a PCR deve ser determinada novamente após a resolução do processo. Observações. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados corretos.. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação. 03 Português - Ref.: 335

4 Assim, para preparar reagentes, usar nas medições e para uso no enxágüe final da vidraria, a água deve ter resistividade megaohm.cm ou condutividade microsiemens/cm e concentração de silicatos <0, mg/l. Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água. 3. O valor do calibrador PCR ultra sensível foi estabelecido utilizando o procedimento e o sistema PCR ultra sensível Turbiquest Plus (Ref. 335) conforme descrito nas instruções de uso. A exatidão da calibração poderá não ser adequada quando for utilizado outro sistema de medição. Referências. Pearson TA, Mensah GA, Alexander RW, et al. Circulation, 03, 07: Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults. JAMA 0;85: Apresentação Produto Referência Conteúdo PCR Ultra Turbiquest Plus 335-/50 O volume de reagente em aplicações automáticas depende dos parâmetros de programação de cada equipamento. Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos e semiautomáticos. Informações ao consumidor [Termos e Condições de Garantia] X 40 ml X 0 ml X ml A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto, dentro das especificações, até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas instruções sejam seguidos corretamente. 3. Sociedade Brasileira de Cardiologia. Arq Bras Cardiol, 0; 77 (suppl III): Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponível em:< ticle/ar ticleview/330//70> (acesso em 08/05). 5. Labtest: Dados de arquivo. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Serviço de Apoio ao Cliente (Ligação Gratuita) [email protected] Revisão: Junho, Ref.: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reprodução sob prévia autorização 04 Português - Ref.: 335

5 PROTOCOLO DE AUTOMAÇÃO PARA O LABMAX 40 Item Name DATA INFORMATION # PCUTP CALIBRATION UNITS mg/l TYPE Spline DECIMALS STANDARD *0,05 *0,50 ANALYSIS TYPE END #6 Main W.Length 546 Sub W.length METHOD Turbidimétrico CORR. SLOPE INTER Y = X + 0 NORMAL RANGE Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other LOW MALE HIGH LOW FEMALE HIGH # Posição de a 77 no painel de a concentração do analito para o material calibrador PCR Ultra (Ref ) Item Name # PCUTP ASPIRATION KIND Single Double VOLUME SAMPLE.5 µl REAGENT VOL REAGENT VOL 0 50 µl µl MONITOR Third Mix. OFF ON R Blank Water Blank R-Blank 0 LEVEL POINT SPAN 3 DATA PROCESS READ MAIN SUB FACTOR Blank correction PROZONE CHECK FIRST SECOND THIRD START END ABSORBANCE LIMIT LOW HIGH ENDPOINT LIMIT LINEAR CHECK(%) START END LIMIT(%) Low Low High High Item Name AUTO RERUN SW # PCUTP AUTO RERUN CONDITION (ABSORBANCE) 3 ON OFF Absorbance Range AUTO RERUN RANGE (RESULTS) Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other Lower Higher Lower Higher Prozone Range 05 Português - Ref.: 335

6 06 Português - Ref.: 335