RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi Art. n. : N1122 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D-64297 Darmstadt, Alemanha Phone: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20
1. Finalidade Para diagnóstico in vitro. O RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi é um teste rápido imunocromatográfico para a comprovação qualitativa de Cryptosporidium parvum e / ou Giardia lamblia nas amostras de fezes. 2. Resumo e explicação do teste Giardia lamblia pertence aos flagelos intestinais. Os trofozoides característicamente morfológicos sobrevivem somente por pouco tempo fora do organismo hospedeiro. Os cistos altamente infecciosos servem para a transmissão. Devido à sua grande presença mundial, a Giardia lamblia é uma importante causa de doenças diarréicas, especialmente em questões da medicina de viagem. A infecção aparece após a absorção de cistos em alimentos e água contaminados. Em instalações comunitárias com higiene insuficiente a infecção ocorre principalmente por via fecal-oral de pessoa para pessoa. Esta via de transmissão ocorre muito frequentemente em jardins de infância e creches, bem como em homossexuais masculinos e prisioneiros. Os pais, por sua vez, podem ser infeccionados pelhos filhos. Ao contrário das crianças pequenas, as crianças mais velhas infeccionadas não demonstram sintomas. Porém, os cistos se destacam e podem infeccionar outras pessoas. A Giardiasis (Lambliasis) aparece como diarréia crônica ou aguda. O tempo de incubação é de 3 a 42 dias. O método para diagnosticar a Giardasis mais usado no passado foi a comprovação microscópica de cistos nas fezes, sendo para isso necessário utilizar pessoal experiente. Os exames devem, além disso, devem ser feitos por um período de tempo mais longo, pois a separação dos cistos sofre fortes desvios. Cryptosporidium parvum é um parasita muito comum nos animais e também é um germe importante também presente nos animais domésticos, principalmente em vitelos. Ao contrário do que se pensava antes, também são observadas infecções em humanos em muitos países. O parasita causa muito frequentemente diarréias endêmcias e epidêmicas em crianças de países em desenvolvimento. Em pacientes imunocompetentes, a doença se manifesta como uma gastroenterite autolimitada. A diarréia dura de 3 a 10 dias e pode ser acompanhada de febre e sintomas gastrointestinais, como vômitos e dores, que são simlares aos do Giardiasis (Lambliasis). Mais graves são os sintomas e consequências em pacientes imunoincompetentes, nos quais as diarréias são muito graves e persistentes. A transmissão da infecção pode ser feita do animal para o humano através de água contaminada, mas também de humano para humano. Os membros de instalações comunitárias, crianças nos jardins de infância, bem como os grupos de risco dos homossexuais e portadores de HIV estão especialmente expostos ao risco. O método mais usado no passado para diagnosticar o cryptosporidiosis foi a comprovação microscópica de oocistos nas fezes ou o exame microscópico das amostras biópsicas do intestino delgado, sendo necessário pessoal experiente para ambos. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi 10-08-10 2
Um método alternativo importante ao método microscópico tanto para a comprovação de Giardia lamblia como de Cryptosporidium parvum é o teste rápido imunocromatográfico descrito a seguir, que na sua sensibilidade e especificidade através da tilização de anticorpos monoclonais, é igual aos exames microscópicos. A execução é fácil e rápida e não é necessário utilizar pessoal com formação microbiológica. 3. Princípio do teste O teste rápido disponível é um teste Lateral-Flow imunocromatográfico, no qual anticorpos específicos dispostos contra ambos os parasitas são acoplados a partículas de látex vermelhas (específicas para Giardia) ou azuis (específicas para Cryptosporidium). Outros anticorpos específicos contra ambos os agentea patogênicoa são ligados firmes na membrana. Depois a amostra de fezes é suspensa no tampão de extração e então sedimentada. A tira do teste é mergulhada no supernatante claro da amostra, sendo que esta então passa pela membrana com as partículas coloridas de látex, às quais em caso positivo o antígeno disponível se liga, e se une às tiras de captação específicas. Dependendo do antígeno disponível, na amostra é então visível uma tira azu e/ou vermelha. 4. Conteúdo da embalagem Os reagentes de uma embalagem são suficientes para 25 doses Strip 25 doses Tubos com 25 tiras de teste Diluent 26 ml Tampão de extração, pronto para o uso; contém 0,1 % Azida de sódio Pipet 25 unidades Saco com 25 pipetas descartáveis 5. Reagentes e a sua armazenação A embalagem pode ser armazenada a 2 30 C e deve ser usada até a data de expiração impressa. Após a expiração da data de validade, nenhuma garantia de qualidade pode ser oferecida. O tubo com as tiras do teste contém um desidratante e não deve ser deixado aberto para evitar a humidade. Após cada retirada de tiras do teste a embalagem deve ser cuidadodamente fechada. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi 10-08-10 3
6. Reagentes e equipamentos adicionais necessários - Tubo de amostra para suspensão de fezes - Tubo (opcional: frascos microtítulo não revestidos) para supernatente e suspensão) - Mixer Vortex (opcional) - Micropipeta (200 µl 1000 µl) - Contentor para lixo com uma solução de hipocloreto de sódio de 0,5 % 7. Medidas de precaução Para diagnóstico in vitro Este teste só deve ser efetuado pelo pessoal de laboratório instruído. As regras de trabalho nos laboratórios médicos devem ser observadas. As instruções de uso para a execução do teste devem ser estritamente observadas. O tampão de diluição de amostra contém azida de sódio como conservante. Evitar o contato com a pele ou com as mucosas. Não pipetar as amostras ou reagentes com a boca, evitar o contato com a pele ferida ou mucosas. Durante o manejo de amostras, deve usar luvas descartáveis e, após o término do teste, deve-se lavar as mãos. Nas áreas, nas quais se trabalha com as amostras, não fumar, comer ou beber. Todos os materiais e reagentes, que vêm junto com as amostras potencialmente infecciosas, devem ser manejados com desinfetantes adequados (p. ex. hipocloreto de sódio) ou autoclavados pelo menos 1 hora a 121 C. 8. Coleta e armazenagem das amostras As amostras de fezes devem ser colectadas em frascos limpos sem aditivos e armazenadas antes do teste a 2 8 C. No caso de uma armazenag em de mais de 3 dias, a amostra deve ser congelada a -20 C. Neste caso, a amostra é des congelada totalmente antes do teste e exposta a temperatura ambiente. Deve-se evitar um congelamento e descongelamento repetido das amostras. Se coletas anais forem utilizadas, deve-se observar que material de fezes suficiente (aprox. 50 mg) esteja disponível para o teste. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi 10-08-10 4
9. Execução do teste 9.1. Generalidades Antes da utilização, as amostras, o tampão de extração e a tira do teste devem ser colocados em temperatura ambiente (20 25 C). O tubo com as tiras do teste deve ser aberto só após a temperatura ambiente ter sido alcançada e deve ser fechado após a retirada das tiras de teste necessárias. As tiras do teste não podem ser usadas mais de uma vez. A luz do sol direta durante a execução do teste deve ser evitada. O reagente restante não deve ser colocado de volta nos vasos, pois isto pode levar a uma contaminação. 9.2. Preparação das amostras Em um tubo de amostra marcado, é colocado 1 ml de tampão de extração Diluent. No caso de amostras de fezes líquidas, 100 µl destas (um pouco acima do segundo espessamento) com a pipeta descartável Pipet no tampão disponível. No caso de amostras de fezes sólidas, 50 mg são suspensos no tampão. Depois, a amostra deve ser bem homogenizada. Isto é feito através de absorção múltipla e batida da suspensão com a pipeta descartável Pipet ou alternativamente através da mistura em um mixer Vortex. Após isso, deixar sedimentar a suspensão homogênea pelo menos por 3 minutos até que um supernatante claro se forme, do qual então pelo menos 200 µl até um máximo de 500 µl é passado para um outro tubo limpo (ou frasco microtítulo não revestido). 9.3. Teste das amostras A tira de teste Strip é retirada do tubo e mergulhada na amostra preparada. A tira de teste deve ser mergulhada somente até a linha marcada com uma seta. Após 5 minutos o resultado do teste deve ser lido. 10. Controle de qualidade Sinais de expiração do reagente O teste só deve ser avaliado se a tira de teste estiver intacta antes da colocação na suspensão de amostras produzida e não se pode ver modificações ou titas coloridas. Além disso, após a incubação do teste, pelo menos a tira de controle verde deve ser visível. Se ela não aparece, antes de repetir o teste deve-se verificar o seguinte: - Durabilidade das tiras de teste e do tampão de extração utilizado - Execução correta do teste - Contaminação do tampão de extração Se após a repetição do teste com uma nova tira de teste a tira de controle não for visível, entre em contato com o fabricante. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi 10-08-10 5
11. Avaliação e interpretação Só podem aparecer três tiras, vistas da posição de coleta da amostra na seguinte sequência: uma tira azul, uma vermelha e uma verde (tira de controle). Se faltar a tira de controle verde o teste não é avaliável e é inválido! As seguintes interpretações são positivas: - Cryptosporidium positivo : tiras azul e verde são visíveis. - Giardia positivo : tiras vermelha e verde são visíveis. - Cryptosporidium e Giardia positivo : tiras azul, vermelha e verde são visíveis. - Negativo : somente a tira verde é visível. - Inválido : nenhuma tira visível ou uma constelação diferente daquela descrita, bem como outras colorações nas tiras. Do mesmo modo, as colorações das tiras que só aparecem após 10 minutos ou depois não têm valor diagnóstico e não devem ser avaliadas. 12. Limites do método O RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi comprova antígenos de Cryptosporidium parvum e / ou Giardia lamblia nas amostras de fezes. Uma relação entre a intensidade das tiras específicas visíveis e dos sintomas presentes ou altamente clínicos não pode ser ignorada aqui. Os resultados alcançados devem sempre ser interpretados em conjunto com o quadro clínico. Um resultado positivo não exclui a presença de outros agentes patogênicos. Um resultado negativo não exclui uma possível infecção com Cryptosporidium ou Lamblia. Ele pode ter sido causado pela segregação do agente patogênico ou por uma quantidade muito pequena de antígeno na amostra. Se houver de forma anmnéstica a suspeita fundada de uma infecção com o agente patogênico procurado, uma outra amostra de fezes do paciente deve ser examinada. Uma quantidade demasiada de amostra de fezes pode causar tiras marrons ao invés das tiras coloridas com as cores específicas. Estas tiras marrons não têm valor diagnóstico. Nestes casos, é necessário fazer um novo teste com uma quantidade menor de fezes ou uma outra diluição da suspensão já preparada (supernatante claro após a sedimentação), para verificar se o agente patogênico procurado está na amostra ou se foi introduzido em excesso através de quantidade demasiada de matriz de fezes. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi 10-08-10 6
13. Características de desempenho 13.1. Estudo clínico comparativo Em um laboratório de rotina, foi feito um exame comparativo, tanto em amostras de fezes frescas como em amostras congeladas, entre RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi e a microscopia ali estabelecida com 70 amostras de fezes (respectivamente 15 Cryptosporidium parvum positivos e Giardia positivos bem como 40 amostras negativas para cada agente patogênico). Os resultados estão resumidos na tabela 1 e 2. Tab. 1: Comparação do RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi com microscopia na avaliação exclusiva das tiras específicas do Cryptosporidium Microscopia RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi + - + 14 1-0 40 Sensibilidade : 93,8 % pos. Valor previsto : 100,0 % Especificidade: 100,0 % neg. Valor previsto : 97,5 % Tab. 2: Comparação do RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi com microscopia na avaliação exclusiva das tiras específicas do Giardia Microscopia RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi + - + 15 0-2 38 Sensibilidade : 100,0 % pos. Valor previsto : 88,2 % Especificidade: 95,2 % neg. Valor previsto : 100,0 % RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi 10-08-10 7
13.2. Atividade cruzada Nenhum dos parasitas intestinais descritos abaixo levaram a uma reação cruzada em RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi: Entamoeba coli Blastocystis hominis Jodamoeba bütschlii Chilomastix mesnili Endolimax nana Ovos de Taenia spp. RIDA QUICK Cryptosporidium/Giardia Combi 10-08-10 8
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