ZytoDot CEN 17 Probe C-3006-400 40 (0,4 ml) Para a deteção dos satélites alfa humanos do cromossoma 17 por meio de hibridação in situ cromogénica (CISH).... Para utilização em diagnóstico in vitro em conformidade com a Directiva 98/79/CE
Sonda polinucleotídica marcada com digoxigenina para a deteçã ção dos satélites alfa humanos do cromossoma 17 por meio de CISH, pronta a usar Descrição do Produto Conteúdo: Produto: Especificidade: Armazenamento/ Estabilidade: Utilização: Precauções de Segurança: ZytoDot CEN 17 Probe EmaPF em tampão de hibridação. Esta sonda é constituída por polinucleótidos marcados com digoxigenina, dirigidos contra sequências do satélite alfa do centrómero do cromossoma 17. C-3006-400: 0,4 ml (40 reações de 10 µl) A sonda ZytoDot CEN 17 Probe EmaPF destina-se à deteção dos satélites alfa do cromossoma 17 em amostras de células fixadas em formol ou em amostras de tecido fixadas em formol e incluídas em parafina, mediante hibridação in situ cromogénica (CISH). A sonda ZytoDot CEN 17 Probe EmaPF tem de ser armazenada à temperatura de 2 8 C e é estável até ao prazo de validade impresso no rótulo. Este produto é concebido para utilização em diagnóstico in vitro (em conformidade com a Directiva 98/79/CE). A interpretação dos resultados deve ser efectuada por um patologista qualificado dentro do contexto do historial clínico do paciente, tomando em consideração outros dados do paciente de natureza clínica e patológica! Leia as instruções de utilização antes de usar o produto! - 1 -
Não utilize reagentes com prazo de validade expirado! Este produto contém substâncias prejudiciais à saúde em concentrações e volumes baixos. Evite qualquer contacto direto com os reagentes. Tome medidas de proteção adequadas (use luvas descartáveis, óculos protetores e roupa de laboratório)! No caso de contacto direto de qualquer um dos reagentes com a pele, lave as áreas afectadas imediatamente com água em abundância! A ficha de segurança está disponível, a pedido, para o utilizador profissional! Princípio do Método A presença de certas sequências de ácidos nucleicos em células ou tecidos pode ser detetada por meio de hibridação in situ com o auxílio de sondas de ADN marcadas. A hibridação resulta na formação de cadeias duplas entre as sequências de ácidos nucleicos presentes no material a ser examinado e a sonda de ADN específica. A formação de cadeias duplas da sonda marcada (com sequências de satélites alfa do cromossoma 17 no material teste) pode ser visualizada com um anticorpo primário (não marcadao) anti-digoxigenina, que é detetado por um anticorpo secundário polimerizado e conjugado a uma enzima. A reação enzimática de um substrato cromogénico conduz à formação de um precipitado colorido, o qual pode ser visualizado usando um microscópio ótico. - 2 -
Instruções O pré-tratamento (desparafinação, proteólise, pós-fixação) deve ser feito de acordo com as necessidades do utilizador. Desnaturação e hibridação da sonda: NK Agitar a sonda ZytoDot CEN 17 Probe EmaPF utilizando um vortex e pipetar 10 µl em cada amostra individual Distribuir o volume pipetado por toda a área da amostra para evitar a concentração local da sonda. Alternativamente, pipetar a sonda no centro de uma lamela e colocar sobre esta a lâmina invertida. O aquecimento ligeiro da sonda, assim como, a utilização de uma pipeta cortada na ponta para aumentar o tamanho da abertura, podem facilitar a pipetagem da sonda. OK Cobrir as secções das amostras com uma lamela (22 mm x 22 mm) evitando a formação de bolhas de ar. Selar a lamela, por exemplo, com uma camada de cola quente aplicada usando uma pistola de cola ou, alternativamente, com uma camada de cola vulcanizante (Fixogum) PK= Desnaturar as lâminas durante 5 min a 94-95 C utilizando, por exemplo, uma placa aquecida QK= Transferir as lâminas para uma câmara húmida e hibridizar durante a noite a 37 C (por ex. numa estufa) É fundamental que as amostras de tecido/células não sequem durante a hibridação. Os passos seguintes, como lavagem, deteção e coloração de contraste, podem ser completados de acordo com as necessidades do utilizador. Para uma performance particularmente acessível recomendamos a utilização de um sistema ZytoDot CISH da ZytoVision. Estes sistemas são também utilizados para confirmação da adequação da sonda ZytoDot CEN 17 Probe EmaPF. - 3 -
Resultados Num núcleo interfásico de células normais e em células sem modificações do cromossoma 17, aparecem dois sinais puntiformes específicos do cromossoma 17 que podem ser claramente distinguidos do fundo. Em células com aneuplóidia do cromossoma 17 visualiza-se um padrão diferente em interfase. Devido à mitose, poderão também ser visíveis sinais adicionais numa percentagem diminuta de células não neoplásticas. Ocasionalmente, podem ser observados núcleos celulares sem sinais em amostras de tecido incluídas em parafina. De forma a avaliar a especificidade dos sinais obtidos, cada teste deve ser acompanhado por controlos. Recomendamos a utilização de pelo menos uma lâmina de controlo na qual o número de cópias do cromossoma 17 seja conhecido. Os nossos especialistas estão disponíveis para responder às suas questões. - 4 -
Literatura Isola J, Tanner M (2004) Methods Mol Med 97: 133-44. Speel EJ, et al. (1994) J Histochem Cytochem 42: 1299-307. Tsukamoto T, et al. (1991) Int J Dev Biol 35: 25-32. Waye JS, Willard HF (1987) Nucleic Acids Res 15: 7549-69. Wilkinson DG: In Situ Hybridization, A Practical Approach, Oxford University Press (1992) ISBN 0 19 963327 4. Versão: 20 de Janeiro de 2012 (5.0) Marca registrada: ZytoVision e ZytoDot são marcas registadas da sociedade limitada ZytoVision GmbH. - 5 -